\n

（一）细胞总RNA的提取

1、6孔板细胞汇合度为90-100%时，取出无菌室，去其上清，用PBS洗两次后，每孔加TRIZOL试剂 1 ml，摇匀，无菌罩内消化3-5 min。

2、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml EP管中，加新开的氯仿0.2 ml，轻摇15 s。

3、室温静置2-3 min后，12000 rpm，15 min，4 ℃，离心。然后取上清无色水相（约0.6 ml）到 EP管（DEPC处理过），加0.5 ml新开的异丙醇，室温下静置10 min。

4、12000 rpm，10 min，4 ℃，离心。观察总RNA在管底的白色沉淀，弃去上清，75%乙醇1.0 ml洗涤（用DEPC水新配制）后，7500 rpm，5 min，4 ℃离心。

5、去上清，点离，用小Tip吸干液体。气干沉淀5-10 min， DEPC处理水20-30 μl加入，中枪打匀，55-60 ℃水浴10 min溶解总RNA，测OD值。

6、电泳。

（二）从总RNA中分离mRNA（Oligotex mRNA Mini Kit,Cat.no.:70022, QIAGEN）

1、取上述提取的总RNA若干（少于0.25 mg）到一个新的无RNase 的EP管中，用无RNase的水定容到250 μl。

2、加入Buffer OBB 250 μl, Oligotex Suspension 15 μl。用Tip打匀或用手弹匀。

3、70℃水浴，3 min（裂解RNA的二级结构）。

4、20-30℃条件下，静置10 min（让Oligotex与mRNA结合）。

5、高速离心2 min，小心吸走上清（该上清要保留），留下约50 μl的上清在原管里。

6、用Buffer OW2 400 μl重悬含Oligotex/mRNA复合物的沉淀，然后将这些加到套有1.5 ml EP管的SPIN柱子上，高速离心1 min。

7、将SPIN柱子移到一个新的EP管上，加Buffer OW2 400 μl到柱子，高速离心1 min，丢掉滤过液。

8、将SPIN柱子移到一个新的EP管上，加20-100 μl热的（70 ℃）Buffer OEB到柱子上，用Tip来回吸打3-4 次，高速离心1 min。

9、为保证最大的 mRNA产量，可再次重复第8步。

10、电泳。


裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂。这两种方法（包括SDS 和溶菌酶处理等）提取纯化DNA中常用的方法。机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成DNA 的断裂。

一、机械裂解法主要有以下两中：

1、热休克（Thermal shock），既反复冻溶法，是一种常用的机械裂解方式比，通常由冷冻和解冻两部分组成（freezing and thawing）,。

原理：由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。冷冻通常在液氮或-20°C冰上进行，解冻可以在37、50、65 或100℃水浴中进热休克比化学裂解温和，但是很有效，有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率。

2、超声波处理（Ultrasonication）既利用超声加热的方法，把细胞破碎。但这种处理会导致DNA 的断裂，所以加热不宜过剧烈，要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过5秒，间隙时间最好大于超声时间，这些都有利于保护酶的活性。bead-beating 也是常用的机械处理方式，有报道指出bead-beating 比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好 虽然DNA产量较高，但通常得到的DNA片段较小。

二、化学裂解和酶裂解法（在提核酸时联合使用）

主要是裂解液处理法，细胞裂解液的主要目的有以下几种：

（1）利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；

（2）溶解蛋白；

（3）蛋白变性使其稳定；

（4）抑制蛋白酶活性。

主要根据不同的目的，裂解液的组成有所不同，主要有提取核酸和蛋白两中。在提取RNA或DNA时，我们主要是要充分裂解细胞，得到更多的核酸；如果我们的目的是蛋白，那要根据蛋白的位置、特性等因素考虑裂解液，在提取蛋白后，再根据实验需要复性蛋白等。以下是细胞裂解中常用试剂和其作用：

50 mM Tris-HCl pH 7.4（缓冲体系），150 mM NaCl（等渗体系），1 mM PMSF （强大的蛋白酶抑制剂），1 mM EDTA（变性剂和稳定剂），5 μg/ml Aprotinin（蛋白酶抑制剂），5 μg/ml Leupeptin（蛋白酶抑制剂），1% Triton x-100（破坏细胞），1% Sodium deoxycholate（中度变性剂和蛋白溶解剂），0.1% SDS（强变性剂和蛋白溶解剂）。7M 尿素，2M Liu脲(可以提高膜蛋白的融解），蛋白酶K等。

（一）细胞总RNA的提取（一）细胞总RNA的提取（一）细胞总RNA的提取（一）细胞总RNA的提取（一）细胞总（一）细胞总RNA的提取的提取

1、6孔板细胞汇合度为90-100%时，取出无菌室，去其上清，用PBS洗两次后，每孔加TRIZOL试剂 1 ml，摇匀，无菌罩内消化3-5 min。1、6孔板细胞汇合度为90-100%时，取出无菌室，去其上清，用PBS洗两次后，每孔加TRIZOL试剂 1 ml，摇匀，无菌罩内消化3-5 min。1、6孔板细胞汇合度为90-100%时，取出无菌室，去其上清，用PBS洗两次后，每孔加TRIZOL试剂 1 ml，摇匀，无菌罩内消化3-5 min。1、6孔板细胞汇合度为90-100%时，取出无菌室，去其上清，用PBS洗两次后，每孔加TRIZOL试剂 1 ml，摇匀，无菌罩内消化3-5 min。1、、66孔板细胞汇合度为孔板细胞汇合度为90-100%90-100%时，取出无菌室，去其上清，用时，取出无菌室，去其上清，用PBSPBS洗两次后，每孔加洗两次后，每孔加TRIZOLTRIZOL试剂 试剂 1 ml1 ml，摇匀，无菌罩内消化，摇匀，无菌罩内消化3-5 min3-5 min。。

2、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml EP管中，加新开的氯仿0.2 ml，轻摇15 s。2、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml EP管中，加新开的氯仿0.2 ml，轻摇15 s。2、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml EP管中，加新开的氯仿0.2 ml，轻摇15 s。2、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml EP管中，加新开的氯仿0.2 ml，轻摇15 s。2、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPCDEPC处理过的处理过的1.5 ml EP1.5 ml EP管中，加新开的氯仿管中，加新开的氯仿0.2 ml0.2 ml，轻摇，轻摇15 s15 s。。

3、室温静置2-3 min后，12000 rpm，15 min，4 ℃，离心。然后取上清无色水相（约0.6 ml）到 EP管（DEPC处理过），加0.5 ml新开的异丙醇，室温下静置10 min。3、室温静置2-3 min后，12000 rpm，15 min，4 ℃，离心。然后取上清无色水相（约0.6 ml）到 EP管（DEPC处理过），加0.5 ml新开的异丙醇，室温下静置10 min。3、室温静置2-3 min后，12000 rpm，15 min，4 ℃，离心。然后取上清无色水相（约0.6 ml）到 EP管（DEPC处理过），加0.5 ml新开的异丙醇，室温下静置10 min。3、室温静置2-3 min后，12000 rpm，15 min，4 ℃，离心。然后取上清无色水相（约0.6 ml）到 EP管（DEPC处理过），加0.5 ml新开的异丙醇，室温下静置10 min。3、室温静置、室温静置2-3 min2-3 min后，后，12000 rpm12000 rpm，，15 min15 min，，4 4 ℃，离心。然后取上清无色水相（约℃，离心。然后取上清无色水相（约0.6 ml0.6 ml）到 ）到 EPEP管（管（DEPCDEPC处理过），加处理过），加0.5 ml0.5 ml新开的异丙醇，室温下静置新开的异丙醇，室温下静置10 min10 min。。

4、12000 rpm，10 min，4 ℃，离心。观察总RNA在管底的白色沉淀，弃去上清，75%乙醇1.0 ml洗涤（用DEPC水新配制）后，7500 rpm，5 min，4 ℃离心。4、12000 rpm，10 min，4 ℃，离心。观察总RNA在管底的白色沉淀，弃去上清，75%乙醇1.0 ml洗涤（用DEPC水新配制）后，7500 rpm，5 min，4 ℃离心。4、12000 rpm，10 min，4 ℃，离心。观察总RNA在管底的白色沉淀，弃去上清，75%乙醇1.0 ml洗涤（用DEPC水新配制）后，7500 rpm，5 min，4 ℃离心。4、12000 rpm，10 min，4 ℃，离心。观察总RNA在管底的白色沉淀，弃去上清，75%乙醇1.0 ml洗涤（用DEPC水新配制）后，7500 rpm，5 min，4 ℃离心。4、、12000 rpm12000 rpm，，10 min10 min，，4 4 ℃，离心。观察总℃，离心。观察总RNARNA在管底的白色沉淀，弃去上清，在管底的白色沉淀，弃去上清，75%75%乙醇乙醇1.0 ml1.0 ml洗涤（用洗涤（用DEPCDEPC水新配制）后，水新配制）后，7500 rpm7500 rpm，，5 min5 min，，4 4 ℃离心。℃离心。

