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IDT Alt-R? CRISPR-Cas9基因编辑系统工具
——crRNA、sgRNA化学定制合成，商品化重组Cas9核酸酶、重组dCas9蛋白

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北京泽平代理的进口IDT（Integrated DNA Technologies）Alt-R? CRISPR-Cas9基因编辑系统，提供免费序列设计工具，提供化学合成CRISPR-Cas9中crRNA（CRISPR-derived RNA）、sgRNA（small guide RNA）的定制合成服务，并生产商品化通用型tracrRNA（trans-activating crRNA）、化脓性链球菌S. pyogene来源并由E.coli大肠杆菌表达的高保真或荧光修饰的重组Cas9核酸酶（Cas9 nuclease，限制性内切酶，基因组DNA双链剪切）、重组Cas9切口酶（Cas9 nickase，即缺口酶，对靶链、或非靶链进行DNA单链剪切）、重组dCas9蛋白（无剪切功能，靶点占位蛋白，用于CRISPRi）、以及增强RNP（ribonucleoprotein，核糖核蛋白复合体）电转染效率的电穿孔增强剂、增强HDR（Homology directed repair，同源重组修复）概率的HDR增强剂、HDR供体DNA的化学合成服务，提供从设计到多重基因组编辑、CRISPR干扰等试剂的工具平台。




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tips：Ctrl+F，可在浏览器中快速搜索货号、产品关键词，如未能找到产品，请来电咨询13521452266
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IDT Alt-R? CRISPR-Cas9概述

IDT的Alt-R? CRISPR-Cas9系统，分别对crRNA、tracrRNA、sgRNA序列进行优化缩短、化学修饰，对化脓性链球菌S. pyogene Cas9内切酶结构域进行突变，获得了高精确性的单链、双链剪切功能，再通过电穿孔（如Lonza Nucleofector核转染系统）转染RNP，可进行精确地基因编辑操作。

传统构建CRISPR-Cas9质粒的方法，质粒大小高达6-10kb，很难转染，而如使用原代细胞等难转染的细胞，转染效率更低。且质粒不断产生CRISPR-Cas9，使脱靶率显著增加。IDT转染RNP蛋白复合体的方法，通过优化CRISPR-Cas9组件，在提升剪切精确性的基础上，提高转染效率、减少细胞毒性、降低脱靶率，进而提高了基因编辑效率。



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IDT Alt-R? CRISPR-Cas9产品

1、Cas9核酸酶

Alt-R? Cas9核酸酶，S. pyogene来源Cas9，大肠杆菌表达纯化，添加NLS（Nuclear localization sequence，NLS）和C端6-His标签。以10μg/μL的溶液提供。100μg Cas9核酸酶=610pmol。

IDT Alt-R? CRISPR-Cas9基因编辑系统工具IDT Alt-R? CRISPR-Cas9基因编辑系统工具IDT Alt-R? CRISPR-Cas9基因编辑系统工具
——crRNA、sgRNA化学定制合成，商品化重组Cas9核酸酶、重组dCas9蛋白——crRNA、sgRNA化学定制合成，商品化重组Cas9核酸酶、重组dCas9蛋白——crRNA、sgRNA化学定制合成，商品化重组Cas9核酸酶、重组dCas9蛋白

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北京泽平代理的进口IDT（Integrated DNA Technologies）Alt-R? CRISPR-Cas9基因编辑系统，提供免费序列设计工具，提供化学合成CRISPR-Cas9中crRNAcrRNA（CRISPR-derived RNA）、sgRNAsgRNA（small guide RNA）的定制合成服务定制合成服务定制合成服务，并生产商品化商品化商品化通用型tracrRNAtracrRNA（trans-activating crRNA）、化脓性链球菌S. pyogene来源并由E.coli大肠杆菌表达的高保真或荧光修饰高保真或荧光修饰的重组Cas9核酸酶重组Cas9核酸酶（Cas9 nuclease，限制性内切酶，基因组DNA双链剪切）、重组Cas9切口酶重组Cas9切口酶（Cas9 nickase，即缺口酶，对靶链、或非靶链进行DNA单链剪切）、重组dCas9蛋白重组dCas9蛋白（无剪切功能，靶点占位蛋白，用于CRISPRi）、以及增强RNP（ribonucleoprotein，核糖核蛋白复合体）电转染效率的电穿孔增强剂电穿孔增强剂、增强HDR（Homology directed repair，同源重组修复）概率的HDR增强剂HDR增强剂、HDR供体DNA的化学合成服务HDR供体DNA的化学合成服务，提供从设计到多重基因组编辑、CRISPR干扰等试剂的工具平台。




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IDT Alt-R? CRISPR-Cas9概述IDT Alt-R? CRISPR-Cas9概述IDT Alt-R? CRISPR-Cas9概述

IDT的Alt-R? CRISPR-Cas9系统，分别对crRNA、tracrRNA、sgRNA序列进行优化缩短、化学修饰，对化脓性链球菌SS. pyogene Cas9内切酶结构域进行突变，获得了高精确性的单链、双链剪切功能，再通过电穿孔（如Lonza Nucleofector核转染系统）转染RNP，可进行精确地基因编辑操作。

传统构建CRISPR-Cas9质粒的方法构建CRISPR-Cas9质粒的方法，质粒大小高达6-10kb，很难转染6-10kb，很难转染，而如使用原代细胞等难转染的细胞，转染效率更低。且质粒不断产生CRISPR-Cas9，使脱靶率显著增加脱靶率显著增加。IDT转染RNP蛋白复合体的方法，通过优化CRISPR-Cas9组件，在提升剪切精确性的基础上，提高转染效率、减少细胞毒性、降低脱靶率，提高转染效率、减少细胞毒性、降低脱靶率，提高转染效率、减少细胞毒性、降低脱靶率，进而进而提高了基因编辑效率提高了基因编辑效率提高了基因编辑效率。



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IDT Alt-R? CRISPR-Cas9产品IDT Alt-R? CRISPR-Cas9产品IDT Alt-R? CRISPR-Cas9产品

1、Cas9核酸酶1、Cas9核酸酶1、Cas9核酸酶

Alt-R? Cas9核酸酶，S. pyogene来源Cas9，大肠杆菌表达纯化，添加NLS（Nuclear localization sequence，NLS）和C端6-His标签。以10μg/μL的溶液提供。100μg Cas9核酸酶=610pmol。

货号	产品名称	规格	备注
1081058	Alt-R? S.p. Cas9 Nuclease V3, 100 μg	100 μg	野生型，10 μg/μL，100 μg = 610 pmol.
1081059	Alt-R? S.p. Cas9 Nuclease V3, 500 μg	500 μg
10000735	Alt-R? S.p. Cas9 Nuclease V3, 5 mg	5 mg

货号产品名称规格备注1081058Alt-R? S.p. Cas9 Nuclease V3, 100 μg100 μg野生型，10 μg/μL，100 μg = 610 pmol.1081059Alt-R? S.p. Cas9 Nuclease V3, 500 μg500 μg10000735Alt-R? S.p. Cas9 Nuclease V3, 5 mg5 mg货号产品名称规格备注货号货号货号产品名称产品名称产品名称规格规格规格备注备注备注1081058Alt-R? S.p. Cas9 Nuclease V3, 100 μg100 μg野生型，10 μg/μL，100 μg = 610 pmol.10810581081058Alt-R? S.p. Cas9 Nuclease V3, 100 μgAlt-R? S.p. Cas9 Nuclease V3, 100 μg100 μg100 μg野生型，10 μg/μL，100 μg = 610 pmol.野生型，10 μg/μL，100 μg = 610 pmol.1081059Alt-R? S.p. Cas9 Nuclease V3, 500 μg500 μg10810591081059Alt-R? S.p. Cas9 Nuclease V3, 500 μgAlt-R? S.p. Cas9 Nuclease V3, 500 μg500 μg500 μg10000735Alt-R? S.p. Cas9 Nuclease V3, 5 mg5 mg1000073510000735Alt-R? S.p. Cas9 Nuclease V3, 5 mgAlt-R? S.p. Cas9 Nuclease V3, 5 mg5 mg5 mg

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Alt-R? HiFi Cas9高保真核酸酶，经序列优化，显著提高中靶率，是常规实验的更佳选择，非常适合棘手的基因组编辑应用。

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Alt-R? HiFi Cas9高保真核酸酶，经序列优化，显著提高中靶率，是常规实验的更佳选择，非常适合棘手的基因组编辑应用。Alt-R? HiFi Cas9高保真核酸酶，经序列优化，显著提高中靶率，是常规实验的更佳选择，非常适合棘手的基因组编辑应用。

货号	产品名称	规格	备注
1081060	Alt-R? S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 100 μg	100 μg	100 μg = 610 pmol
1081061	Alt-R? S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 500 μg	500 μg
10007803	Alt-R? S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 5 mg	5 mg

货号产品名称规格备注1081060Alt-R? S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 100 μg100 μg100 μg = 610 pmol1081061Alt-R? S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 500 μg500 μg10007803Alt-R? S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 5 mg5 mg货号产品名称规格备注货号货号货号产品名称产品名称产品名称规格规格规格备注备注备注1081060Alt-R? S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 100 μg100 μg100 μg = 610 pmol10810601081060Alt-R? S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 100 μgAlt-R? S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 100 μg100 μg100 μg100 μg = 610 pmol100 μg = 610 pmol1081061Alt-R? S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 500 μg500 μg10810611081061Alt-R? S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 500 μgAlt-R? S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 500 μg500 μg500 μg10007803Alt-R? S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 5 mg5 mg1000780310007803Alt-R? S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 5 mgAlt-R? S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 5 mg5 mg5 mg

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Alt-R? Cas9-GFP核酸酶、Alt-R? Cas9-RFP核酸酶，具有NLS和C端6-His标签。添加GFP绿色荧光、或RFP红色荧光修饰，专为需要蛋白质转染后可视化、或使用荧光激活细胞分选 (FACS) 富集编辑细胞的应用设计。

Alt-R? Cas9-GFP核酸酶、Alt-R? Cas9-RFP核酸酶，具有NLS和C端6-His标签。添加GFP绿色荧光、或RFP红色荧光修饰，专为需要蛋白质转染后可视化、或使用荧光激活细胞分选 (FACS) 富集编辑细胞的应用设计。Alt-R? Cas9-GFP核酸酶、Alt-R? Cas9-RFP核酸酶，具有NLS和C端6-His标签。添加GFP绿色荧光、或RFP红色荧光修饰，专为需要蛋白质转染后可视化、或使用荧光激活细胞分选 (FACS) 富集编辑细胞的应用设计。

货号	产品名称	规格	备注
10008100	Alt-R? S.p.Cas9-GFP V3, 100 μg	100 μg	GFP标签，10 μg/μL，100 μg = 530 pmol.
10008161	Alt-R? S.p.Cas9-GFP V3, 500 μg	500 μg
10008162	Alt-R? S.p.Cas9-RFP V3, 100 μg	100 μg	RFP标签，10 μg/μL，100 μg = 530 pmol.
10008163	Alt-R? S.p.Cas9-RFP V3, 500 μg	500 μg

货号产品名称规格备注10008100Alt-R? S.p.Cas9-GFP V3, 100 μg100 μgGFP标签，10 μg/μL，100 μg = 530 pmol.10008161Alt-R? S.p.Cas9-GFP V3, 500 μg500 μg10008162Alt-R? S.p.Cas9-RFP V3, 100 μg100 μgRFP标签，10 μg/μL，100 μg = 530 pmol.10008163Alt-R? S.p.Cas9-RFP V3, 500 μg500 μg货号产品名称规格备注货号货号货号产品名称产品名称产品名称规格规格规格备注备注备注10008100Alt-R? S.p.Cas9-GFP V3, 100 μg100 μgGFP标签，10 μg/μL，100 μg = 530 pmol.1000810010008100Alt-R? S.p.Cas9-GFP V3, 100 μgAlt-R? S.p.Cas9-GFP V3, 100 μg100 μg100 μgGFP标签，10 μg/μL，100 μg = 530 pmol.GFP标签，10 μg/μL，100 μg = 530 pmol.10008161Alt-R? S.p.Cas9-GFP V3, 500 μg500 μg1000816110008161Alt-R? S.p.Cas9-GFP V3, 500 μgAlt-R? S.p.Cas9-GFP V3, 500 μg500 μg500 μg10008162Alt-R? S.p.Cas9-RFP V3, 100 μg100 μgRFP标签，10 μg/μL，100 μg = 530 pmol.1000816210008162Alt-R? S.p.Cas9-RFP V3, 100 μgAlt-R? S.p.Cas9-RFP V3, 100 μg100 μg100 μgRFP标签，10 μg/μL，100 μg = 530 pmol.RFP标签，10 μg/μL，100 μg = 530 pmol.10008163Alt-R? S.p.Cas9-RFP V3, 500 μg500 μg1000816310008163Alt-R? S.p.Cas9-RFP V3, 500 μgAlt-R? S.p.Cas9-RFP V3, 500 μg500 μg500 μg

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Alt-R? Cas9核酸酶（不含甘油），具有NLS和C端6-His标签。以10μg/μL的无甘油溶液形式提供。

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Alt-R? Cas9核酸酶（不含甘油），具有NLS和C端6-His标签。以10μg/μL的无甘油溶液形式提供。Alt-R? Cas9核酸酶（不含甘油），具有NLS和C端6-His标签。以10μg/μL的无甘油溶液形式提供。

货号	产品名称	规格	备注
10007806	Alt-R? S.p.Cas9 V3, glycerol-free, 100μg	100 μg	无甘油，10 μg/μL，100 μg = 610 pmol
<10007807	Alt-R? S.p.Cas9 V3, glycerol-free, 500μg	500 μg
10007808	Alt-R? S.p.Cas9 V3, glycerol-free, 5mg	5 mg

货号产品名称规格备注10007806Alt-R? S.p.Cas9 V3, glycerol-free, 100μg100 μg无甘油，10 μg/μL，100 μg = 610 pmol<10007807Alt-R? S.p.Cas9 V3, glycerol-free, 500μg500 μg10007808Alt-R? S.p.Cas9 V3, glycerol-free, 5mg5 mg货号产品名称规格备注货号货号货号产品名称产品名称产品名称规格规格规格备注备注备注10007806Alt-R? S.p.Cas9 V3, glycerol-free, 100μg100 μg无甘油，10 μg/μL，100 μg = 610 pmol1000780610007806Alt-R? S.p.Cas9 V3, glycerol-free, 100μgAlt-R? S.p.Cas9 V3, glycerol-free, 100μg100 μg100 μg无甘油，10 μg/μL，100 μg = 610 pmol无甘油，10 μg/μL，100 μg = 610 pmol<10007807Alt-R? S.p.Cas9 V3, glycerol-free, 500μg500 μg<10007807<10007807Alt-R? S.p.Cas9 V3, glycerol-free, 500μgAlt-R? S.p.Cas9 V3, glycerol-free, 500μg500 μg500 μg10007808Alt-R? S.p.Cas9 V3, glycerol-free, 5mg5 mg1000780810007808Alt-R? S.p.Cas9 V3, glycerol-free, 5mgAlt-R? S.p.Cas9 V3, glycerol-free, 5mg5 mg5 mg

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2、Cas9切口酶

Alt-R? Cas9切口酶/缺口酶，S. pyogene来源Cas9，大肠杆菌表达纯化，添加NLS和C端6-His标签。其中Alt-R? Cas9 D10A切口酶中RuvC-like内切酶结构域功能失活，对DNA靶向链进行单链切割。Alt-R? Cas9 H840A切口酶，HNH结构域失活，对非靶向链单链切割。以10μg/μL的溶液提供。100μg Cas9切口酶=610pmol。

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2、Cas9切口酶2、Cas9切口酶2、Cas9切口酶

Alt-R? Cas9切口酶/缺口酶，S. pyogene来源Cas9，大肠杆菌表达纯化，添加NLS和C端6-His标签。其中Alt-R? Cas9 D10A切口酶中RuvC-like内切酶结构域功能失活，对DNA靶向链进行单链切割。Alt-R? Cas9 H840A切口酶，HNH结构域失活，对非靶向链单链切割。以10μg/μL的溶液提供。100μg Cas9切口酶=610pmol。

货号	产品名称	规格	备注
1081062	Alt-R? S.p. Cas9 D10A Nickase V3, 100 μg	100 μg	缺口酶，切割靶向链（不包含PAM的链）
1081063	Alt-R? S.p. Cas9 D10A Nickase V3, 500 μg	500 μg
1081064	Alt-R? S.p. Cas9 H840A Nickase V3, 100 μg	100 μg	缺口酶，切割非靶向链（包含PAM的链）
1081065	Alt-R? S.p. Cas9 H840A Nickase V3, 500 μg	500 μg

货号产品名称规格备注1081062Alt-R? S.p. Cas9 D10A Nickase V3, 100 μg100 μg缺口酶，切割靶向链（不包含PAM的链）1081063Alt-R? S.p. Cas9 D10A Nickase V3, 500 μg500 μg1081064Alt-R? S.p. Cas9 H840A Nickase V3, 100 μg100 μg缺口酶，切割非靶向链（包含PAM的链）1081065Alt-R? S.p. Cas9 H840A Nickase V3, 500 μg500 μg货号产品名称规格备注货号货号货号产品名称产品名称产品名称规格规格规格备注备注备注1081062Alt-R? S.p. Cas9 D10A Nickase V3, 100 μg100 μg缺口酶，切割靶向链（不包含PAM的链）10810621081062Alt-R? S.p. Cas9 D10A Nickase V3, 100 μgAlt-R? S.p. Cas9 D10A Nickase V3, 100 μg100 μg100 μg缺口酶，切割靶向链（不包含PAM的链）缺口酶，切割靶向链（不包含PAM的链）1081063Alt-R? S.p. Cas9 D10A Nickase V3, 500 μg500 μg10810631081063Alt-R? S.p. Cas9 D10A Nickase V3, 500 μgAlt-R? S.p. Cas9 D10A Nickase V3, 500 μg500 μg500 μg1081064Alt-R? S.p. Cas9 H840A Nickase V3, 100 μg100 μg缺口酶，切割非靶向链（包含PAM的链）10810641081064Alt-R? S.p. Cas9 H840A Nickase V3, 100 μgAlt-R? S.p. Cas9 H840A Nickase V3, 100 μg100 μg100 μg缺口酶，切割非靶向链（包含PAM的链）缺口酶，切割非靶向链（包含PAM的链）1081065Alt-R? S.p. Cas9 H840A Nickase V3, 500 μg500 μg10810651081065Alt-R? S.p. Cas9 H840A Nickase V3, 500 μgAlt-R? S.p. Cas9 H840A Nickase V3, 500 μg500 μg500 μg

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3、dCas9蛋白

Alt-R? dCas9占位蛋白，S. pyogene来源Cas9，大肠杆菌表达纯化，丧失内切酶功能，添加NLS和C端6-His标签。dCas9蛋白可用于CRISPRi，进行基因下调（knockdown）等，相比RNAi，由于CRISPRi需要在转录起始位点附近才能发挥功能，其脱靶率远低于RNAi。Alt-R? dCas9蛋白，以10μg/μL的溶液提供。100μg dCas9蛋白=610pmol。

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3、dCas9蛋白3、dCas9蛋白3、dCas9蛋白

Alt-R? dCas9占位蛋白，S. pyogene来源Cas9，大肠杆菌表达纯化，丧失内切酶功能，添加NLS和C端6-His标签。dCas9蛋白可用于CRISPRi，进行基因下调（knockdown）等，相比RNAi，由于CRISPRi需要在转录起始位点附近才能发挥功能，其脱靶率远低于RNAi。Alt-R? dCas9蛋白，以10μg/μL的溶液提供。100μg dCas9蛋白=610pmol。

货号	产品名称	规格	备注
1081066	Alt-R? S.p. dCas9 Protein V3, 100 μg	100 μg	无切割活性
1081067	Alt-R? S.p. dCas9 Protein V3,500 μg	500 μg

货号产品名称规格备注1081066Alt-R? S.p. dCas9 Protein V3, 100 μg100 μg无切割活性1081067Alt-R? S.p. dCas9 Protein V3,500 μg500 μg货号产品名称规格备注货号货号货号产品名称产品名称产品名称规格规格规格备注备注备注1081066Alt-R? S.p. dCas9 Protein V3, 100 μg100 μg无切割活性10810661081066Alt-R? S.p. dCas9 Protein V3, 100 μgAlt-R? S.p. dCas9 Protein V3, 100 μg100 μg100 μg无切割活性无切割活性1081067Alt-R? S.p. dCas9 Protein V3,500 μg500 μg10810671081067Alt-R? S.p. dCas9 Protein V3,500 μgAlt-R? S.p. dCas9 Protein V3,500 μg500 μg500 μg

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4、crRNA（定制）

Alt-R? crRNA，由19-20nt特异性序列（定制）和16nt通用序列融合形成，相比野生型，序列更短，中靶率更高。经化学修饰防止被细胞核糖核酸酶降解，必须与tracrRNA一起使用以形成gRNA。

Alt-R? crRNA XT，相比Alt-R? crRNA，经其他化学修饰，用于高核酸酶条件或带有Cas9 mRNA的实验，可提高基因编辑的稳定性。必须与tracrRNA一起使用。

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4、crRNA（定制）4、crRNA（定制）4、crRNA（定制）crRNA（定制）

Alt-R? crRNA，由19-20nt特异性序列（定制）和16nt通用序列融合形成，相比野生型，序列更短，中靶率更高。经化学修饰防止被细胞核糖核酸酶降解，必须与tracrRNA一起使用以形成gRNA。

Alt-R? crRNA XT，相比Alt-R? crRNA，经其他化学修饰，用于高核酸酶条件或带有Cas9 mRNA的实验，可提高基因编辑的稳定性。必须与tracrRNA一起使用。

货号	产品名称	规格	备注
定制	Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 2 nmol	2 nmol	36nt，带Alt-R修饰，与tracrRNA结合使用
定制	Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 10 nmol	10 nmol
定制	Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 50 nmol	50 nmol
定制	Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 100 nmol	100 nmol
定制	Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA XT, 2 nmol	2 nmol	36nt，比crRNA多了额外化学修饰，更稳定
定制	Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA XT, 10 nmol	10 nmol

货号产品名称规格备注定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 2 nmol2 nmol36nt，带Alt-R修饰，与tracrRNA结合使用定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 10 nmol10 nmol定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 50 nmol50 nmol定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 100 nmol100 nmol定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA XT, 2 nmol2 nmol36nt，比crRNA多了额外化学修饰，更稳定定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA XT, 10 nmol10 nmol货号产品名称规格备注货号货号货号产品名称产品名称产品名称规格规格规格备注备注备注定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 2 nmol2 nmol36nt，带Alt-R修饰，与tracrRNA结合使用定制定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 2 nmolAlt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 2 nmol2 nmol2 nmol36nt，带Alt-R修饰，与tracrRNA结合使用36nt，带Alt-R修饰，与tracrRNA结合使用定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 10 nmol10 nmol定制定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 10 nmolAlt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 10 nmol10 nmol10 nmol定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 50 nmol50 nmol定制定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 50 nmolAlt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 50 nmol50 nmol50 nmol定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 100 nmol100 nmol定制定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 100 nmolAlt-R? CRISPR-Cas9 crRNA, 100 nmol100 nmol100 nmol定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA XT, 2 nmol2 nmol36nt，比crRNA多了额外化学修饰，更稳定定制定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA XT, 2 nmolAlt-R? CRISPR-Cas9 crRNA XT, 2 nmol2 nmol2 nmol36nt，比crRNA多了额外化学修饰，更稳定36nt，比crRNA多了额外化学修饰，更稳定定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA XT, 10 nmol10 nmol定制定制Alt-R? CRISPR-Cas9 crRNA XT, 10 nmolAlt-R? CRISPR-Cas9 crRNA XT, 10 nmol10 nmol10 nmol

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5、sgRNA（定制）

Alt-R? sgRNA，由crRNA和tracrRNA序列融合组成的单个RNA，含有19-20nt的特异性序列（定制）和80nt通用序列，经化学修饰，稳定性更高，用于高核酸酶条件或带有Cas9 mRNA的实验。相比体外转录的sgRNA，减少细胞免疫反应，更小细胞毒性。

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5、sgRNA（定制）5、sgRNA（定制）5、sgRNA（定制）

Alt-R? sgRNA，由crRNA和tracrRNA序列融合组成的单个RNA，含有19-20nt的特异性序列（定制）和80nt通用序列，经化学修饰，稳定性更高，用于高核酸酶条件或带有Cas9 mRNA的实验。相比体外转录的sgRNA，减少细胞免疫反应，更小细胞毒性。

货号	产品名称	规格	备注
定制	Alt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 2 nmol	2 nmol	100nt，两端有2’OMe 碱基和硫代磷酸酯PS修饰
定制	Alt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 10 nmol	10 nmol
定制	Alt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 50 nmol	50 nmol
定制	Alt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 100 nmol	100nmol

货号产品名称规格备注定制Alt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 2 nmol2 nmol100nt，两端有2’OMe 碱基和硫代磷酸酯PS修饰定制Alt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 10 nmol10 nmol定制Alt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 50 nmol50 nmol定制Alt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 100 nmol100nmol货号产品名称规格备注货号货号货号产品名称产品名称产品名称规格规格规格备注备注备注定制Alt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 2 nmol2 nmol100nt，两端有2’OMe 碱基和硫代磷酸酯PS修饰定制定制Alt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 2 nmolAlt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 2 nmol2 nmol2 nmol100nt，两端有2’OMe 碱基和硫代磷酸酯PS修饰100nt，两端有2’OMe 碱基和硫代磷酸酯PS修饰定制Alt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 10 nmol10 nmol定制定制Alt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 10 nmolAlt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 10 nmol10 nmol10 nmol定制Alt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 50 nmol50 nmol定制定制Alt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 50 nmolAlt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 50 nmol50 nmol50 nmol定制Alt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 100 nmol100nmol定制定制Alt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 100 nmolAlt-R? CRISPR-Cas9 sgRNA, 100 nmol100nmol100nmol

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6、tracrRNA

Alt-R? tracrRNA，通用67nt序列，远远短于野生型的89nt，缩短后性能提高，经化学修饰，具有核酸酶抗性。可提供荧光标记，测定转染效率。必须与crRNA一起使用以形成gRNA。

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6、tracrRNA6、tracrRNA6、tracrRNA

Alt-R? tracrRNA，通用67nt序列，远远短于野生型的89nt，缩短后性能提高，经化学修饰，具有核酸酶抗性。可提供荧光标记，测定转染效率。必须与crRNA一起使用以形成gRNA。

货号	产品名称	规格	备注
1072532	Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, 5 nmol	5 nmol	67nt，与crRNA结合使用
1072533	Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, 20 nmol	20 nmol
1072534	Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, 100 nmol	100 nmol
1075927	Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, ATTO? 550, 5 nmol	5 nmol	67nt，带ATTO荧光
1075928	Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, ATTO? 550, 20 nmol	20 nmol

货号产品名称规格备注1072532Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, 5 nmol5 nmol67nt，与crRNA结合使用1072533Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, 20 nmol20 nmol1072534Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, 100 nmol100 nmol1075927Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, ATTO? 550, 5 nmol5 nmol67nt，带ATTO荧光1075928Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, ATTO? 550, 20 nmol20 nmol货号产品名称规格备注货号货号货号产品名称产品名称产品名称规格规格规格备注备注备注1072532Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, 5 nmol5 nmol67nt，与crRNA结合使用10725321072532Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, 5 nmolAlt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, 5 nmol5 nmol5 nmol67nt，与crRNA结合使用67nt，与crRNA结合使用1072533Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, 20 nmol20 nmol10725331072533Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, 20 nmolAlt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, 20 nmol20 nmol20 nmol1072534Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, 100 nmol100 nmol10725341072534Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, 100 nmolAlt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, 100 nmol100 nmol100 nmol1075927Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, ATTO? 550, 5 nmol5 nmol67nt，带ATTO荧光10759271075927Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, ATTO? 550, 5 nmolAlt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, ATTO? 550, 5 nmol5 nmol5 nmol67nt，带ATTO荧光67nt，带ATTO荧光1075928Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, ATTO? 550, 20 nmol20 nmol10759281075928Alt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, ATTO? 550, 20 nmolAlt-R? CRISPR-Cas9 tracrRNA, ATTO? 550, 20 nmol20 nmol20 nmol

图.稳定表达Cas9蛋白的HEK-293细胞，转染Alt-R? crRNA(未标记):tracrRNA(标记)，转染后48小时，荧光显微镜下10倍放大。\xa0

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7、电穿孔增强剂

Alt-R? Cas9电穿孔Enhancer，是Cas9特异性的载体DNA，当使用原代细胞或难转染细胞时，可提高Lonza(原Amaxa）Nucleofector核转染系统等电穿孔设备对RNP的转染效率，进而提高基因编辑效率。

图.稳定表达Cas9蛋白的HEK-293细胞，转染Alt-R? crRNA(未标记):tracrRNA(标记)，转染后48小时，荧光显微镜下10倍放大。\xa0

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7、电穿孔增强剂7、电穿孔增强剂7、电穿孔增强剂

Alt-R? Cas9电穿孔Enhancer，是Cas9特异性的载体DNA，当使用原代细胞或难转染细胞时，可提高Lonza(原Amaxa）Nucleofector核转染系统等电穿孔设备对RNP的转染效率，进而提高基因编辑效率。

货号	产品名称	规格	备注
1075915	Alt-R? Cas9 Electroporation Enhancer, 2 nmol	2 nmol	电穿孔增强剂，增强转染效率
1075916	Alt-R? Cas9 Electroporation Enhancer, 10 nmol	10 nmol
10007805	Alt-R? Cas9 Elec Enhancer, 100 nmol	100 nmol

货号产品名称规格备注1075915Alt-R? Cas9 Electroporation Enhancer, 2 nmol2 nmol电穿孔增强剂，增强转染效率1075916Alt-R? Cas9 Electroporation Enhancer, 10 nmol10 nmol10007805Alt-R? Cas9 Elec Enhancer, 100 nmol100 nmol货号产品名称规格备注货号货号货号产品名称产品名称产品名称规格规格规格备注备注备注1075915Alt-R? Cas9 Electroporation Enhancer, 2 nmol2 nmol电穿孔增强剂，增强转染效率10759151075915Alt-R? Cas9 Electroporation Enhancer, 2 nmolAlt-R? Cas9 Electroporation Enhancer, 2 nmol2 nmol2 nmol电穿孔增强剂，增强转染效率电穿孔增强剂，增强转染效率1075916Alt-R? Cas9 Electroporation Enhancer, 10 nmol10 nmol10759161075916Alt-R? Cas9 Electroporation Enhancer, 10 nmolAlt-R? Cas9 Electroporation Enhancer, 10 nmol10 nmol10 nmol10007805Alt-R? Cas9 Elec Enhancer, 100 nmol100 nmol1000780510007805Alt-R? Cas9 Elec Enhancer, 100 nmolAlt-R? Cas9 Elec Enhancer, 100 nmol100 nmol100 nmol

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8、HDR增强剂

Alt-R? HDR Enhancer，小分子化合物，可提高同源重组修复概率。在包括贴壁、悬浮的大量细胞系中均有活性，可用于Cas9核酸酶、Cas12a（Cpf1）核酸酶。

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8、HDR增强剂8、HDR增强剂8、HDR增强剂

Alt-R? HDR Enhancer，小分子化合物，可提高同源重组修复概率。在包括贴壁、悬浮的大量细胞系中均有活性，可用于Cas9核酸酶、Cas12a（Cpf1）核酸酶。

货号	产品名称	规格	备注
10007910	Alt-R? HDR Enhancer V2, 30 μL	30 μL	HDR增强剂，增加同源重组修复倾向性
10007921	Alt-R? HDR Enhancer V2, 150 μL	150 μL
1081072	Alt-R? HDR Enhancer, 100 μL	100 μL
1081073	Alt-R? HDR Enhancer, 500 μL	500 μL

货号产品名称规格备注10007910Alt-R? HDR Enhancer V2, 30 μL30 μLHDR增强剂，增加同源重组修复倾向性10007921Alt-R? HDR Enhancer V2, 150 μL150 μL1081072Alt-R? HDR Enhancer, 100 μL100 μL1081073Alt-R? HDR Enhancer, 500 μL500 μL货号产品名称规格备注货号货号货号产品名称产品名称产品名称规格规格规格备注备注备注10007910Alt-R? HDR Enhancer V2, 30 μL30 μLHDR增强剂，增加同源重组修复倾向性1000791010007910Alt-R? HDR Enhancer V2, 30 μLAlt-R? HDR Enhancer V2, 30 μL30 μL30 μLHDR增强剂，增加同源重组修复倾向性HDR增强剂，增加同源重组修复倾向性10007921Alt-R? HDR Enhancer V2, 150 μL150 μL1000792110007921Alt-R? HDR Enhancer V2, 150 μLAlt-R? HDR Enhancer V2, 150 μL150 μL150 μL1081072Alt-R? HDR Enhancer, 100 μL100 μL10810721081072Alt-R? HDR Enhancer, 100 μLAlt-R? HDR Enhancer, 100 μL100 μL100 μL1081073Alt-R? HDR Enhancer, 500 μL500 μL10810731081073Alt-R? HDR Enhancer, 500 μLAlt-R? HDR Enhancer, 500 μL500 μL500 μL

