\n hFOB1.19细胞株/hFOB1.19细胞系/hFOB1.19人SV40转染成骨细胞
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培养操作说明培养操作说明培养操作说明培养操作说明培养操作说明培养操作说明培养操作说明培养操作说明
复苏：复苏：复苏：复苏：复苏：复苏：复苏：复苏：
1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速将其置入 37℃水浴中解冻直至冻存管中无结晶，75%的酒精擦拭冻存管外壁； 1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速将其置入 37℃水浴中解冻直至冻存管中无结晶，75%的酒精擦拭冻存管外壁； 1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速将其置入 37℃水浴中解冻直至冻存管中无结晶，75%的酒精擦拭冻存管外壁； 1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速将其置入 37℃水浴中解冻直至冻存管中无结晶，75%的酒精擦拭冻存管外壁； 1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速将其置入 37℃水浴中解冻直至冻存管中无结晶，75%的酒精擦拭冻存管外壁； 1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速将其置入 37℃水浴中解冻直至冻存管中无结晶，75%的酒精擦拭冻存管外壁； 1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速将其置入 37℃水浴中解冻直至冻存管中无结晶，75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min； 2. 将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min； 2. 将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min； 2. 将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min； 2. 将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min； 2. 将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min； 2. 将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3. 弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；3. 弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；3. 弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；3. 弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；3. 弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；3. 弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；3. 弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；

传代：传代：传代：传代：传代：传代：传代：传代：
（1）贴壁细胞： （1）贴壁细胞： （1）贴壁细胞： （1）贴壁细胞： （1）贴壁细胞： （1）贴壁细胞： （（1）贴壁细胞：
1. 细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次； 1. 细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次； 1. 细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次； 1. 细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次； 1. 细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次； 1. 细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次； 1. 细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min； 2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min； 2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min； 2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min； 2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min； 2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min； 2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；
3. 弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，按1:2 比例进行分瓶传代，补加培养基后放入 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养； 3. 弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，按1:2 比例进行分瓶传代，补加培养基后放入 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养； 3. 弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，按1:2 比例进行分瓶传代，补加培养基后放入 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养； 3. 弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，按1:2 比例进行分瓶传代，补加培养基后放入 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养； 3. 弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，按1:2 比例进行分瓶传代，补加培养基后放入 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养； 3. 弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，按1:2 比例进行分瓶传代，补加培养基后放入 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养； 3. 弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，按1:2 比例进行分瓶传代，补加培养基后放入 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；
（2）悬浮细胞: （2）悬浮细胞: （（（（2222））））悬浮细胞: 悬浮细胞: 悬浮细胞: 悬浮细胞: 悬浮细胞悬浮细胞:
待细胞达到1x10^6/ml左右可按照以下方法换液培养或传代。 待细胞达到1x10^6/ml左右可按照以下方法换液培养或传代。 待细胞达到1x10^6/ml左右可按照以下方法换液培养或传代。 待细胞达到1x10^6/ml左右可按照以下方法换液培养或传代。 待细胞达到1x10^6/ml左右可按照以下方法换液培养或传代。 待细胞达到待细胞达到1x10^6/ml左右可按照以下方法换液培养或传代。
方法①：收集细胞，1000rpm 离心 5min，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀，将细胞悬液按 1：2 到 1：3的比例分到含培养基的新瓶中。 方法①：收集细胞，1000rpm 离心 5min，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀，将细胞悬液按 1：2 到 1：3的比例分到含培养基的新瓶中。 方法①：收集细胞，1000rpm 离心 5min，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀，将细胞悬液按 1：2 到 1：3的比例分到含培养基的新瓶中。 方法①：收集细胞，1000rpm 离心 5min，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀，将细胞悬液按 1：2 到 1：3的比例分到含培养基的新瓶中。 方法①：收集细胞，1000rpm 离心 5min，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀，将细胞悬液按 1：2 到 1：3的比例分到含培养基的新瓶中。 方法方法①：收集细胞，1000rpm 离心 5min，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀，将细胞悬液按 1：2 到 1：3的比例分到含培养基的新瓶中。
方法②：竖立放置培养瓶，细胞沉淀后弃去上半量培养基，将细胞悬液按 1：2 到 1：3 的比例分到含培养基的新瓶中。 方法②：竖立放置培养瓶，细胞沉淀后弃去上半量培养基，将细胞悬液按 1：2 到 1：3 的比例分到含培养基的新瓶中。 方法②：竖立放置培养瓶，细胞沉淀后弃去上半量培养基，将细胞悬液按 1：2 到 1：3 的比例分到含培养基的新瓶中。 方法②：竖立放置培养瓶，细胞沉淀后弃去上半量培养基，将细胞悬液按 1：2 到 1：3 的比例分到含培养基的新瓶中。 方法②：竖立放置培养瓶，细胞沉淀后弃去上半量培养基，将细胞悬液按 1：2 到 1：3 的比例分到含培养基的新瓶中。 方法方法②：竖立放置培养瓶，细胞沉淀后弃去上半量培养基，将细胞悬液按 1：2 到 1：3 的比例分到含培养基的新瓶中。