5、去上清，点离，用小Tip吸干液体。气干沉淀5-10 min， DEPC处理水20-30 μl加入，中枪打匀，55-60 ℃水浴10 min溶解总RNA，测OD值。5、去上清，点离，用小Tip吸干液体。气干沉淀5-10 min， DEPC处理水20-30 μl加入，中枪打匀，55-60 ℃水浴10 min溶解总RNA，测OD值。5、去上清，点离，用小Tip吸干液体。气干沉淀5-10 min， DEPC处理水20-30 μl加入，中枪打匀，55-60 ℃水浴10 min溶解总RNA，测OD值。5、去上清，点离，用小Tip吸干液体。气干沉淀5-10 min， DEPC处理水20-30 μl加入，中枪打匀，55-60 ℃水浴10 min溶解总RNA，测OD值。5、去上清，点离，用小、去上清，点离，用小TipTip吸干液体。气干沉淀吸干液体。气干沉淀5-10 min5-10 min， ， DEPCDEPC处理水处理水20-30 20-30 μμll加入，中枪打匀，加入，中枪打匀，55-60 55-60 ℃水浴℃水浴10 min10 min溶解总溶解总RNARNA，测，测ODOD值。值。

6、电泳。6、电泳。6、电泳。6、电泳。6、电泳。、电泳。

（二）从总RNA中分离mRNA（Oligotex mRNA Mini Kit,Cat.no.:70022, QIAGEN）（二）从总RNA中分离mRNA（Oligotex mRNA Mini Kit,Cat.no.:70022, QIAGEN）（二）从总RNA中分离mRNA（Oligotex mRNA Mini Kit,Cat.no.:70022, QIAGEN）（二）从总RNA中分离mRNA（Oligotex mRNA Mini Kit,Cat.no.:70022, QIAGEN）（二）从总（二）从总RNA中分离中分离mRNAmRNA（（Oligotex mRNA Mini Kit,Cat.no.:70022, QIAGENOligotex mRNA Mini Kit,Cat.no.:70022, QIAGEN））

1、取上述提取的总RNA若干（少于0.25 mg）到一个新的无RNase 的EP管中，用无RNase的水定容到250 μl。1、取上述提取的总RNA若干（少于0.25 mg）到一个新的无RNase 的EP管中，用无RNase的水定容到250 μl。1、取上述提取的总RNA若干（少于0.25 mg）到一个新的无RNase 的EP管中，用无RNase的水定容到250 μl。1、取上述提取的总RNA若干（少于0.25 mg）到一个新的无RNase 的EP管中，用无RNase的水定容到250 μl。1、取上述提取的总、取上述提取的总RNARNA若干（少于若干（少于0.25 mg0.25 mg）到一个新的无）到一个新的无RNase RNase 的的EPEP管中，用无管中，用无RNaseRNase的水定容到的水定容到250 250 μμll。。

2、加入Buffer OBB 250 μl, Oligotex Suspension 15 μl。用Tip打匀或用手弹匀。2、加入Buffer OBB 250 μl, Oligotex Suspension 15 μl。用Tip打匀或用手弹匀。2、加入Buffer OBB 250 μl, Oligotex Suspension 15 μl。用Tip打匀或用手弹匀。2、加入Buffer OBB 250 μl, Oligotex Suspension 15 μl。用Tip打匀或用手弹匀。2、加入、加入Buffer OBB 250 Buffer OBB 250 μμl, Oligotex Suspension 15 l, Oligotex Suspension 15 μμll。用。用TipTip打匀或用手弹匀。打匀或用手弹匀。

3、70℃水浴，3 min（裂解RNA的二级结构）。3、70℃水浴，3 min（裂解RNA的二级结构）。3、70℃水浴，3 min（裂解RNA的二级结构）。3、70℃水浴，3 min（裂解RNA的二级结构）。3、、7070℃水浴，℃水浴，3 min3 min（裂解（裂解RNARNA的二级结构）。的二级结构）。