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9、供体DNA（定制）

Alt-R? HDR供体寡核苷酸，专门为同源重组修复基因敲入开发，具有比标准寡核苷酸更高的稳定性和更高的掺入率，可同时用于Cas9核酸酶和Cas9切口酶。

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9、供体DNA（定制）9、供体DNA（定制）9、供体DNA（定制）

Alt-R? HDR供体寡核苷酸，专门为同源重组修复基因敲入开发，具有比标准寡核苷酸更高的稳定性和更高的掺入率，可同时用于Cas9核酸酶和Cas9切口酶。

货号	产品名称	规格	备注
定制	Alt-R HDR Donor Oligo, 2 nmol	2 nmol	45-200nt，Alt-R修饰和硫代磷酸酯PS修饰
定制	Alt-R HDR Donor Oligo, 10 nmol	10 nmol
定制	Alt-R? HDR Donor Block, 201-500 bp, 3 μg	3 μg	非常适合进行段基因组的修改和插入；带修饰双链DNA
定制	Alt-R? HDR Donor Block, 201-500 bp, 10 μg	10 μg
定制	Alt-R? HDR Donor Block, 501-2000 bp, 3 μg	3 μg
定制	Alt-R? HDR Donor Block, 501-2000 bp, 10 μg	10 μg
定制	Alt-R? HDR Donor Block, 2001-3000 bp, 3 μg	3 μg
定制	Alt-R? HDR Donor Block, 2001-3000 bp, 10 μg	10 μg

货号产品名称规格备注定制Alt-R HDR Donor Oligo, 2 nmol2 nmol45-200nt，Alt-R修饰和硫代磷酸酯PS修饰定制Alt-R HDR Donor Oligo, 10 nmol10 nmol定制Alt-R? HDR Donor Block, 201-500 bp, 3 μg3 μg非常适合进行段基因组的修改和插入；带修饰双链DNA定制Alt-R? HDR Donor Block, 201-500 bp, 10 μg10 μg定制Alt-R? HDR Donor Block, 501-2000 bp, 3 μg3 μg定制Alt-R? HDR Donor Block, 501-2000 bp, 10 μg10 μg定制Alt-R? HDR Donor Block, 2001-3000 bp, 3 μg3 μg定制Alt-R? HDR Donor Block, 2001-3000 bp, 10 μg10 μg货号产品名称规格备注货号货号货号货号产品名称产品名称产品名称产品名称规格规格规格规格备注备注备注备注定制Alt-R HDR Donor Oligo, 2 nmol2 nmol45-200nt，Alt-R修饰和硫代磷酸酯PS修饰定制定制定制Alt-R HDR Donor Oligo, 2 nmolAlt-R HDR Donor Oligo, 2 nmolAlt-R HDR Donor Oligo, 2 nmol2 nmol2 nmol2 nmol45-200nt，Alt-R修饰和硫代磷酸酯PS修饰45-200nt，Alt-R修饰和硫代磷酸酯PS修饰45-200nt，Alt-R修饰和硫代磷酸酯PS修饰定制Alt-R HDR Donor Oligo, 10 nmol10 nmol定制定制定制Alt-R HDR Donor Oligo, 10 nmolAlt-R HDR Donor Oligo, 10 nmolAlt-R HDR Donor Oligo, 10 nmol10 nmol10 nmol10 nmol定制Alt-R? HDR Donor Block, 201-500 bp, 3 μg3 μg非常适合进行段基因组的修改和插入；带修饰双链DNA定制定制定制Alt-R? HDR Donor Block, 201-500 bp, 3 μgAlt-R? HDR Donor Block, 201-500 bp, 3 μgAlt-R? HDR Donor Block, 201-500 bp, 3 μg3 μg3 μg3 μg非常适合进行段基因组的修改和插入；带修饰双链DNA非常适合进行段基因组的修改和插入；带修饰双链DNA非常适合进行段基因组的修改和插入；带修饰双链DNA定制Alt-R? HDR Donor Block, 201-500 bp, 10 μg10 μg定制定制定制Alt-R? HDR Donor Block, 201-500 bp, 10 μgAlt-R? HDR Donor Block, 201-500 bp, 10 μgAlt-R? HDR Donor Block, 201-500 bp, 10 μg10 μg10 μg10 μg定制Alt-R? HDR Donor Block, 501-2000 bp, 3 μg3 μg定制定制定制Alt-R? HDR Donor Block, 501-2000 bp, 3 μgAlt-R? HDR Donor Block, 501-2000 bp, 3 μgAlt-R? HDR Donor Block, 501-2000 bp, 3 μg3 μg3 μg3 μg定制Alt-R? HDR Donor Block, 501-2000 bp, 10 μg10 μg定制定制定制Alt-R? HDR Donor Block, 501-2000 bp, 10 μgAlt-R? HDR Donor Block, 501-2000 bp, 10 μgAlt-R? HDR Donor Block, 501-2000 bp, 10 μg10 μg10 μg10 μg定制Alt-R? HDR Donor Block, 2001-3000 bp, 3 μg3 μg定制定制定制Alt-R? HDR Donor Block, 2001-3000 bp, 3 μgAlt-R? HDR Donor Block, 2001-3000 bp, 3 μgAlt-R? HDR Donor Block, 2001-3000 bp, 3 μg3 μg3 μg3 μg定制Alt-R? HDR Donor Block, 2001-3000 bp, 10 μg10 μg定制定制定制Alt-R? HDR Donor Block, 2001-3000 bp, 10 μgAlt-R? HDR Donor Block, 2001-3000 bp, 10 μgAlt-R? HDR Donor Block, 2001-3000 bp, 10 μg10 μg10 μg10 μg

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IDT Alt-R? CRISPR-Cas9实验流程

【方法一】
1、（使用IDT序列设计工具）设计Alt-R? crRNA，使其间隔区（Spacer）序列与DNA靶序列互补，提交给IDT定制合成crRNA；
2、将Alt-R? crRNA与Alt-R? tracrRNA混合，通过crRNA的重复序列区（Repeats）与tracrRNA碱基配对, 形成向导RNA（guide RNA，简称gRNA）；
3、将gRNA与Alt-R? Cas9蛋白混匀，形成核糖核蛋白体（ribonucleoprotein，简称RNP)；
4、将RNP通过电转染等导入细胞或细胞核；
5、通过crRNA的Spacer识别DNA靶序列，通过Cas9蛋白识别PAM序列（前间区序列邻近基序，protospacer adjacent motif，简称PAM），对DNA进行剪切；
6、对DNA断裂处进行修复
①进行非同源末端连接修复(Non-homologous end-joining，简称NHEJ），实现基因敲除（knockout）；
②（使用IDT序列设计工具）设计供体DNA模板，进行同源重组修复（Homology directed repair，简称HDR），实现基因敲入（knockoin）、基因敲除、基因沉默等。











【方法二】
1、（用IDT工具）设计sgRNA，使其Spacer与DNA靶序列互补，提交给IDT定制合成sgRNA；
2、将sgRNA与Cas9蛋白混匀，形成RNP；
3、将RNP通过电转染等导入细胞或细胞核；
4、通过sgRNA的Spacer识别DNA靶序列，通过Cas9蛋白识别PAM序列，对DNA进行剪切；
5、对DNA断裂处进行修复
①进行非同源末端连接修复，实现基因敲除；
②（用IDT工具）设计供体DNA模板，进行同源重组修复，实现基因敲入、敲除、沉默等。











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IDT Alt-R? crRNA序列设计示意图


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Alt-R? CRISPR-Cas9优势

1、特别优化的crRNA/tracrRNA/sgRNA长度，提高基因编辑性能


以HPRT基因中的12个位点为靶点，分别使用Alt-R? crRNA:tracrRNA、Alt-R? crRNA XT:tracrRNA、Alt-R? sgRNA，与Alt-R? Cas9核酸酶组装成3种RNP，加入2μM Alt-R? Cas9电穿孔Enhancer，转染HEK-293细胞，培养48小时后，通过二代测序检测总的实验效率，结果显示其具有很好的稳定性。

