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蛋白激酶A(protein kinase A;PKA),又称cAMP依赖性蛋白激酶(cAMP dependent protein kinase),是第二信使依赖性酶。通过影响腺苷酸环化酶(adenylate cyclase;AC)和磷酸二酯酶(phosphodiesterase)的活性,而决定cAMP水平,达到调节PKA活性,进而调节细胞对于各种外部刺激的反应,包括细胞生长、代谢、DNA复制、细胞分裂、肌动蛋白细胞骨架重排等。该全酶(holoenzyme)具有两个催化亚体和两个调节亚体构成的四联体结构。cAMP结合调节亚体,而释放出活化的催化亚体,产生目标蛋白上丝/苏氨酸
(serine/threonine)的磷酸化,诸如CREB、Histone H1、CREM、NF-κB和核受体等,而调控一系列细胞活动。其磷酸化目标序列为Arg-Arg-X-Ser/Thr或Lys-Arg-X-X- Ser/Thr。蛋白激酶A 至少有两个亚酶:I型亚酶存在于胞浆内,而二型亚酶与细胞膜、细胞器和细胞骨架相关。基于底物XXXXXX,在ATP的存在下,受到PKA激酶的磷酸化,获得产物磷酸化多肽,进而通过丙酮酸激酶(pyruvate kinase;PK)和乳酸脱氢酶
(lactate dehydrogenase;LDH)反应系统中,还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide;NAD),其峰值的变化(340nm),来定量分析蛋白激酶A的活性。其反应方式为: