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- 上海博湖生物科技有限公司
- 卡他莫拉菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书
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博湖
进口、国产
2021-11-12 16:24
我要认领上海博湖生物科技有限公司
韩丽君
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产品属性
产品说明
实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性定量方法，已得到全世界的公认，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。服务流程:
1.客户认真写好订单，提供待检基因相关信息；
2.签订技术服务合同，支付预付款（30-50%)；
3.设计合成定量PCR引物（或客户提供文献引物委托本公司合成）；
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反转录；
5.PCR预实验，主要检测引物的特异性和扩增效率；
6.正式定量实验：对所有样品上机检测；
7.实验结果和数据分析，形成报告。
荧光化学物质：
卡他莫拉菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下：
1. TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分析基因突变（SNP），有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。
2. SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。SYBR仅与双链DNA进行结合，因此可以通过溶解曲线，确定PCR反应是否特异。
3. 分子信标：是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针，两端的核酸序列互补配对，导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近，不会产生荧光。PCR产物生成后，退火过程中，分子信标中间部分与特定DNA序列配对，荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 。荧光定量PCR服务：
公司推出，该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务，全部实验皆使用进口试剂完成，主要定量PCR仪器。
1、荧光定量PCR服务要求：
（01）请您提供新鲜的且尽量多的材料；或直接提供纯化好的总RNA（大于 5 ug/样品）；或直接提供纯化好的DNA（大于 5 ug/样品）。
（02）请提供已知的全长基因序列。
（03）请提供尽可能详细的背景资料：DNA/RNA 来源等
2、荧光定量PCR操作程序
（01）引物（探针）设计与合成。
（02）提取DNA/RNA，样本逆转录成cDNA。
（03）进行Real Time PCR实验，进行实验结果分析。
（04）实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。
3、荧光定量PCR的收费标准：
我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。桃仁(山桃) Peach(Prunus) 1g梣同Frcxinqllonq8808-6-0HPLC≥98%，20mg/vial石蜡样品基应组DNA提取试剂盒暂不提供暂不提供暂不提供 15次，30次红外鉴别甲磺酸加替沙星130536-2003012-8℃，避光100mg升麻醇-3-O-β-D-木糖苷;升麻环氧醇苷 Cimigenol-3-O-β-D -xylpyranoside 27994-11-2 20mg HPLC≥98% 用于含量测定莪术油 Zedoary turmeric oil 0.2ml五味子醇SchizandrolA743-8-20mgXanthotoxol 花椒毒酚 2009-24-7Acetazolamide乙酰唑胺标准品59-66-52g乙酰唑胺标准品三尖杉碱;Cephalotaxlen 24316-19-6 20mg 订购|咨询63-74-1 磺胺磺胺标准品 5g罗汉果皂苷ⅢeMomordicagrosvenoriIIIe88901-37-2HPLC≥98%,10mg/支Robinetin 洋槐黄素 490-31-3头孢丙烯ea头孢丙烯贝母辛;peimisine 19773-24-1 20mg 订购|咨询人胚肺细胞VA13细胞;WI-38 VA13亚系2RA人前脂肪细胞-内脏RNAHPA-v miRNA5 μgCSF1 Others Mouse 小鼠 M-CSF / CSF-1 人细胞裂解液 (阳性对照)兔主动脉平滑肌细胞;SMC 白血病细胞，L1210细胞 SH2细胞，小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞人少突胶质细胞HA Others H16N3 甲型流感 H16N3 (A/black-headed gull/Sweden/5/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (小气道上皮细胞培养基SAEpiCMCLEC10A Others Human 人 CLEC10A / MGL1 / CD301 人细胞裂解液 (阳性对照)大鼠肺大静脉内皮细胞完全培养基 100mLTOV21G人卵巢癌细胞 Human ovarian cancer cell line TOV21G 1640+10FBS%NRG1 Protein Human 重组人 NRG1-beta 1 蛋白 (ECD)MX-1(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2 腮腺细胞Many types of cel卡他莫拉菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书人胚肺细胞VA13细胞;WI-38 VA13亚系2RA人前脂肪细胞-内脏RNAHPA-v miRNA5 μgCSF1 Others Mouse 小鼠 M-CSF / CSF-1 人细胞裂解液 (阳性对照)兔主动脉平滑肌细胞;SMC 白血病细胞，L1210细胞 SH2细胞，小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞人少突胶质细胞HA Others H16N3 甲型流感 H16N3 (A/black-headed gull/Sweden/5/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照)通用原则：
1， 先选择好探针，然后设计引物使其尽可能的靠近于探针。
2， 扩增子的长度应不超过400bp，理想的最好能在100－150bp内，扩增片断约短，有效的扩增反应就越容易获得。较短的扩增片断也容易保证分析的一致性
3， 保持GC含量在20％和80％之间，GC富含区容易产生非特异反应，从而会导致扩增效率的降低，及在SG分析中非特异信号。
4， 为了保证效率和重复性，应避免重复的核苷酸序列，尤其是G（不能有4个连续的G）
5， 将引物和探针互相进行配对检测，以避免二聚体和发卡结构的形成。
b），探针设计指导
1，在设计引物之前设计探针
2，探针的Tm值应在68－70℃之间，如果是目测探针，则要仔细审查GC富含区。
3，探针的5’端要避免有鸟氨酸，5’G会有淬灭作用，即使被切割下来这种淬灭作用也还会存在
4，选择C多于G的链作探针，G的含量多于C会降低反应效率，这时就应选择配对的另一条链作为探针。
6， 探针应尽可能的短，不要超过30个bp。
7， 检测探针的DNA折叠和二级结构。 