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2、化学修饰RNA，增加核酸酶抗性，减少免疫应答和细胞毒性

以HPRT1的12个位点为靶点，分别用Alt-R? crRNA:tracrRNA、体外转录（IVT）RNA，转染可高效表达化脓性链球菌Cas9蛋白的HEK-293细胞，24小时后，测定常见应激反应基因IFIT1（A）和OAS2（B）的表达水平。（A）qPCR显示IVT RNA强烈诱导IFIT1，而Alt-R? RNA无影响。（B）qPCR显示IVT RNA对OAS2的诱导可测，而Alt-R? RNA处于基线。同时IFITM1、RIGI、OAS1等3个应激反应相关基因均得到相似结果，说明Alt-R? RNA不会激活细胞先天免疫反应。

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3、优化的Cas9蛋白和高保真HiFi Cas9蛋白，提供更高的特异性切割

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4、电穿孔增强剂，提高转染效率，尤其是原代细胞等较难转染的细胞

用0.125μM-4μM RNP（Alt-R? crRNA:tracrRNA:Cas9复合体），通过Lonza Nucleofector 核转染K562细胞（A）、Jurkat细胞（B）、HEK-293细胞（C）时，使用电穿孔Enhancer（深蓝色）、不使用（浅蓝色）的效率。


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5、HDR增强剂，提高同源重组修复效率
①提高多种细胞HDR

以人HPRT为靶点，使用Lonza Nucleofector核转染系统，将4μM RNP（由Alt-R? crRNA、Alt-R? tracrRNA、Alt-R? Cas9组装），加入4μM Alt-R? Cas9电穿孔Enhancer，以3μM IDT Ultramer寡核苷酸作为同源重组修复DNA模板，转染人多种细胞系。电转后，细胞培养在含30μM Alt-R? HDR Enhancer的培养基中（绿色），或培养在含有DMSO的培养基中作为阴性对照（棕色），HEK-293、HeLa培养48小时，Jurkat、K562培养72小时，通过限制性片段长度多态性（RFLP）、靶序列PCR进行HDR分析，显示Alt-R? HDR Enhancer可提高多种细胞类型的同源重组修复效率。


②提高多种基因HDR

以人基因组多个位点为靶点，将4μM Alt-R? Cas9 RNP，加入4μM Alt-R? Cas9电穿孔Enhancer、3μM IDT Ultramer单链DNA模板，通过电穿孔转染。电转后，细胞分别培养在含30μM Alt-R? HDR Enhancer的培养基（蓝色）、含有DMSO的培养基（绿色）、未处理的培养基（棕色），48-72小时后，通过RFLP、PCR进行HDR分析，显示Alt-R? HDR Enhancer可提高不同基因的HDR效率。

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6、在线CRISPR序列设计工具，方便地设计高质量的crRNA/sgRNA/同源重组修复DNA模板/引物等

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如物种的基因组富含A、T，或Alt-R? CRISPR-Cas9的位点不适合，IDT同时提供CRISPR-Cas12a系统，尽可能满足实验需求。

Cas9和Cas12a系统区别和应用

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IDT Alt-R? CRISPR-Cas9实验流程IDT Alt-R? CRISPR-Cas9实验流程IDT Alt-R? CRISPR-Cas9实验流程

【方法一】【方法一】【方法一】
1、（使用IDT序列设计工具）设计Alt-R? crRNA，使其间隔区（Spacer）序列与DNA靶序列互补，提交给IDT定制合成crRNA；
2、将Alt-R? crRNA与Alt-R? tracrRNA混合，通过crRNA的重复序列区（Repeats）与tracrRNA碱基配对, 形成向导RNA（guide RNA，简称gRNA）；
3、将gRNA与Alt-R? Cas9蛋白混匀，形成核糖核蛋白体（ribonucleoprotein，简称RNP)；
4、将RNP通过电转染等导入细胞或细胞核；
5、通过crRNA的Spacer识别DNA靶序列，通过Cas9蛋白识别PAM序列（前间区序列邻近基序，protospacer adjacent motif，简称PAM），对DNA进行剪切；
6、对DNA断裂处进行修复
①进行非同源末端连接修复(Non-homologous end-joining，简称NHEJ），实现基因敲除（knockout）；
②（使用IDT序列设计工具）设计供体DNA模板，进行同源重组修复（Homology directed repair，简称HDR），实现基因敲入（knockoin）、基因敲除、基因沉默等。











【方法二】【方法二】【方法二】
1、（用IDT工具）设计sgRNA，使其Spacer与DNA靶序列互补，提交给IDT定制合成sgRNA；
2、将sgRNA与Cas9蛋白混匀，形成RNP；
3、将RNP通过电转染等导入细胞或细胞核；
4、通过sgRNA的Spacer识别DNA靶序列，通过Cas9蛋白识别PAM序列，对DNA进行剪切；
5、对DNA断裂处进行修复
①进行非同源末端连接修复，实现基因敲除；
②（用IDT工具）设计供体DNA模板，进行同源重组修复，实现基因敲入、敲除、沉默等。











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IDT Alt-R? crRNA序列设计示意图IDT Alt-R? crRNA序列设计示意图IDT Alt-R? crRNA序列设计示意图


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Alt-R? CRISPR-Cas9优势Alt-R? CRISPR-Cas9优势Alt-R? CRISPR-Cas9优势

1、特别优化的crRNA/tracrRNA/sgRNA长度，提高基因编辑性能
1、特别优化的crRNA/tracrRNA/sgRNA长度，提高基因编辑性能1、特别优化的crRNA/tracrRNA/sgRNA长度，提高基因编辑性能


以HPRT基因中的12个位点为靶点，分别使用Alt-R? crRNA:tracrRNA、Alt-R? crRNA XT:tracrRNA、Alt-R? sgRNA，与Alt-R? Cas9核酸酶组装成3种RNP，加入2μM Alt-R? Cas9电穿孔Enhancer，转染HEK-293细胞，培养48小时后，通过二代测序检测总的实验效率，结果显示其具有很好的稳定性。

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2、化学修饰RNA，增加核酸酶抗性，减少免疫应答和细胞毒性
2、化学修饰RNA，增加核酸酶抗性，减少免疫应答和细胞毒性2、化学修饰RNA，增加核酸酶抗性，减少免疫应答和细胞毒性

以HPRT1的12个位点为靶点，分别用Alt-R? crRNA:tracrRNA、体外转录（IVT）RNA，转染可高效表达化脓性链球菌Cas9蛋白的HEK-293细胞，24小时后，测定常见应激反应基因IFIT1（A）和OAS2（B）的表达水平。（A）qPCR显示IVT RNA强烈诱导IFIT1，而Alt-R? RNA无影响。（B）qPCR显示IVT RNA对OAS2的诱导可测，而Alt-R? RNA处于基线。同时IFITM1、RIGI、OAS1等3个应激反应相关基因均得到相似结果，说明Alt-R? RNA不会激活细胞先天免疫反应。

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3、优化的Cas9蛋白和高保真HiFi Cas9蛋白，提供更高的特异性切割3、优化的Cas9蛋白和高保真HiFi Cas9蛋白，提供更高的特异性切割3、优化的Cas9蛋白和高保真HiFi Cas9蛋白，提供更高的特异性切割

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4、电穿孔增强剂，提高转染效率，尤其是原代细胞等较难转染的细胞
4、电穿孔增强剂，提高转染效率，尤其是原代细胞等较难转染的细胞4、电穿孔增强剂，提高转染效率，尤其是原代细胞等较难转染的细胞

用0.125μM-4μM RNP（Alt-R? crRNA:tracrRNA:Cas9复合体），通过Lonza Nucleofector 核转染K562细胞（A）、Jurkat细胞（B）、HEK-293细胞（C）时，使用电穿孔Enhancer（深蓝色）、不使用（浅蓝色）的效率。


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5、HDR增强剂，提高同源重组修复效率
①提高多种细胞HDR
5、HDR增强剂，提高同源重组修复效率5、HDR增强剂，提高同源重组修复效率
①提高多种细胞HDR①提高多种细胞HDR