冻存：冻存：冻存：冻存：冻存：冻存：冻存：冻存：
1. 离心收集细胞并进行计数(参考离心条件：1000rpm，5 min)。彻底移去离心管中的上清液； 1. 离心收集细胞并进行计数(参考离心条件：1000rpm，5 min)。彻底移去离心管中的上清液； 1. 离心收集细胞并进行计数(参考离心条件：1000rpm，5 min)。彻底移去离心管中的上清液； 1. 离心收集细胞并进行计数(参考离心条件：1000rpm，5 min)。彻底移去离心管中的上清液； 1. 离心收集细胞并进行计数(参考离心条件：1000rpm，5 min)。彻底移去离心管中的上清液； 1. 离心收集细胞并进行计数(参考离心条件：1000rpm，5 min)。彻底移去离心管中的上清液； 1. 离心收集细胞并进行计数(参考离心条件：1000rpm，5 min)。彻底移去离心管中的上清液；
3. 加入适量的无血清细胞冻存液（EK-Bioscience 货号：S002）于离心管中，调整细胞浓度至1~5×10⁶\xa0cells/mL。轻柔混匀，制成细胞冻存悬液； 3. 加入适量的无血清细胞冻存液（EK-Bioscience 货号：S002）于离心管中，调整细胞浓度至1~5×10⁶\xa0cells/mL。轻柔混匀，制成细胞冻存悬液； 3. 加入适量的无血清细胞冻存液（EK-Bioscience 货号：S002）于离心管中，调整细胞浓度至1~5×103. 加入适量的无血清细胞冻存液（EK-Bioscience 货号：S002）于离心管中，调整细胞浓度至1~5×103. 加入适量的无血清细胞冻存液（EK-Bioscience 货号：S002）于离心管中，调整细胞浓度至1~5×103. 加入适量的无血清细胞冻存液（EK-Bioscience 货号：S002）于离心管中，调整细胞浓度至1~5×103. 加入适量的无血清细胞冻存液（EK-Bioscience 货号：S002）于离心管中，调整细胞浓度至1~5×10⁶666666\xa0cells/mL。轻柔混匀，制成细胞冻存悬液； \xa0cells/mL。轻柔混匀，制成细胞冻存悬液； \xa0cells/mL。轻柔混匀，制成细胞冻存悬液； \xa0cells/mL。轻柔混匀，制成细胞冻存悬液； cells/mL。轻柔混匀，制成细胞冻存悬液；
4. 将离心管中的细胞冻存悬液分装于已标示完全的冻存管中； 4. 将离心管中的细胞冻存悬液分装于已标示完全的冻存管中； 4. 将离心管中的细胞冻存悬液分装于已标示完全的冻存管中； 4. 将离心管中的细胞冻存悬液分装于已标示完全的冻存管中； 4. 将离心管中的细胞冻存悬液分装于已标示完全的冻存管中； 4. 将离心管中的细胞冻存悬液分装于已标示完全的冻存管中； 4. 将离心管中的细胞冻存悬液分装于已标示完全的冻存管中；
5. 直接将含细胞悬液的冻存管放入-80℃冰箱，长期冷冻保存或转入液氮。 5. 直接将含细胞悬液的冻存管放入-80℃冰箱，长期冷冻保存或转入液氮。 5. 直接将含细胞悬液的冻存管放入-80℃冰箱，长期冷冻保存或转入液氮。 5. 直接将含细胞悬液的冻存管放入-80℃冰箱，长期冷冻保存或转入液氮。 5. 直接将含细胞悬液的冻存管放入-80℃冰箱，长期冷冻保存或转入液氮。 5. 直接将含细胞悬液的冻存管放入-80℃冰箱，长期冷冻保存或转入液氮。 5. 直接将含细胞悬液的冻存管放入-80℃冰箱，长期冷冻保存或转入液氮。