4、20-30℃条件下，静置10 min（让Oligotex与mRNA结合）。4、20-30℃条件下，静置10 min（让Oligotex与mRNA结合）。4、20-30℃条件下，静置10 min（让Oligotex与mRNA结合）。4、20-30℃条件下，静置10 min（让Oligotex与mRNA结合）。4、、20-3020-30℃条件下，静置℃条件下，静置10 min10 min（让（让OligotexOligotex与与mRNAmRNA结合）。结合）。

5、高速离心2 min，小心吸走上清（该上清要保留），留下约50 μl的上清在原管里。5、高速离心2 min，小心吸走上清（该上清要保留），留下约50 μl的上清在原管里。5、高速离心2 min，小心吸走上清（该上清要保留），留下约50 μl的上清在原管里。5、高速离心2 min，小心吸走上清（该上清要保留），留下约50 μl的上清在原管里。5、高速离心、高速离心2 min2 min，小心吸走上清（该上清要保留），留下约，小心吸走上清（该上清要保留），留下约50 50 μμll的上清在原管里。的上清在原管里。

6、用Buffer OW2 400 μl重悬含Oligotex/mRNA复合物的沉淀，然后将这些加到套有1.5 ml EP管的SPIN柱子上，高速离心1 min。6、用Buffer OW2 400 μl重悬含Oligotex/mRNA复合物的沉淀，然后将这些加到套有1.5 ml EP管的SPIN柱子上，高速离心1 min。6、用Buffer OW2 400 μl重悬含Oligotex/mRNA复合物的沉淀，然后将这些加到套有1.5 ml EP管的SPIN柱子上，高速离心1 min。6、用Buffer OW2 400 μl重悬含Oligotex/mRNA复合物的沉淀，然后将这些加到套有1.5 ml EP管的SPIN柱子上，高速离心1 min。6、用、用Buffer OW2 400 Buffer OW2 400 μμll重悬含重悬含Oligotex/mRNAOligotex/mRNA复合物的沉淀，然后将这些加到套有复合物的沉淀，然后将这些加到套有1.5 ml EP1.5 ml EP管的管的SPINSPIN柱子上，高速离心柱子上，高速离心1 min1 min。。

7、将SPIN柱子移到一个新的EP管上，加Buffer OW2 400 μl到柱子，高速离心1 min，丢掉滤过液。7、将SPIN柱子移到一个新的EP管上，加Buffer OW2 400 μl到柱子，高速离心1 min，丢掉滤过液。7、将SPIN柱子移到一个新的EP管上，加Buffer OW2 400 μl到柱子，高速离心1 min，丢掉滤过液。7、将SPIN柱子移到一个新的EP管上，加Buffer OW2 400 μl到柱子，高速离心1 min，丢掉滤过液。7、将、将SPINSPIN柱子移到一个新的柱子移到一个新的EPEP管上，加管上，加Buffer OW2 400 Buffer OW2 400 μμll到柱子，高速离心到柱子，高速离心1 min1 min，丢掉滤过液。，丢掉滤过液。

8、将SPIN柱子移到一个新的EP管上，加20-100 μl热的（70 ℃）Buffer OEB到柱子上，用Tip来回吸打3-4 次，高速离心1 min。8、将SPIN柱子移到一个新的EP管上，加20-100 μl热的（70 ℃）Buffer OEB到柱子上，用Tip来回吸打3-4 次，高速离心1 min。8、将SPIN柱子移到一个新的EP管上，加20-100 μl热的（70 ℃）Buffer OEB到柱子上，用Tip来回吸打3-4 次，高速离心1 min。8、将SPIN柱子移到一个新的EP管上，加20-100 μl热的（70 ℃）Buffer OEB到柱子上，用Tip来回吸打3-4 次，高速离心1 min。8、将、将SPINSPIN柱子移到一个新的柱子移到一个新的EPEP管上，加管上，加20-100 20-100 μμll热的（热的（70 70 ℃）℃）Buffer OEBBuffer OEB到柱子上，用到柱子上，用TipTip来回吸打来回吸打3-4 3-4 次，高速离心次，高速离心1 min1 min。。

9、为保证最大的 mRNA产量，可再次重复第8步。9、为保证最大的 mRNA产量，可再次重复第8步。9、为保证最大的 mRNA产量，可再次重复第8步。9、为保证最大的 mRNA产量，可再次重复第8步。9、为保证最大的 、为保证最大的 mRNAmRNA产量，可再次重复第产量，可再次重复第88步。步。

