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猪可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）\xa0Elisa检测试剂盒（酶联免疫吸附试验法）使用说明书猪可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）\xa0Elisa检测试剂盒（酶联免疫吸附试验法）使用说明书猪可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）\xa0Elisa检测试剂盒（酶联免疫吸附试验法）使用说明书猪可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）\xa0Elisa检测试剂盒（酶联免疫吸附试验法）使用说明书猪可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）\xa0Elisa检测试剂盒（酶联免疫吸附试验法）使用说明书猪可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）\xa0Elisa检测试剂盒（酶联免疫吸附试验法）使用说明书

仅供科研实验研究使用，严禁用于临床诊断!\xa0仅供科研实验研究使用，严禁用于临床诊断!\xa0仅供科研实验研究使用，严禁用于临床诊断!仅供科研实验研究使用，严禁用于临床诊断!仅供科研实验研究使用，严禁用于临床诊断!仅供科研实验研究使用，严禁用于临床诊断!仅供科研实验研究使用，严禁用于临床诊断!仅供科研实验研究使用，严禁用于临床诊断仅供科研实验研究使用，严禁用于临床诊断!\xa0\xa0
l本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中\xa0猪可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）\xa0\xa0。l本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中\xa0猪可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）l本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中l本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中l本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中\xa0猪可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）\xa0\xa0\xa0\xa0。。。。
l有效期：6个月l有效期：6个月l有效期：6个月l有效期：6个月l有效期：66个月个月
l保存条件：2-8℃l保存条件：2-8℃l保存条件：2-8℃l保存条件：2-8℃l保存条件：2-82-8℃℃
[实验原理][实验原理][实验原理][实验原理][实验原理实验原理]]
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被\xa0\xa0猪可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1） \xa0\xa0捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的\xa0 \xa0猪可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1） \xa0\xa0呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被\xa0试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被）。往预先包被\xa0\xa0猪可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1） \xa0\xa0猪可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1） \xa0\xa0\xa0捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMBTMB显色，显色，TMBTMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的\xa0 \xa0 \xa0猪可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1） \xa0\xa0猪可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1） \xa0\xa0\xa0呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。呈正相关。用酶标仪在呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（波长下测定吸光度（OD OD 值），计算样品浓度。值），计算样品浓度。
[样本处理及要求][样本处理及要求][样本处理及要求][样本处理及要求][样本处理及要求样本处理及要求]]
1. \xa0血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。1. \xa0血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。1. \xa0血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。1. \xa0血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。1. \xa0血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置22小时或小时或44℃过夜，然后℃过夜，然后10001000××gg离心离心20 20 分钟，取上清即可，或将上清置于分钟，取上清即可，或将上清置于-20-20℃或℃或-80-80℃保存，但应避免反复冻融。℃保存，但应避免反复冻融。
2. \xa0血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2. \xa0血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2. \xa0血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2. \xa0血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2. \xa0血浆：用血浆：用EDTAEDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的3030分钟内于分钟内于2-82-8℃ ℃ 10001000××gg离心离心1515分钟，取上清即可检测，或将上清置于分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20-20℃或℃或-80-80℃保存，但应避免反复冻融。℃保存，但应避免反复冻融。
3. \xa0组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。3. \xa0组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。3. \xa0组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。3. \xa0组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。3. \xa0组织匀浆：用预冷的组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBSPBS（一般按（一般按1:91:9的重量体积比，比如的重量体积比，比如1g1g的组织样品对应的组织样品对应9mL9mL的的PBSPBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBSPBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于50005000××gg离心离心5~105~10分钟，取上清检测。分钟，取上清检测。
4. \xa0细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。4. \xa0细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。4. \xa0细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。4. \xa0细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。4. \xa0细胞培养物上清或其它生物标本：请细胞培养物上清或其它生物标本：请10001000××gg离心离心2020分钟，取上清即可检测，或将上清置于分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20-20℃或℃或-80-80℃保存，但应避免反复冻融。℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
[需要而未提供的试剂和器材][需要而未提供的试剂和器材][需要而未提供的试剂和器材][需要而未提供的试剂和器材][需要而未提供的试剂和器材需要而未提供的试剂和器材]]
1.酶标仪（450nm）1.酶标仪（450nm）1.酶标仪（450nm）1.酶标仪（450nm）1.酶标仪（酶标仪（450nm450nm））
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL2.高精度加样器及枪头：高精度加样器及枪头：0.5-10uL0.5-10uL、、2-20uL2-20uL、、20-200uL20-200uL、、200-1000uL200-1000uL
3.37℃恒温箱3.37℃恒温箱3.37℃恒温箱3.37℃恒温箱3.37℃恒温箱℃恒温箱
4.蒸馏水或去离子水4.蒸馏水或去离子水4.蒸馏水或去离子水4.蒸馏水或去离子水4.蒸馏水或去离子水蒸馏水或去离子水
[试剂盒组成][试剂盒组成][试剂盒组成][试剂盒组成][试剂盒组成试剂盒组成]]



备注：备注：备注：备注：备注：备注：
1. \xa0标准品浓度依次为：12、6、3、1.5、0.75、0.375 ng/mL1. \xa0标准品浓度依次为：12、6、3、1.5、0.75、0.375 ng/mL1. \xa0标准品浓度依次为：12、6、3、1.5、0.75、0.375 ng/mL1. \xa0标准品浓度依次为：12、6、3、1.5、0.75、0.375 ng/mL1. \xa0标准品浓度依次为：标准品浓度依次为：1212、、66、、33、、1.51.5、、0.750.75、、0.375 ng/mL0.375 ng/mL