以人HPRT为靶点，使用Lonza Nucleofector核转染系统，将4μM RNP（由Alt-R? crRNA、Alt-R? tracrRNA、Alt-R? Cas9组装），加入4μM Alt-R? Cas9电穿孔Enhancer，以3μM IDT Ultramer寡核苷酸作为同源重组修复DNA模板，转染人多种细胞系。电转后，细胞培养在含30μM Alt-R? HDR Enhancer的培养基中（绿色），或培养在含有DMSO的培养基中作为阴性对照（棕色），HEK-293、HeLa培养48小时，Jurkat、K562培养72小时，通过限制性片段长度多态性（RFLP）、靶序列PCR进行HDR分析，显示Alt-R? HDR Enhancer可提高多种细胞类型的同源重组修复效率。


②提高多种基因HDR
②提高多种基因HDR②提高多种基因HDR

以人基因组多个位点为靶点，将4μM Alt-R? Cas9 RNP，加入4μM Alt-R? Cas9电穿孔Enhancer、3μM IDT Ultramer单链DNA模板，通过电穿孔转染。电转后，细胞分别培养在含30μM Alt-R? HDR Enhancer的培养基（蓝色）、含有DMSO的培养基（绿色）、未处理的培养基（棕色），48-72小时后，通过RFLP、PCR进行HDR分析，显示Alt-R? HDR Enhancer可提高不同基因的HDR效率。

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6、在线CRISPR序列设计工具，方便地设计高质量的crRNA/sgRNA/同源重组修复DNA模板/引物等6、在线CRISPR序列设计工具，方便地设计高质量的crRNA/sgRNA/同源重组修复DNA模板/引物等6、在线CRISPR序列设计工具，方便地设计高质量的crRNA/sgRNA/同源重组修复DNA模板/引物等

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如物种的基因组富含A、T，或Alt-R? CRISPR-Cas9的位点不适合，IDT同时提供CRISPR-Cas12a系统，尽可能满足实验需求。

Cas9和Cas12a系统区别和应用Cas9和Cas12a系统区别和应用Cas9和Cas12a系统区别和应用

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IDT Alt-R? CRISPR		Alt-R? CRISPR-Cas9系统					Alt-R? CRISPR-Cas12a（Cpf1）系统
		Alt-R? Cas9核酸酶	Alt-R? HiFi Cas9高保真核酸酶	Alt-R? Cas9 D10A切口酶	Alt-R? Cas9 H840A切口酶	Alt-R? dCas9蛋白	Alt-R? Cas12a核酸酶
特点		通用Cas9酶，易于使用且经济实惠	经序列优化的Cas9酶，提高中靶率，降低脱靶率，高性价比	突变的Cas9酶，在RuvC-like结构域中发生突变，使其缺失在非靶向链的切割能力	突变的Cas9酶，在HNH结构域中发生突变，使其缺失在靶向链的切割能力	突变的Cas9酶，仅结合靶向DNA，缺失核酸酶切割能力	通用Cas12a酶，富含AT的物种，或使用CRISPR-Cas9有限制
PAM识别		NGG					TTTV或TTTN
DNA切割		双链	双链	靶向链	非靶向链	\\	双链
末端		平末端		5’突出	3’突出	\\	5’突出
建议用途		一般基因编辑实验	满足大多数CRISPR基因编辑需求，兼顾效率和成本	适用于同时使用2种crRNA，各自识别并切割2条链中一条，通过将spacer由20nt提高到40nt，实现更高特异性		基因沉默，CRISPR干扰CRISPRi	无法使用Cas9的基因编辑实验
规格		100 μg或500 μg
Cas9+gRNA	crRNA	19-20nt特异性序列（推荐使用20nt），16nt通用序列					\\
	tracrRNA	67nt通用序列					\\
Cas9+sgRNA	sgRNA	19-20nt特异性序列（推荐使用20nt），80nt通用序列，经过序列修饰，不会引起细胞免疫反应，不会激活无关的基因					\\
Cas12a+crRNA	crRNA	\\					20-24nt特异性序列（推荐使用21nt），20nt通用序列

IDT Alt-R? CRISPRAlt-R? CRISPR-Cas9系统Alt-R? CRISPR-Cas12a（Cpf1）系统Alt-R? Cas9核酸酶Alt-R? HiFi Cas9高保真核酸酶Alt-R? Cas9 D10A切口酶Alt-R? Cas9 H840A切口酶Alt-R? dCas9蛋白Alt-R? Cas12a核酸酶特点通用Cas9酶，易于使用且经济实惠经序列优化的Cas9酶，提高中靶率，降低脱靶率，高性价比突变的Cas9酶，在RuvC-like结构域中发生突变，使其缺失在非靶向链的切割能力突变的Cas9酶，在HNH结构域中发生突变，使其缺失在靶向链的切割能力突变的Cas9酶，仅结合靶向DNA，缺失核酸酶切割能力通用Cas12a酶，富含AT的物种，或使用CRISPR-Cas9有限制PAM识别NGGTTTV或TTTNDNA切割双链双链靶向链非靶向链\\双链末端平末端5’突出3’突出\\5’突出建议用途一般基因编辑实验满足大多数CRISPR基因编辑需求，兼顾效率和成本适用于同时使用2种crRNA，各自识别并切割2条链中一条，通过将spacer由20nt提高到40nt，实现更高特异性基因沉默，CRISPR干扰CRISPRi无法使用Cas9的基因编辑实验规格100 μg或500 μgCas9+gRNAcrRNA19-20nt特异性序列（推荐使用20nt），16nt通用序列\\tracrRNA67nt通用序列\\Cas9+sgRNAsgRNA19-20nt特异性序列（推荐使用20nt），80nt通用序列，经过序列修饰，不会引起细胞免疫反应，不会激活无关的基因\\Cas12a+crRNAcrRNA\\20-24nt特异性序列（推荐使用21nt），20nt通用序列IDT Alt-R? CRISPRAlt-R? CRISPR-Cas9系统Alt-R? CRISPR-Cas12a（Cpf1）系统IDT Alt-R? CRISPRIDT Alt-R? CRISPRIDT Alt-R? CRISPRIDT Alt-R? CRISPRAlt-R? CRISPR-Cas9系统Alt-R? CRISPR-Cas9系统Alt-R? CRISPR-Cas9系统Alt-R? CRISPR-Cas9系统Alt-R? CRISPR-Cas12a（Cpf1）系统Alt-R? CRISPR-Cas12a（Cpf1）系统Alt-R? CRISPR-Cas12a（Cpf1）系统Alt-R? CRISPR-Cas12a（Cpf1）系统Alt-R? Cas9核酸酶Alt-R? HiFi Cas9高保真核酸酶Alt-R? Cas9 D10A切口酶Alt-R? Cas9 H840A切口酶Alt-R? dCas9蛋白Alt-R? Cas12a核酸酶Alt-R? Cas9核酸酶Alt-R? Cas9核酸酶Alt-R? Cas9核酸酶Alt-R? Cas9核酸酶Alt-R? HiFi Cas9高保真核酸酶Alt-R? HiFi Cas9高保真核酸酶Alt-R? HiFi Cas9高保真核酸酶Alt-R? HiFi Cas9高保真核酸酶Alt-R? Cas9 D10A切口酶Alt-R? Cas9 D10A切口酶Alt-R? Cas9 D10A切口酶Alt-R? Cas9 D10A切口酶Alt-R? Cas9 H840A切口酶Alt-R? Cas9 H840A切口酶Alt-R? Cas9 H840A切口酶Alt-R? Cas9 H840A切口酶Alt-R? dCas9蛋白Alt-R? dCas9蛋白Alt-R? dCas9蛋白Alt-R? dCas9蛋白Alt-R? Cas12a核酸酶Alt-R? Cas12a核酸酶Alt-R? Cas12a核酸酶Alt-R? Cas12a核酸酶特点通用Cas9酶，易于使用且经济实惠经序列优化的Cas9酶，提高中靶率，降低脱靶率，高性价比突变的Cas9酶，在RuvC-like结构域中发生突变，使其缺失在非靶向链的切割能力突变的Cas9酶，在HNH结构域中发生突变，使其缺失在靶向链的切割能力突变的Cas9酶，仅结合靶向DNA，缺失核酸酶切割能力通用Cas12a酶，富含AT的物种，或使用CRISPR-Cas9有限制特点特点特点特点通用Cas9酶，易于使用且经济实惠通用Cas9酶，易于使用且经济实惠经序列优化的Cas9酶，提高中靶率，降低脱靶率，高性价比经序列优化的Cas9酶，提高中靶率，降低脱靶率，高性价比突变的Cas9酶，在RuvC-like结构域中发生突变，使其缺失在非靶向链的切割能力突变的Cas9酶，在RuvC-like结构域中发生突变，使其缺失在非靶向链的切割能力突变的Cas9酶，在HNH结构域中发生突变，使其缺失在靶向链的切割能力突变的Cas9酶，在HNH结构域中发生突变，使其缺失在靶向链的切割能力突变的Cas9酶，仅结合靶向DNA，缺失核酸酶切割能力突变的Cas9酶，仅结合靶向DNA，缺失核酸酶切割能力通用Cas12a酶，富含AT的物种，或使用CRISPR-Cas9有限制通用Cas12a酶，富含AT的物种，或使用CRISPR-Cas9有限制PAM识别NGGTTTV或TTTNPAM识别PAM识别PAM识别PAM识别NGGNGGTTTV或TTTNTTTV或TTTNDNA切割双链双链靶向链非靶向链\\双链DNA切割DNA切割DNA切割DNA切割双链双链双链双链靶向链靶向链非靶向链非靶向链\\\\双链双链末端平末端5’突出3’突出\\5’突出末端末端末端末端平末端平末端5’突出5’突出3’突出3’突出\\\\5’突出5’突出建议用途一般基因编辑实验满足大多数CRISPR基因编辑需求，兼顾效率和成本适用于同时使用2种crRNA，各自识别并切割2条链中一条，通过将spacer由20nt提高到40nt，实现更高特异性基因沉默，CRISPR干扰CRISPRi无法使用Cas9的基因编辑实验建议用途建议用途建议用途建议用途一般基因编辑实验一般基因编辑实验满足大多数CRISPR基因编辑需求，兼顾效率和成本满足大多数CRISPR基因编辑需求，兼顾效率和成本适用于同时使用2种crRNA，各自识别并切割2条链中一条，通过将spacer由20nt提高到40nt，实现更高特异性适用于同时使用2种crRNA，各自识别并切割2条链中一条，通过将spacer由20nt提高到40nt，实现更高特异性基因沉默，CRISPR干扰CRISPRi基因沉默，CRISPR干扰CRISPRi无法使用Cas9的基因编辑实验无法使用Cas9的基因编辑实验规格100 μg或500 μg规格规格规格规格100 μg或500 μg100 μg或500 μgCas9+gRNAcrRNA19-20nt特异性序列（推荐使用20nt），16nt通用序列\\Cas9+gRNACas9+gRNACas9+gRNACas9+gRNAcrRNAcrRNAcrRNAcrRNA19-20nt特异性序列（推荐使用20nt），16nt通用序列19-20nt特异性序列（推荐使用20nt），16nt通用序列\\\\tracrRNA67nt通用序列\\tracrRNAtracrRNAtracrRNAtracrRNA67nt通用序列67nt通用序列\\\\Cas9+sgRNAsgRNA19-20nt特异性序列（推荐使用20nt），80nt通用序列，经过序列修饰，不会引起细胞免疫反应，不会激活无关的基因\\Cas9+sgRNACas9+sgRNACas9+sgRNACas9+sgRNAsgRNAsgRNAsgRNAsgRNA19-20nt特异性序列（推荐使用20nt），80nt通用序列，经过序列修饰，不会引起细胞免疫反应，不会激活无关的基因19-20nt特异性序列（推荐使用20nt），80nt通用序列，经过序列修饰，不会引起细胞免疫反应，不会激活无关的基因\\\\Cas12a+crRNAcrRNA\\20-24nt特异性序列（推荐使用21nt），20nt通用序列Cas12a+crRNACas12a+crRNACas12a+crRNACas12a+crRNAcrRNAcrRNAcrRNAcrRNA\\\\20-24nt特异性序列（推荐使用21nt），20nt通用序列20-24nt特异性序列（推荐使用21nt），20nt通用序列