10、电泳。10、电泳。10、电泳。10、电泳。10、电泳。、电泳。


裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂。这两种方法（包括SDS 和溶菌酶处理等）提取纯化DNA中常用的方法。机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成DNA 的断裂。裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂。这两种方法（包括SDS 和溶菌酶处理等）提取纯化DNA中常用的方法。机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成DNA 的断裂。裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂。这两种方法（包括SDS 和溶菌酶处理等）提取纯化DNA中常用的方法。机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成DNA 的断裂。裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂。这两种方法（包括SDS 和溶菌酶处理等）提取纯化DNA中常用的方法。机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成DNA 的断裂。裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂。这两种方法（包括断裂。这两种方法（包括SDS SDS 和溶菌酶处理等）提取纯化和溶菌酶处理等）提取纯化DNADNA中常用的方法。机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成中常用的方法。机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成DNA DNA 的断裂。的断裂。

一、机械裂解法主要有以下两中：一、机械裂解法主要有以下两中：一、机械裂解法主要有以下两中：一、机械裂解法主要有以下两中：一、机械裂解法主要有以下两中：一、机械裂解法主要有以下两中：

1、热休克（Thermal shock），既反复冻溶法，是一种常用的机械裂解方式比，通常由冷冻和解冻两部分组成（freezing and thawing）,。1、热休克（Thermal shock），既反复冻溶法，是一种常用的机械裂解方式比，通常由冷冻和解冻两部分组成（freezing and thawing）,。1、热休克（Thermal shock），既反复冻溶法，是一种常用的机械裂解方式比，通常由冷冻和解冻两部分组成（freezing and thawing）,。1、热休克（Thermal shock），既反复冻溶法，是一种常用的机械裂解方式比，通常由冷冻和解冻两部分组成（freezing and thawing）,。1、热休克（、热休克（Thermal shockThermal shock），既反复冻溶法，是一种常用的机械裂解方式比，通常由冷冻和解冻两部分组成（），既反复冻溶法，是一种常用的机械裂解方式比，通常由冷冻和解冻两部分组成（freezing and thawingfreezing and thawing））,,。。

原理：由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。冷冻通常在液氮或-20°C冰上进行，解冻可以在37、50、65 或100℃水浴中进热休克比化学裂解温和，但是很有效，有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率。原理：由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。冷冻通常在液氮或-20°C冰上进行，解冻可以在37、50、65 或100℃水浴中进热休克比化学裂解温和，但是很有效，有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率。原理：由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。冷冻通常在液氮或-20°C冰上进行，解冻可以在37、50、65 或100℃水浴中进热休克比化学裂解温和，但是很有效，有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率。原理：由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。冷冻通常在液氮或-20°C冰上进行，解冻可以在37、50、65 或100℃水浴中进热休克比化学裂解温和，但是很有效，有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率。原理：由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。冷冻通常在液氮或原理：由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。冷冻通常在液氮或-20°°CC冰上进行，解冻可以在冰上进行，解冻可以在3737、、5050、、65 65 或或100100℃水浴中进热休克比化学裂解温和，但是很有效，有资料表明用热休克和溶菌酶与℃水浴中进热休克比化学裂解温和，但是很有效，有资料表明用热休克和溶菌酶与SDSSDS的方法获得了的方法获得了90%90%的细胞裂解率。的细胞裂解率。