细胞收到处理方法细胞收到处理方法细胞细胞细胞细胞细胞细胞收到处理方法收到处理方法收到处理方法收到处理方法收到处理方法收到处理方法
T25 培养瓶 T25 培养瓶 T25 培养瓶 T25 培养瓶 T25 培养瓶 T25 培养瓶 T25 T25 培养瓶 培养瓶
收到细胞后检查外包装及细胞培养瓶是否完好，如有破损漏液等问题，请即时联系。正常请进行以下操作：收到细胞后检查外包装及细胞培养瓶是否完好，如有破损漏液等问题，请即时联系。正常请进行以下操作：收到细胞后检查外包装及细胞培养瓶是否完好，如有破损漏液等问题，请即时联系。正常请进行以下操作：收到细胞后检查外包装及细胞培养瓶是否完好，如有破损漏液等问题，请即时联系。正常请进行以下操作：收到细胞后检查外包装及细胞培养瓶是否完好，如有破损漏液等问题，请即时联系。正常请进行以下操作：收到细胞后检查外包装及细胞培养瓶是否完好，如有破损漏液等问题，请即时联系。正常请进行以下操作：
1. 75%酒精棉球擦拭 T25 细胞培养瓶外部。 1. 75%酒精棉球擦拭 T25 细胞培养瓶外部。 1. 75%酒精棉球擦拭 T25 细胞培养瓶外部。 1. 75%酒精棉球擦拭 T25 细胞培养瓶外部。 1. 75%1. 75%酒精棉球擦拭 酒精棉球擦拭 T25 T25 细胞培养瓶外部。 细胞培养瓶外部。
2. 将细胞放入 37 度培养箱中预温 3-4 小时后再做处理，以稳定细胞状态。 2. 将细胞放入 37 度培养箱中预温 3-4 小时后再做处理，以稳定细胞状态。 2. 将细胞放入 37 度培养箱中预温 3-4 小时后再做处理，以稳定细胞状态。 2. 将细胞放入 37 度培养箱中预温 3-4 小时后再做处理，以稳定细胞状态。 2. 2. 将细胞放入 将细胞放入 37 37 度培养箱中预温 度培养箱中预温 3-4 3-4 小时后再做处理，以稳定细胞状态。 小时后再做处理，以稳定细胞状态。
3. 显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40×,100×,200×各一张）前三天照片为重要售后依据，不提供或未拍照默认收到 3. 显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40×,100×,200×各一张）前三天照片为重要售后依据，不提供或未拍照默认收到 3. 显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40×,100×,200×各一张）前三天照片为重要售后依据，不提供或未拍照默认收到 3. 显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40×,100×,200×各一张）前三天照片为重要售后依据，不提供或未拍照默认收到 3. 3. 显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（4040××,100,100××,200,200×各一张）前三天照片为重要售后依据，不提供或未拍照默认收到 ×各一张）前三天照片为重要售后依据，不提供或未拍照默认收到
状态良好。状态良好。状态良好。状态良好。状态良好。状态良好。

1. ①贴壁细胞：若细胞密度低于 80%，无菌操作去掉培养基。加入准备的 5-6ml 培养基放 37 度培养箱培养，待细胞密度达到 80%以上进行传代。密度 80%以上，可以将细胞传代处理。

①贴壁细胞：若细胞密度低于 80%，无菌操作去掉培养基。加入准备的 5-6ml 培养基放 37 度培养箱培养，待细胞密度达到 80%以上进行传代。密度 80%以上，可以将细胞传代处理。

