产品类别：间充质干细胞的分离

产品编号：LGS1084

产品名称：猫骨髓间充质干细胞分离液KIT

产品规格：200ml/KIT

产品价格：￥1000.00元

本品用于分离猫骨髓间充质干细胞


“XXXX”动物骨髓干细胞分离液实验方法

技术文档编号：TBD0030SOP

【产品规格】

200ml/Kit

【产品组成】

为方便广大用户使用，试剂内容如下：

	名称	产品编号	规格
A	XXXX 动物骨髓干细胞分离液		200ml
B	样本稀释液（赠品）	2010C1119	200ml
C	清洗液（赠品）	2010X1118	200ml
D	F 液（赠品）	F2013TBD	200ml
E	说明书		1 份

【实验前准备】

适用仪器:最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机

【检验方法】

全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。

• 首先制备骨髓单细胞悬液，制备方法详见“骨髓冲洗单细胞悬液制备技术”。

• 取一支 15ml 离心管，加入与骨髓单细胞悬液等量的分离液（注：分离液最少不得少于

3ml）。

• 用吸管小心吸取骨髓单细胞悬液加于分离液液面上，400-550g，离心 20-30min。（注：根据骨髓单细胞悬液量确定离心条件，骨髓单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。

• 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为稀释液层。第二层为环状乳白色目的细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

• 用吸管小心吸取第二层环状乳白色目的细胞层到另一 15ml 离心管中，向离心管中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。
• 250g，离心 10min。

• 弃上清。

• 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

• 250g，离心 10min。

• 重复 7、8、9，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。

【差异贴壁法纯化细胞】

（1）用干细胞无血清培养基（产品编号：CSC2015TBD）或干细胞完全培养基（产品

编号：HCSC2015TBD）以 1.5-3×10⁶ 个/ml 的密度重悬细胞，将细胞铺于一次性细胞板

或细胞瓶中，放于 37℃二氧化碳培养箱中进行贴壁培养。

（2）2-4 小时内贴壁的为巨噬细胞前体（俗称为单核细胞）。

（3）10-24 小时内贴壁的单个核细胞为内皮、内皮祖细胞、干细胞。

（4）不贴壁的为淋巴细胞。

注：

• 无血清培养基中不含任何动物成分，为得到更佳培养效果可添加 10%自体血浆或2-8%经筛选的胎牛血清。
• 完全培养基中含 2-20%胎牛血清（血清具体含量由所培养的目的细胞而定）。

• 由于每种细胞的贴壁时间存在差异可将所得细胞分开已达简单的纯化目的，此法成本相对较低。如需获得高纯度目的细胞则需在使用分离液后选用免疫磁珠阳性或阴

性分选。

【注意事项】

• 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最好在取样 2h 内进行实验，样品存放时间越长，细胞分离效果越差。样品放置超过 6h 后

分离效果更差甚至不能达到分离目的。

• 本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。

• 吸取过多的目的细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。

• 分离液用量大于骨髓单细胞悬液样本量时，分离效果更佳。

• 如实验后细胞得率或活性过低，请联系技术支持以寻求帮助。

【储存条件及有效期】

常温保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启

封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。

【参考值（参考范围）】

本实验干细胞提取率大于 80%。

下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。

	红细胞		白细胞		血小板
		（4.0-10.0）×109
含量（个/L）	（4.0-5.5）×1012	中性粒细胞	淋巴细胞	单核细胞	（1.0-3.0）×1011
		50%-70%	20%-40%	3%-8%

【相关实验技术方案】

1.	骨髓冲洗单细胞悬液制备技术。
2.	所获得干细胞的培养技术。
3.	所获得干细胞的核酸提取技术。
4.	所获得干细胞的鉴定方法。
	A.流式细胞技术
	B.免疫组化技术
	C.原位杂交技术

D.PCR 技术

【可能存在的问题及解决方法】