2、超声波处理（Ultrasonication）既利用超声加热的方法，把细胞破碎。但这种处理会导致DNA 的断裂，所以加热不宜过剧烈，要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过5秒，间隙时间最好大于超声时间，这些都有利于保护酶的活性。bead-beating 也是常用的机械处理方式，有报道指出bead-beating 比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好 虽然DNA产量较高，但通常得到的DNA片段较小。2、超声波处理（Ultrasonication）既利用超声加热的方法，把细胞破碎。但这种处理会导致DNA 的断裂，所以加热不宜过剧烈，要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过5秒，间隙时间最好大于超声时间，这些都有利于保护酶的活性。bead-beating 也是常用的机械处理方式，有报道指出bead-beating 比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好 虽然DNA产量较高，但通常得到的DNA片段较小。2、超声波处理（Ultrasonication）既利用超声加热的方法，把细胞破碎。但这种处理会导致DNA 的断裂，所以加热不宜过剧烈，要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过5秒，间隙时间最好大于超声时间，这些都有利于保护酶的活性。bead-beating 也是常用的机械处理方式，有报道指出bead-beating 比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好 虽然DNA产量较高，但通常得到的DNA片段较小。2、超声波处理（Ultrasonication）既利用超声加热的方法，把细胞破碎。但这种处理会导致DNA 的断裂，所以加热不宜过剧烈，要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过5秒，间隙时间最好大于超声时间，这些都有利于保护酶的活性。bead-beating 也是常用的机械处理方式，有报道指出bead-beating 比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好 虽然DNA产量较高，但通常得到的DNA片段较小。2、超声波处理（、超声波处理（UltrasonicationUltrasonication）既利用超声加热的方法，把细胞破碎。但这种处理会导致）既利用超声加热的方法，把细胞破碎。但这种处理会导致DNA DNA 的断裂，所以加热不宜过剧烈，要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过的断裂，所以加热不宜过剧烈，要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过55秒，间隙时间最好大于超声时间，这些都有利于保护酶的活性。秒，间隙时间最好大于超声时间，这些都有利于保护酶的活性。bead-beating bead-beating 也是常用的机械处理方式，有报道指出也是常用的机械处理方式，有报道指出bead-beating bead-beating 比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好 虽然比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好 虽然DNADNA产量较高，但通常得到的产量较高，但通常得到的DNADNA片段较小。片段较小。

二、化学裂解和酶裂解法（在提核酸时联合使用）二、化学裂解和酶裂解法（在提核酸时联合使用）二、化学裂解和酶裂解法（在提核酸时联合使用）二、化学裂解和酶裂解法（在提核酸时联合使用）二、二、 化学裂解和酶裂解法（在提核酸时联合使用）化学裂解和酶裂解法（在提核酸时联合使用）

主要是裂解液处理法，细胞裂解液的主要目的有以下几种：主要是裂解液处理法，细胞裂解液的主要目的有以下几种：主要是裂解液处理法，细胞裂解液的主要目的有以下几种：主要是裂解液处理法，细胞裂解液的主要目的有以下几种：主要是裂解液处理法，细胞裂解液的主要目的有以下几种：主要是裂解液处理法，细胞裂解液的主要目的有以下几种：

（1）利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；（1）利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；（1）利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；（1）利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；（（1）利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；）利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；

（2）溶解蛋白；（2）溶解蛋白；（2）溶解蛋白；（2）溶解蛋白；（（2）溶解蛋白；）溶解蛋白；

（3）蛋白变性使其稳定；（3）蛋白变性使其稳定；（3）蛋白变性使其稳定；（3）蛋白变性使其稳定；（（3）蛋白变性使其稳定；）蛋白变性使其稳定；

（4）抑制蛋白酶活性。（4）抑制蛋白酶活性。（4）抑制蛋白酶活性。（4）抑制蛋白酶活性。（（4）抑制蛋白酶活性。）抑制蛋白酶活性。

主要根据不同的目的，裂解液的组成有所不同，主要有提取核酸和蛋白两中。在提取RNA或DNA时，我们主要是要充分裂解细胞，得到更多的核酸；如果我们的目的是蛋白，那要根据蛋白的位置、特性等因素考虑裂解液，在提取蛋白后，再根据实验需要复性蛋白等。以下是细胞裂解中常用试剂和其作用：主要根据不同的目的，裂解液的组成有所不同，主要有提取核酸和蛋白两中。在提取RNA或DNA时，我们主要是要充分裂解细胞，得到更多的核酸；如果我们的目的是蛋白，那要根据蛋白的位置、特性等因素考虑裂解液，在提取蛋白后，再根据实验需要复性蛋白等。以下是细胞裂解中常用试剂和其作用：主要根据不同的目的，裂解液的组成有所不同，主要有提取核酸和蛋白两中。在提取RNA或DNA时，我们主要是要充分裂解细胞，得到更多的核酸；如果我们的目的是蛋白，那要根据蛋白的位置、特性等因素考虑裂解液，在提取蛋白后，再根据实验需要复性蛋白等。以下是细胞裂解中常用试剂和其作用：主要根据不同的目的，裂解液的组成有所不同，主要有提取核酸和蛋白两中。在提取RNA或DNA时，我们主要是要充分裂解细胞，得到更多的核酸；如果我们的目的是蛋白，那要根据蛋白的位置、特性等因素考虑裂解液，在提取蛋白后，再根据实验需要复性蛋白等。以下是细胞裂解中常用试剂和其作用：主要根据不同的目的，裂解液的组成有所不同，主要有提取核酸和蛋白两中。在提取主要根据不同的目的，裂解液的组成有所不同，主要有提取核酸和蛋白两中。在提取RNA或或DNADNA时，我们主要是要充分裂解细胞，得到更多的核酸；如果我们的目的是蛋白，那要根据蛋白的位置、特性等因素考虑裂解液，在提取蛋白后，再根据实验需要复性蛋白等。以下是细胞裂解中常用试剂和其作用：时，我们主要是要充分裂解细胞，得到更多的核酸；如果我们的目的是蛋白，那要根据蛋白的位置、特性等因素考虑裂解液，在提取蛋白后，再根据实验需要复性蛋白等。以下是细胞裂解中常用试剂和其作用：