2. \xa0经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。2. \xa0经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。2. \xa0经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。2. \xa0经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。2. \xa0经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取5050μμLL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
[注意事项][注意事项][注意事项][注意事项][注意事项注意事项]]
1、试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。1、试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。111、、、、试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2、实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。2、实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。222、、、、实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。3、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。333、、、、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4、使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。4、使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。444、、、、使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、、BB液时，避免使用带金属部分的加样器。液时，避免使用带金属部分的加样器。
5、使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。5、使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。555、、、、使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6、洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。6、洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。666、、、、洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7、底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。7、底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。777、、、、底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。底物底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物应挥发，避免长时间打开盖子。底物BB对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取ODOD值。值。
8、加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。8、加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。888、、、、加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9、按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。9、按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。999、、、、按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
[试剂准备][试剂准备][试剂准备][试剂准备][试剂准备试剂准备]]
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按11：：2020稀释，即稀释，即11份份2020×洗涤缓冲液加×洗涤缓冲液加1919份蒸馏水。份蒸馏水。
[操作步骤][操作步骤][操作步骤][操作步骤][操作步骤操作步骤]]
1、使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。1、使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。111、、、、使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。222、、、、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：：11稀释后加入稀释后加入50ul50ul于反应孔内。于反应孔内。
3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。333、、、、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。加入稀释好后的标准品加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品于反应孔、加入待测样品50ul50ul于反应孔内。立即加入于反应孔内。立即加入50ul50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，3737℃温育℃温育11小时。小时。
4、甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。4、甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。444、、、、甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作33次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。5、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。555、、、、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。每孔加入每孔加入80ul的亲和链酶素的亲和链酶素-HRP-HRP，轻轻振荡混匀，，轻轻振荡混匀，3737℃温育℃温育3030分钟。分钟。
6、甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。6、甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。666、、、、甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作33次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7、每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。7、每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。777、、、、每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。每孔加入底物每孔加入底物A、、BB各各50ul50ul，轻轻振荡混匀，，轻轻振荡混匀，3737℃温育℃温育1010分钟。避免光照。分钟。避免光照。
8、取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。8、取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。888、、、、取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。取出酶标板，迅速加入取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9、在450nm波长处测定各孔的OD值。9、在450nm波长处测定各孔的OD值。999、、、、在450nm波长处测定各孔的OD值。在450nm波长处测定各孔的OD值。在在450nm波长处测定各孔的波长处测定各孔的ODOD值。值。
[实验结果计算][实验结果计算][实验结果计算][实验结果计算][实验结果计算实验结果计算]]
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。以所测标准品的以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的ODOD值代入方程，计算出样品的浓度。值代入方程，计算出样品的浓度。
[试剂盒性能][试剂盒性能][试剂盒性能][试剂盒性能][试剂盒性能试剂盒性能]]
1. 检测范围：0.375 ng/mL – 12 ng/mL。1. 检测范围：0.375 ng/mL – 12 ng/mL。1. 检测范围：0.375 ng/mL – 12 ng/mL。1. 检测范围：0.375 ng/mL – 12 ng/mL。1. 检测范围：检测范围：0.375 ng/mL 0.375 ng/mL – – 12 ng/mL12 ng/mL。。
2. 灵敏度：最低检测浓度小于0.1 ng/mL。2. 灵敏度：最低检测浓度小于0.1 ng/mL。2. 灵敏度：最低检测浓度小于0.1 ng/mL。2. 灵敏度：最低检测浓度小于0.1 ng/mL。2. 灵敏度：最低检测浓度小于灵敏度：最低检测浓度小于0.1 ng/mL0.1 ng/mL。。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。4. 重复性：板内变异系数小于重复性：板内变异系数小于10% 10% ，板间变异系数小于，板间变异系数小于15% 15% 。。