¥800 - 4500
西格
进口、国产
2021-11-18 11:33
我要认领秋天
qlj@chembj.com
产品属性
| 细胞形态 | CM2-1培养液中，贴壁，上皮样细胞，不规则形 |
产品说明
操作步骤：
收到人非小细胞肺癌细胞价格后，在倒置镜下(zui好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。
（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换8-10ml新鲜培养液后继续培养。
(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：
1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。如果没有特别说明，收到细胞后的*次传代一般是一传二。| 产品名称 | 人非小细胞肺癌细胞价格 |
| 种属 | NCI-H23 |
| 编号 | XG-X3764 |
资源名称 人非小细胞肺癌细胞价格
种属：NCI-H23类型：贴壁生长形态：CM2-1培养液中，贴壁，上皮样细胞，不规则形分离基物：该细胞源于一位51岁患有非小细胞肺癌黑人男性患者的治疗前的肿瘤组织，提供形式：复苏形式：T25培养瓶1瓶；或者冻存形式：2ml冻存管2支，干冰费另计。安全等级：1模式：菌株未知应用领域表达C-myc、L-myc、v-src、v-abl、v-erb B、c-raf 1、Ha-ras、Ki-ras、N-ras RNAs；该细胞携带K-ras 12突变；p53基因246位密码子突变ATC→ATG；表达PDGF A和B链的异源mRNA；表达TGFα、TGFβ和EGFR；角蛋白 5、8和18阳性，波形蛋白阳性，神经丝蛋白阴性，左旋多巴脱氢酶阴性；据报道，在软琼脂中该细胞形成克隆的效率为9.7%。培养方法传代方法：将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约2min取出。传代用12mL CM2-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；生长条件：37℃，5%CO2，CM2-1培养液。CM2-1培养液：90%RPMI-1640+10%FBS。RPMI-1640：1640培养液，含谷氨酰胺。存储条件：冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。
细胞处理方法：
以下细胞处理方法及细胞说明书仅供参考，具体操作还需要根据到货时细胞密度，细胞生长状态等具体情况，酌情处理，如需要更详细技术指导，请及时电话或邮件联系。
一．贴壁细胞
客户接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。
肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。
显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。
严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
1000rpm,5min离心，重悬细胞。换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2 培养。
二．悬浮细胞
1. 接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。
2. 肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。
3. 严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒）。
5. 1000rpm,5min离心，重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，37℃,5%CO2 培养细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM，常温条件下离心5分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，吹打均匀后，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO摇匀后进行冻存。
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