50 mM Tris-HCl pH 7.4（缓冲体系），150 mM NaCl（等渗体系），1 mM PMSF （强大的蛋白酶抑制剂），1 mM EDTA（变性剂和稳定剂），5 μg/ml Aprotinin（蛋白酶抑制剂），5 μg/ml Leupeptin（蛋白酶抑制剂），1% Triton x-100（破坏细胞），1% Sodium deoxycholate（中度变性剂和蛋白溶解剂），0.1% SDS（强变性剂和蛋白溶解剂）。7M 尿素，2M Liu脲(可以提高膜蛋白的融解），蛋白酶K等。50 mM Tris-HCl pH 7.4（缓冲体系），150 mM NaCl（等渗体系），1 mM PMSF （强大的蛋白酶抑制剂），1 mM EDTA（变性剂和稳定剂），5 μg/ml Aprotinin（蛋白酶抑制剂），5 μg/ml Leupeptin（蛋白酶抑制剂），1% Triton x-100（破坏细胞），1% Sodium deoxycholate（中度变性剂和蛋白溶解剂），0.1% SDS（强变性剂和蛋白溶解剂）。7M 尿素，2M Liu脲(可以提高膜蛋白的融解），蛋白酶K等。50 mM Tris-HCl pH 7.4（缓冲体系），150 mM NaCl（等渗体系），1 mM PMSF （强大的蛋白酶抑制剂），1 mM EDTA（变性剂和稳定剂），5 μg/ml Aprotinin（蛋白酶抑制剂），5 μg/ml Leupeptin（蛋白酶抑制剂），1% Triton x-100（破坏细胞），1% Sodium deoxycholate（中度变性剂和蛋白溶解剂），0.1% SDS（强变性剂和蛋白溶解剂）。7M 尿素，2M Liu脲(可以提高膜蛋白的融解），蛋白酶K等。50 mM Tris-HCl pH 7.4（缓冲体系），150 mM NaCl（等渗体系），1 mM PMSF （强大的蛋白酶抑制剂），1 mM EDTA（变性剂和稳定剂），5 μg/ml Aprotinin（蛋白酶抑制剂），5 μg/ml Leupeptin（蛋白酶抑制剂），1% Triton x-100（破坏细胞），1% Sodium deoxycholate（中度变性剂和蛋白溶解剂），0.1% SDS（强变性剂和蛋白溶解剂）。7M 尿素，2M Liu脲(可以提高膜蛋白的融解），蛋白酶K等。50 mM Tris-HCl pH 7.4（缓冲体系），（缓冲体系），150 mM NaCl150 mM NaCl（等渗体系），（等渗体系），1 mM PMSF 1 mM PMSF （强大的蛋白酶抑制剂），（强大的蛋白酶抑制剂），1 mM EDTA1 mM EDTA（变性剂和稳定剂），（变性剂和稳定剂），5 μg/ml Aprotinin5 μg/ml Aprotinin（蛋白酶抑制剂），（蛋白酶抑制剂），5 μg/ml Leupeptin5 μg/ml Leupeptin（蛋白酶抑制剂），（蛋白酶抑制剂），1% Triton x-1001% Triton x-100（破坏细胞），（破坏细胞），1% Sodium deoxycholate1% Sodium deoxycholate（中度变性剂和蛋白溶解剂），（中度变性剂和蛋白溶解剂），0.1% SDS0.1% SDS（强变性剂和蛋白溶解剂）。（强变性剂和蛋白溶解剂）。7M 7M 尿素，尿素，2M Liu2M Liu脲脲((可以提高膜蛋白的融解），蛋白酶可以提高膜蛋白的融解），蛋白酶KK等。等。