①贴壁细胞：若细胞密度低于 80%，无菌操作去掉培养基。加入准备的 5-6ml 培养基放 37 度培养箱培养，待细胞密度达到 80%以上进行传代。密度 80%以上，可以将细胞传代处理。①贴壁细胞：若细胞密度低于 80%，无菌操作去掉培养基。加入准备的 5-6ml 培养基放 37 度培养箱培养，待细胞密度达到 80%以上进行传代。密度 80%以上，可以将细胞传代处理。①贴壁细胞：若细胞密度低于 80%，无菌操作去掉培养基。加入准备的 5-6ml 培养基放 37 度培养箱培养，待细胞密度达到 80%以上进行传代。密度 80%以上，可以将细胞传代处理。①贴壁细胞：若细胞密度低于 80%，无菌操作去掉培养基。加入准备的 5-6ml 培养基放 37 度培养箱培养，待细胞密度达到 80%以上进行传代。密度 80%以上，可以将细胞传代处理。①贴壁细胞：若细胞密度低于 ①贴壁细胞：若细胞密度低于 80%80%，无菌操作去掉培养基。加入准备的 ，无菌操作去掉培养基。加入准备的 5-6ml 5-6ml 培养基放 培养基放 37 37 度培养箱培养，待细胞密度达到 度培养箱培养，待细胞密度达到 80%80%以上进行传代。密度 以上进行传代。密度 80%80%以上，可以将细胞传代处理。以上，可以将细胞传代处理。②悬浮细胞：将瓶内所有培养基离心收集，重悬计数根据密度进行分瓶，密度在 3-5x10^5/ml 为宜。 ②悬浮细胞：将瓶内所有培养基离心收集，重悬计数根据密度进行分瓶，密度在 3-5x10^5/ml 为宜。 ②悬浮细胞：将瓶内所有培养基离心收集，重悬计数根据密度进行分瓶，密度在 3-5x10^5/ml 为宜。 ②悬浮细胞：将瓶内所有培养基离心收集，重悬计数根据密度进行分瓶，密度在 3-5x10^5/ml 为宜。 ②悬浮细胞：将瓶内所有培养基离心收集，重悬计数根据密度进行分瓶，密度在 ②悬浮细胞：将瓶内所有培养基离心收集，重悬计数根据密度进行分瓶，密度在 3-5x10^5/ml 3-5x10^5/ml 为宜。 为宜。

15ml 离心管 15ml 离心管 15ml 离心管 15ml 离心管 15ml 离心管 15ml 离心管 15ml 15ml 离心管 离心管
75%酒精棉球擦拭 15ml 离心管外部去封口膜，将15ml 细胞悬液均匀接种到 2 个 T25 规格培养瓶，第二天观察细胞状态，根据密度进行换液或分瓶。75%酒精棉球擦拭 15ml 离心管外部去封口膜，将15ml 细胞悬液均匀接种到 2 个 T25 规格培养瓶，第二天观察细胞状态，根据密度进行换液或分瓶。75%酒精棉球擦拭 15ml 离心管外部去封口膜，将15ml 细胞悬液均匀接种到 2 个 T25 规格培养瓶，第二天观察细胞状态，根据密度进行换液或分瓶。75%酒精棉球擦拭 15ml 离心管外部去封口膜，将15ml 细胞悬液均匀接种到 2 个 T25 规格培养瓶，第二天观察细胞状态，根据密度进行换液或分瓶。75%75%酒精棉球擦拭 酒精棉球擦拭 15ml 15ml 离心管外部去封口膜，将离心管外部去封口膜，将15ml 15ml 细胞悬液均匀接种到 细胞悬液均匀接种到 2 2 个 个 T25 T25 规格培养瓶，第二天观察细胞状态，根据密度进行换液或分瓶。规格培养瓶，第二天观察细胞状态，根据密度进行换液或分瓶。

2ml 冻存管 2ml 冻存管 2ml 冻存管 2ml 冻存管 2ml 冻存管 2ml 冻存管 2ml 2ml 冻存管 冻存管
收到细胞后，检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等问题，请即时联系。正常请进行以下操作：将细胞取出转移至液氮或-80度冰箱保存，建议尽早复苏。复苏第一管如有活性状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。\xa0收到细胞后，检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等问题，请即时联系。正常请进行以下操作：将细胞取出转移至液氮或-80度冰箱保存，建议尽早复苏。复苏第一管如有活性状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。\xa0收到细胞后，检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等问题，请即时联系。正常请进行以下操作：将细胞取出转移至液氮或-80度冰箱收到细胞后，检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等问题，请即时联系。正常请进行以下操作：将细胞取出转移至液氮或-80度冰箱收到细胞后，检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等问题，请即时联系。正常请进行以下操作：将细胞取出转移至液氮或收到细胞后，检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等问题，请即时联系。正常请进行以下操作：将细胞取出转移至液氮或-80-80度冰箱度冰箱保存，保存，保存，保存，建议尽早复苏。复苏第一管建议尽早复苏。复苏第一管建议尽早复苏。复苏第一管建议尽早复苏。复苏第一管如如如如有活性状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。有活性状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。有活性状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。有活性状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。\xa0\xa0