小鼠白介素-6 ELISA检测试剂盒
日本IBL (编号:27768)

前言简介
白介素6是一种细胞因子,已被证实为B细胞分化因子.它是一种抗体形成系统,它的生理特性,如肝细胞急性蛋白合成的诱导和基于和白介素3协同作用的生长刺激等,也备受关注. 并且已证实白介素-6与病理学存在稳定的相关关系.例如,报道多种疾病的生长因子为白介素-6, 骨髓瘤细胞能合成白介素-6并表达白介素-6受体.此外, 白介素6在多种炎性疾病和自身免疫疾病发挥重要的作用.
此试剂盒能高灵敏度的检测小鼠血液和细胞基质上清的白介素6
原理
此试剂盒运用了两种特异性抗体,洗板后加入TMB底物液显色,显色的强度与小鼠的白介素-6的量成正比.

检测范围
10.94 ～ 700 pg/mL

预期用途

■此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中白介素-6的定量检测


试剂盒成分
1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T
2 酶标记抗体:
(30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1
3 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2
4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1
5 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1
6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1
7 终止液: 1N硫酸 12mL x 1
8 浓缩洗涤液:
 (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1


操作说明
1实验所需器材(但试剂盒没有提供)
酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴
量筒及烧杯 去离子水
冰箱(4°C) 坐标纸(log/log)
吸水纸 试管(用于标准品稀释)
温育箱(37°C ± 1°C)
洗瓶 (用于洗板)
一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)
2准备

• 洗涤液的准备

试剂盒的洗涤液是一种40倍浓缩液, 稀释前,将浓缩液平衡至室温.用1950 mL去离子水稀释50 mL的浓缩洗涤液,制成2000mL即用稀释洗涤液. 置于冰箱内可保存2周.

• 酶标记抗体的准备

试剂盒中的标记抗体是一种30倍浓缩物,根据所需量,用标记抗体稀释液稀释30倍.
示例:
如果你用一条板(8孔),就需800 μL.的标记抗体.就用870 μL的标记抗体稀释液稀释30 μL抗体浓缩液,充分混匀.并每孔各加100 μL
浓缩酶标记抗体需稀释后才能用于实验
剩余的稀释标记抗体液需密封瓶装,存于4°C

• 标准品的准备

加0.5 mL的去离子水到瓶装标准品,制成浓度为1,400 pg/mL小鼠白介素-6标准品液

• 标准品的稀释

准备8支试管,并每支各加230 μL EIA缓冲液.稀释成如下浓度,步骤如下图所示:
试管1 700 pg/mL
试管2 350 pg/mL
试管3 175 pg/ mL
试管4 87.5 pg/mL
试管5 43.75 pg/mL
试管6 21.88 pg/mL
试管7 10.94pg/mL
试管8 0 pg/mL(样品空白对照)
吸取230ul的标准品液于1号管混匀，然后从1号管吸取230ul加入2号管混匀，如下图所示,按此规律稀释，系列标准品浓度范围为10.94-700 pg/mL,第8号管为0 pg/mL作为样品空白对照.................
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特别注意

• 收集样品后即尽快检测. 如需保存, 冻存样品,但要避免反复冻融.检测前,将样品解冻至室温
• 如样品需稀释,用EIA缓冲液稀释
• 样品和标准品建议做双份检测
• 保持样品处于中性PH范围.有机溶剂的污染会影响实验结果
• 只能用本试剂盒提供的洗涤液洗板.不充足的洗板会导致错误的结果
• 在吸水纸上拍干去除残留液滴时,切勿用吸水纸刮擦孔内壁
• 显示剂应避光保存并避免与金属物质接触
• 加终止液后,30 min内就应读取实验结果

使用及处理常规事项
1所有试剂置于2 - 8°C保存.实验前将试剂平衡至室温(约30分钟)
2瓶装标准品是冻干品,故小心打开瓶盖
3终止液是强酸物质.使用时,避免其接触皮肤和衣服
4弃置用过的物质前,用水冲洗
5 浓缩酶标抗体,EIA缓冲液和浓缩洗涤液可能会出现沉淀,但这并不会影响实验
6使用试剂后应洗手
7切勿混用不同批号的试剂
8别使用过期的试剂
9试剂盒仅供研究用,不能用于临床诊断

存储与有效期
存储条件: 2 - 8°C
有效期见试剂盒外包装