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注：
N=任意碱基
V=A、C、G
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参考文献
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1. Large-scale GMP-compliant CRISPR-Cas9–mediated deletion of the glucocorticoid receptor in multivirus-specific T cells. Rafet Basar,et al.，Blood Advances (2020) 4 (14): 3357–3367
2. Partner independent fusion gene detection by multiplexed CRISPR-Cas9 enrichment and long read nanopore sequencing.Christina Stangl,et al.,Nature Communications volume 11, Article number: 2861 (2020)
3. sgRNA Sequence Motifs Blocking Efficient CRISPR/Cas9-Mediated Gene Editing. Robin Graf,et al.,Cell Reports,Volume 26, Issue 5, 29 January 2019, Pages 1098-1103.e3
4. Rapid in vitro production of single-stranded DNA. Dionis Minev,et al.，Nucleic Acids Research, Volume 47, Issue 22, 16 December 2019, Pages 11956–11962
5. Neuron-Specific Genome Modification in the Adult Rat Brain Using CRISPR-Cas9 Transgenic Rats.Susanne B?ck,et al.,Neuron,Volume 102, Issue 1, 3 April 2019, Pages 105-119.e8
6. Highly Efficient Transgenesis in Ferrets Using CRISPR/Cas9-Mediated Homology-Independent Insertion at the ROSA26 Locus.Miao Yu,et al.,Scientific Reports volume 9, Article number: 1971 (2019)\xa0
7. RNA‐guided endonuclease – in situ labelling (RGEN‐ISL): a fast CRISPR/Cas9‐based method to label genomic sequences in various species.Takayoshi Ishii,et al., New Phytol. 2019 May; 222(3): 1652–1661.
8. A high-fidelity Cas9 mutant delivered as a ribonucleoprotein complex enables efficient gene editing in human hematopoietic stem and progenitor cells. Christopher A. Vakulskas,et al.,Naturemedicine,Published: 06 August 2018
9. Increasing Cas9-mediated homology-directed repair efficiency through covalent tethering of DNA repair template. Eric J. Aird,et al.,Communications biology, Published: 31 May 2018

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更多Alt-R? CRISPR-Cas9基因编辑系统细节，欢迎来电咨询13521452266
——IDT中国一级代理商，北京泽平

注：
N=任意碱基
V=A、C、G
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参考文献参考文献参考文献
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1. Large-scale GMP-compliant CRISPR-Cas9–mediated deletion of the glucocorticoid receptor in multivirus-specific T cells. Rafet Basar,et al.，Blood Advances (2020) 4 (14): 3357–3367
2. Partner independent fusion gene detection by multiplexed CRISPR-Cas9 enrichment and long read nanopore sequencing.Christina Stangl,et al.,Nature Communications volume 11, Article number: 2861 (2020)
3. sgRNA Sequence Motifs Blocking Efficient CRISPR/Cas9-Mediated Gene Editing. Robin Graf,et al.,Cell Reports,Volume 26, Issue 5, 29 January 2019, Pages 1098-1103.e3
4. Rapid in vitro production of single-stranded DNA. Dionis Minev,et al.，Nucleic Acids Research, Volume 47, Issue 22, 16 December 2019, Pages 11956–11962
5. Neuron-Specific Genome Modification in the Adult Rat Brain Using CRISPR-Cas9 Transgenic Rats.Susanne B?ck,et al.,Neuron,Volume 102, Issue 1, 3 April 2019, Pages 105-119.e8
6. Highly Efficient Transgenesis in Ferrets Using CRISPR/Cas9-Mediated Homology-Independent Insertion at the ROSA26 Locus.Miao Yu,et al.,Scientific Reports volume 9, Article number: 1971 (2019)\xa0
7. RNA‐guided endonuclease – in situ labelling (RGEN‐ISL): a fast CRISPR/Cas9‐based method to label genomic sequences in various species.Takayoshi Ishii,et al., New Phytol. 2019 May; 222(3): 1652–1661.
8. A high-fidelity Cas9 mutant delivered as a ribonucleoprotein complex enables efficient gene editing in human hematopoietic stem and progenitor cells. Christopher A. Vakulskas,et al.,Naturemedicine,Published: 06 August 2018
9. Increasing Cas9-mediated homology-directed repair efficiency through covalent tethering of DNA repair template. Eric J. Aird,et al.,Communications biology, Published: 31 May 2018

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