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- 上海磐超生物科技有限公司
- MOUSE TNFα ELISA KIT
¥2860 - 5200
磐超
上海
2022-03-25 17:00
我要认领上海磐超生物科技有限公司
辛鑫
pcsw001@126.com
产品属性
产品说明
本试剂盒所用的标准品是重组Mouse的TNFα。本试剂盒采用的是双抗夹心法，预包被板为Mouse TNFα抗体，检测相为生物素标记的TNFα抗体，反应体系中加入生物素放大系统，以在增加反应的强度和灵敏度。结果判读模式利用TMB显色底物与HRP酶反应，形成蓝色，并在TMB终止液（H2SO4）的反应下转变成黄色，利用酶标仪判读波长，获得分光光度OD值，通过对OD值与浓度值的正相关关系，换算出样本中的TNFα的浓度。试剂盒概述（仅做参考，具体参照试剂盒说明书）样品的准备和保存样本在保存时请勿反复冻融；血清/血浆样本：按照常规样本收集方法收集后，短期保存，应立即分装后放置2-8℃冷藏保存；长期保存，应立即分装后放置-20℃冷冻保存；细胞上清液/组织匀浆：离心去除沉淀后，立即分析检测或分装后-20℃冷冻保存；尿液：用无菌管收集，离心20min左右（2000-3000rpm/min），收集上清，如有沉淀形成，应再次离心。实验步骤- 根据待检测样品数量，计算好所需使用的板孔数量，增加1孔为TMB显色空白对照孔。总数=样本数+8（标准品）+1（空白孔）。做复孔检测时X2.其余板条及时包装好放回冰箱保存；
- 重组抗原标准品，利用标准品稀释液稀释出浓度梯度（参考说明书）；
- 在第一排中依次加入标准品浓度梯度，第一孔为空白孔（若双波长检测，无需设立空白孔），100ul／孔；依次加入待检测样品，100ul／孔（若样本浓度过高可利用样品稀释液稀释，计算时检测结果乘以稀释倍数）；
- 利用封板膜封好，37℃反应90min，拍干，不洗涤；
- 将准备好的TNFα生物素化抗体工作液（1X）按照100ul／孔加入板孔（空白孔不加），贴好封板膜，37℃反应60min；
- 利用1X洗涤液，洗板3次，每次浸泡1min左右，拍干；
- 将SA-HRP工作液（1X）按照100ul／孔加入板孔（空白孔不加），贴好封板膜，37℃反应30min；
- 利用洗涤工作液（1X）洗板5次每次浸泡1min左右，拍干；
- 加入TMB显色液90ul/孔，37℃避光反应15～30min （根据实验室具体环境确认最佳显色时间，可初步根据标准品梯度颜色（蓝色）呈现显现来判断）
- 加入TMB终止液100ul／孔，孔内液体颜色由蓝色变为黄色；
- 用酶标仪在450nm光波处检测OD值；
- 计算时，以标准品浓度梯度作为X轴，OD值（减去空白孔值）作为Y轴，制作标准曲线，计算出样品值（减去空白孔值）对应的浓度值。
注意：在样本加入前处理时，涉及的样本稀释比例，在此基础上需要按照对应倍数换算回来。注意事项- TMB显色液为无色透明液体，若发现颜色异常或出现浑浊度，请及时与我司联系；
- 严格避免操作过程中酶标板的干燥，预防导致板孔的蛋白活性丢失或引起假阳性；
- 为避免交叉污染，请勿重复使用吸头或试管；
- 禁止使用不同批次的试剂盒内试剂组份；
- 使用前计算好需要的酶标板条数量，剩余数量请及时放置2～8℃干燥保存；
- 封板膜因粘性较强，以便更好的封闭板孔，在粘贴和揭开时，请勿过力，防止孔内液体因急剧震荡而溅出；
- 试剂盒中的浓缩液在使用前需提前（1小时以内）配制成工作液，为避免检测效价下跌，建议按照每次使用量稀释；
- 试剂盒中的各组分应在使用前恒温至室温。
