ELISA实验中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物。完整的鸡弓形虫循环抗原(TCA)检测试剂盒应该包含以下各组分:
(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);
(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);
(3)酶的底物;
(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中);
(5)结合物及标本的稀释液;
(6)洗涤液;
(7)酶反应终止液。
一、免疫吸附剂
已包被抗原或抗体的固相载体在低温(2~8℃)干燥的条件下一般可保存6个月。有些不完整的试剂盒,仅供应包被用抗原或抗体,检测人员需自行包被。以下简述固相载体和包被过程。
鸡弓形虫循环抗原(TCA)检测试剂盒实验步骤
一、预试验
(一)抗体包被的酶标板的制备
1.以碳酸盐缓冲液将抗体稀释成适当浓度(参考:5ug/ml),加入酶标板(50ul/孔),以胶带封口,于4℃过液。
2.弃抗体液,以双蒸水冲洗3次,自然干燥后以胶带封口。此为由已知抗体包被的酶标板,备用。
(二)底物浓度的摸索
在底物缓冲液中加入不同量的底物(参考:5mg/10ml),加入酶标板中(50ul/孔),以胶带封口,37℃避光保存2h,在没有明显变色的条件下选择尽可能大的底物浓度。
(三)酶标抗原浓度的摸索
选择明确为阴性的标本,加至已包被抗体的酶标板中(50ul/ 孔);用稀释液稀释酶标抗原至适当倍数(参考:40~4000倍),同时加入酶标板中(50ul/ 孔),混合后封口后于37℃作用30min。以洗液连续冲洗5次,然后于吸水纸上拍干,加入已摸索好的底物封口后于37℃作用30min,在保持有明显变色的条件下选择尽可能小的酶标抗原浓度。
二、鸡弓形虫循环抗原(TCA)检测试剂盒正式试验
1. 以稀释液将待检标本做适当稀释(预试中确定)加入包被有已知抗原的酶标板中(50ul/孔),加封口胶带于37℃作用30min。
2. 弃反应液,以冲洗液连续洗板5次并于吸水纸上拍干。
3. 加入酶标抗体(浓度在预试中确定)。加封口胶带后于37℃作用30min。
4. 重复第2步。
5. 加底物(浓度在预试中确定),加封口胶带后于室温下避光作用5-60 min,其间不时观察,显色满意后加终止液50ul/孔。
6. 于酶标仪测定OD值,OPD用492nm测定,TMB用450nm测定。
鸡弓形虫循环抗原(TCA)检测试剂盒相关产品如下:ybB234Hu 人杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Bactericidal/Permeability Increasing Protein (BPI)
ybB236Hu 人纤溶酶原(Plg)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Plasminogen (Plg)
ybB237Hu 人纤维蛋白肽A(FPA)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Fibrinopeptide A (FPA)
ybB238Hu 人酰化刺激蛋白(ASP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Acylation Stimulating Protein (ASP)
ybB239Hu 人角蛋白19(KRT19)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Keratin 19 (KRT19)
ybB240Hu 人角蛋白20(KRT20)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Keratin 20 (KRT20)
ybB241Hu 人Kruppel样因子4(KLF4)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Kruppel Like Factor 4, Gut (KLF4)
ybB242Hu 人ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for ATP Binding Cassette Transporter A1 (ABCA1)
ybB244Hu 人利钾尿肽(KP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Kaliuretic Peptide (KP)
ybB243Hu 人心型脂肪酸结合蛋白(FABP3)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Fatty Acid Binding Protein 3, Muscle And Heart (FABP3)
ybA688Hu 人TGFβ诱导早期应答基因1(TIEG1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for TGF Beta Inducible Early Response Gene 1 (TIEG1)
ybB248Hu 人胸腺表达趋化因子(TECK)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Thymus Expressed Chemokine (TECK)
ybB252Hu 人雄激素受体(AR)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Androgen ReHZptor (AR)
ybB254Hu 人血管抑素(ANG)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Angiostatin (ANG)
ybB256Hu 人基质金属蛋白酶26(MMP26)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Matrix Metalloproteinase 26 (MMP26)
ybA650Hu 人26S-蛋白酶体(26S-PSM)ELISA试剂盒 ELISA Kit for 26S-Proteasome (26S-PSM)
ybB258Hu 人谷氨酸脱羧酶2(GAD2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Glutamate Decarboxylase 2, Acid (GAD2)
ybB264Hu 人胰岛素自身抗体(IAA)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Insulin Autoantibody (IAA)
ybB265Hu 人胰多肽(PP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Pancreatic Polypeptide (PP)
ybB266Hu 人胰高血糖素(GC)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Glucagon (GC)