特别提示：包括LAMP试剂盒(含染料)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：LAMP试剂盒(含染料)
英文名称：Loop-mediated isothermal amplification Kit(With visible light dye)
产品货号：MT0030
产品规格：50T|200T

LAMP(环介导等温扩增技术)是一种新型核酸扩增技术，采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖于Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30～60分钟内DNA扩增可达10⁹～10¹⁰倍。本试剂盒含有可见光染料，阳性扩增样品的颜色为天蓝色，阴性扩增为紫罗兰色。购买本试剂盒，我们可以免费为客户设计引物，需要设计引物的请发Email咨询。

产品特点：
1．检测方便：变色反应，颜色变化明显，肉眼即可观察。
2．操作简单：一步反应30分钟即可完成。
3．特异性高：六条特异性引物，保证了产物的特异性和检测的可靠性。
4．仪器简单：只需维持恒温的水浴锅。
5．灵敏度高：能从极低拷贝中扩增靶基因。
6．应用广泛：广泛适用于微生物致病菌检测和疫病检测。

产品组成：

组分	50T	200T
10×可见光染料	150μl	1ml
10×LAMP Buffer	1ml	1ml
100 mM MgSO4	500μl	500μl
10 mM dNTP Mixture	500μl	1ml
Bst DNA Polymerase 2.0	50μl	200μl

注意：10×LAMP Buffer中的Mg2+浓度为60 mM。

保存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期3年。

反应实例：

应用本试剂盒和6条引物扩增HHV-6 DNA，产物分别可见光染料显色观察和电泳法检测

使用方法：
1．按以下组分配置反应混合液：

加入物	加入量
10×LAMP Buffer	2.5μl
10×可见光染料	2.5μl
10mM dNTP Mixture	2μl
模板 DNA	Xμl
*10×LAMP Primer Mix	2.5μl
Bst DNA Polymerase 2.0	1μl
ddH2O	Up to 25μl

*10×LAMP Primer Mix：FIP/BIP 16μM each，Loop F/R 8μM each，F3/B3 2μM each
2．反应体系配好后，充分混匀并短暂离心，65℃ 30分钟。

注意事项：
1．为了减少交叉污染，请分区操作（试剂和模板DNA的配置操作zuì好在不同区域中进行）。
2．实验时，所需模板量取决与样品类型（0.1ng～100ng），可先进行预实验确定模板量。
3．10×LAMP Buffer中含有60 mM MgSO4，反应体系中Mg2+终浓度为6 mM。通常无需添加即可，必要情况下可提高到10～16mM。
4．各区物品均为专用，不可交叉使用，防止污染。
5．实验过程中应穿工作服，带手套，建议使用带滤芯的一次性吸头。


除了LAMP试剂盒(含染料),，我公司还供应以下相关产品：



名称：可调式易错PCR试剂盒
货号：BTN160903
规格：100次
易错PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校对功能的特性，在一定条件下(如不同的dNTP浓度、Mg浓度和MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。易错PCR和常规PCR的比较如下：


产品特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，实验人员在一定范围内可以控制突变率，一轮PCR的突变率范围在2-8突变/1000bp，更高的突变率可以通过多轮PCR达到。
3.可用于连续易错PCR，只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
4.可以扩增的DNA片段更长，达到3kb，对于3kb以上的产物，建议分段扩增。

试剂盒组成：

成分	规格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易错PCR专用dNTP 2.0,10×	300μl
易错PCR Mix 2.0,10×	300μl
易错PCR专用MnCl2	300μl
易错PCR专用dGTP	300μl
超纯水	1ml

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为一年。

使用方法：

1. 将模板DNA稀释到1ng/uL。将引物稀释到10uM。
 注意：引物是决定易错PCR成败的关键因素，设计引物时要保证其Tm在70℃，长度在25-30nt之间，GC含量在45%-60%之间，3端GC含量低，并且没有发夹结构。
2. 根据每1000bp的预期突变数按下表确定易错PCR的反应条件中MnCl2和dGTP的用量。表中的A表示易错PCR专用的MnCl2，B表示易错PCR专用的dGTP：

预期突变数	2个	3个	4个	5个	6个	7个	8个
A的用量(μl)	0	1.0	2.5	4.0	4.0	4.0	4.0
B的用量(μl)	0	0	0	1.0	2.0	3.0	4.0

3.以30μL的标准PCR反应体系为例，如果反应体系不是30μL，各成分需要按等比例增加或减少。在一干净的PCR管中，加入下列成分
 注意：可以先计算出超纯水的用量，优先加水

成分	用量
超纯水	根据第2步加
易错PCR Mix,10×	3μl
易错PCR 专用dNTP，10×	3μl
易错PCR 专用MnCl2	根据上步
易错PCR 专用dGTP	根据上步
自备DNA模板(1ng/μl)	1μl
自备PCR引物(10μM each)	1μl each
Taq DNA聚合酶(5U/μl)	1μl

4. 按已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR(循环数与突变率的关系见下表)，然后取5μL电泳检查。如果没有优化的PCR条件，一般可以先尝试下面的PCR条件(对1Kb长的模板而言)：

PCR前变性	94℃ 3分钟
易错PCR(循环30次)	94℃ 1分钟
	45℃ 1分钟
	72℃ 1分钟

注：易错PCR一般不需要热启动，也不需要在PCR结束后做延伸处理。长度每增
加1Kb，时间延长1分钟。易错PCR循环次数决定每个核苷酸位置的突变几率，进而决定每个PCR产物可能的突变位点数，所以所需循环数由客户根据需要改动。
5.电泳检测是否得到预计长度的PCR产物。
6. 克隆片段进行功能筛选、或者克隆后进行测序分析突变率、或者用此轮PCR的产物为模板，进行下一轮的易错PCR。

疑难解答：
Q：现象：没有PCR产物。
A：可能原因：一是引物没有优化，可以重新设计引物；二是模板DNA太少，可以增加用量；三是模板不纯，zuì好先胶回收；四是溶解DNA的溶液中有EDTA，降低了PCR反应体系的Mg离子浓度，可以适当补加Mg离子。
Q：现象：太多的PCR条带或PCR条带模糊一片。
A：可能原因：一是PCR循环数太多；二是复性温度太低；三是延伸时间太长；四是引物没有优化，可以重新设计引物；五是PCR条件没优化，可以使用touch-down PCR；六是模板有其他DNA污染；七是DNA模板质量不高或者浓度太高。
Q：如果需要更高的突变率，如何办？
A：可以使用连续多次易错PCR来提高突变率。但zuì好先用胶纯化回收PCR片段,再用于下一轮易错PCR。此外不能用少于千分之一的第一次PCR产物作为第二轮易错PCR的模板，否则多样性将受到影响。第三轮易错PCRzuì好使用所有第二轮的PCR产物作为模板，但需要在10mL体系中完成(可以分成很多100μL体系进行)。