ELISA实验中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物。完整的猪血小板衍生生长因子(PDGF)检测试剂盒应该包含以下各组分:
(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);
(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);
(3)酶的底物;
(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中);
(5)结合物及标本的稀释液;
(6)洗涤液;
(7)酶反应终止液。
一、免疫吸附剂
已包被抗原或抗体的固相载体在低温(2~8℃)干燥的条件下一般可保存6个月。有些不完整的试剂盒,仅供应包被用抗原或抗体,检测人员需自行包被。以下简述固相载体和包被过程。
猪血小板衍生生长因子(PDGF)检测试剂盒实验步骤
一、预试验
(一)抗体包被的酶标板的制备
1.以碳酸盐缓冲液将抗体稀释成适当浓度(参考:5ug/ml),加入酶标板(50ul/孔),以胶带封口,于4℃过液。
2.弃抗体液,以双蒸水冲洗3次,自然干燥后以胶带封口。此为由已知抗体包被的酶标板,备用。
(二)底物浓度的摸索
在底物缓冲液中加入不同量的底物(参考:5mg/10ml),加入酶标板中(50ul/孔),以胶带封口,37℃避光保存2h,在没有明显变色的条件下选择尽可能大的底物浓度。
(三)酶标抗原浓度的摸索
选择明确为阴性的标本,加至已包被抗体的酶标板中(50ul/ 孔);用稀释液稀释酶标抗原至适当倍数(参考:40~4000倍),同时加入酶标板中(50ul/ 孔),混合后封口后于37℃作用30min。以洗液连续冲洗5次,然后于吸水纸上拍干,加入已摸索好的底物封口后于37℃作用30min,在保持有明显变色的条件下选择尽可能小的酶标抗原浓度。
二、猪猪血小板衍生生长因子(PDGF)检测试剂盒正式试验
1. 以稀释液将待检标本做适当稀释(预试中确定)加入包被有已知抗原的酶标板中(50ul/孔),加封口胶带于37℃作用30min。
2. 弃反应液,以冲洗液连续洗板5次并于吸水纸上拍干。
3. 加入酶标抗体(浓度在预试中确定)。加封口胶带后于37℃作用30min。
4. 重复第2步。
5. 加底物(浓度在预试中确定),加封口胶带后于室温下避光作用5-60 min,其间不时观察,显色满意后加终止液50ul/孔。
6. 于酶标仪测定OD值,OPD用492nm测定,TMB用450nm测定。
猪血小板衍生生长因子(PDGF)检测试剂盒相关产品如下:ybA028Si 猴红细胞生成素(EPO)ELISA kit ELISA Kit for Erythropoietin (EPO)
ybA030Si 猴凋亡相关因子(FAS)ELISA kit ELISA Kit for Factor Related Apoptosis (FAS)
ybA031Si 猴凋亡相关因子配体(FASL)ELISA kit ELISA Kit for Factor Related Apoptosis Ligand (FASL)
ybA080Si 猴白介素8(IL8)ELISA kit ELISA Kit for Interleukin 8 (IL8)
ybA782Si 猴碳酸酐酶Ⅱ(CA2)ELISA kit ELISA Kit for Carbonic Anhydrase II (CA2)
ybD295Si 猴细胞色素P450家族成员1A1(CYP1A1)ELISA kit ELISA Kit for Cytochrome P450 1A1 (CYP1A1)
ybA441Si 猴黄体激素(LH)ELISA kit ELISA Kit for Luteinizing Hormone (LH)
ybA830Si 猴促卵泡素(FSH)ELISA kit ELISA Kit for Follicle Stimulating Hormone (FSH)
ybA077Si 猴白介素4(IL4)ELISA kit ELISA Kit for Interleukin 4 (IL4)
ybA519Si 猴载脂蛋白A1(APOA1)ELISA kit ELISA Kit for Apolipoprotein A1 (APOA1)
ybA081Si 猴白介素9(IL9)ELISA kit ELISA Kit for Interleukin 9 (IL9)
ybA134Si 猴肿瘤坏死因子β(TNFβ)ELISA kit ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Beta (TNFb)
ybA196Si 猴半乳糖苷酶β(GLβ)ELISA kit ELISA Kit for Galactosidase Beta (GLb)
ybA229Si 猴白介素2受体β(IL2Rβ)ELISA kit ELISA Kit for Interleukin 2 Receptor Beta (IL2Rb)
ybA160Bo 牛α2-纤溶酶抑制因子(α2PI)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Alpha-2-Plasmin Inhibitor (a2PI)
ybA248Ge 牛血清白蛋白(BSA)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Bovine Serum Albumin (BSA)
ybA821Bo 牛C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for C Reactive Protein (CRP)
ybA816Bo 牛α1-酸性糖蛋白(α1AGP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Alpha-1-Acid Glycoprotein (a1AGP)
ybA817Bo 牛结合珠蛋白(Hpt)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Haptoglobin (Hpt)
ybA885Bo 牛血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Serum Amyloid A (SAA)
ybA050Bo 牛胰岛素样生长因子1(IGF1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor 1 (IGF1)
ybA471Bo 牛骨钙素(OC)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Osteocalcin (OC)
ybA073Bo 牛白介素2(IL2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Interleukin 2 (IL2)