129小鼠ES细胞,D3细胞服务简介
细胞转染即把核酸导入细胞。常规转染技术分为两类：瞬时转染和稳定转染。瞬时转染外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平表达，通常可持续几天（1-3天）。稳定转染需要通过一些选择性标记来进行反复筛选得到稳定转染的同源细胞系。目前使用最广泛的是脂质体介导法，另有很多商品化的转染试剂可供选择。
129小鼠ES细胞,D3细胞技术方法

转染方法	原理	应用	特点
磷酸钙法	磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞	稳定转染，瞬时转染	不适用于原代细胞，转染效率高，对细胞毒性小，但技术要求很高
电穿孔法	高脉冲电压破坏细胞膜电位，DNA通过膜上形成的小孔导入	稳定转染，瞬时转染	简单，可重复性高 对129小鼠ES细胞,D3细胞有毒副作用  转染时需除血清
阳离子脂质体法	带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞	稳定转染，瞬时转染	适用性广，转染效率高，重复性好，转染时需除血清。转染效果随细胞类型变化大
病毒介导法	通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中	稳定转染	用于难转染的细胞，原代细胞，体内细胞等

129小鼠ES细胞,D3细胞技术步骤
①将对数生长期的细胞浓度调整为1~10×104细胞/ml，按103~104个细胞接种于96孔板，每孔100 μl； 
②培养细胞24小时后，对其进行不同处理，每个处理设三个平行对照； 
③（MTT法）：适当培养时间后，取出细胞，倒掉培养液，每孔加入5 mg/ml新鲜配制的MTT溶液，温育4小时，再次倒掉上清液，每孔加入200 ml DMSO，摇匀后，酶标仪检测吸光值。 
（台盼蓝拒染法）：适当培养时间后，收集细胞，经台盼蓝染色，在倒置显微镜下计数蓝染及不染色细胞，计算细胞存活率。 
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