HieffTM qPCR SYBR? Green Master Mix (No Rox Plus)[可申请试用]

¥498
Yeasen翌圣
上海
2022-07-13 00:55

翌圣生物科技(上海)股份有限公司

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产品说明

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产品信息
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产品名称产品编号规格储存价格(元)回报价(元)
HieffTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (No Rox)11201ES031ml-20避光180.00180.00
11201ES085×1ml-20℃避光740.00498.00
11201ES6020×5ml-20℃避光12877.005980.00
\xa0
产品描述
HieffTM\xa0qPCR\xa0SYBR?\xa0Green\xa0Master Mix(No Rox)是2×实时定量PCR扩增的预混合溶液。Mix中含有热启动HieffTM\xa0DNA Polymerase、SYBR?\xa0Green I、dNTPs、Mg2+。使用时,仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时荧光定量PCR,大大简化操作过程,降低污染几率。
本品采用的DNA聚合酶配体可以随温度变化实时调节DNA聚合酶活性。配方添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子,使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。

适用机型
Bio-Rad:\xa0CFX96TM, CFX384TM, iCycler iQTM, iQTM5, MyiQTM, MiniOpticonTM, Opticon?,\xa0Opticon?\xa02, Chromo4TM;
Eppendorf:\xa0Mastercycler?\xa0ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen:\xa0Corbett Rotor-Gene?\xa0Q, Rotor-Gene?\xa03000, Rotor-Gene?\xa06000;
Roche Applied Science:\xa0LightCycler?\xa0480, LightCycler?\xa02.0; Lightcycler?\xa096;
Thermo Scientific:\xa0PikoReal Cycler;\xa0Cepheid:\xa0SmartCycler?;\xa0Illumina:\xa0Eco qPCR.

反应体系(推荐冰上配制)
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组分体积(μl体积(μl终浓度
HieffTM\xa0qPCR\xa0SYBR?\xa0Green\xa0Master Mix\xa0(No Rox)2510
Forward Primer (10μM)10.40.2μM
Reverse Primer (10μM)10.40.2μM
模板DNAXX-
无菌超纯水to 50to 20-
注】:\xa0使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。
a)\xa0引物浓度:通常引物终浓度为0.2μM,也可以根据情况在0.1-1.0μM之间进行调整。
b)\xa0模板浓度
如模板类型为未稀释cDNA原液,使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。
c)\xa0模板稀释:cDNA原液建议5-10倍稀释,最佳模板加入量以扩增得到的CT值在20-30个循环为好。
d)\xa0反应体系:推荐使用20μl或50μl,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e)\xa0体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
扩增程序\xa0\xa0本产品可适用三步法和两步法程序)


三步法程序\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t
循环步骤温度时间循环数
预变性95℃5min1
变性95℃10sec40
退火55-60℃20sec
延伸72℃20sec
熔解曲线95℃15sec1
\t\t\t
\t\t\t\xa0
60℃60sec
95℃1










两步法程序\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t
循环步骤温度时间循环数
预变性95℃5min1
变性95℃10sec40
退火、延伸60℃30sec
熔解曲线95℃15sec1
60℃60sec
95℃15sec\t\t\t
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\t\t\t

【注】
a)\xa0预变性时间:根据不同模板和引物的具体情况可适当缩短至2min。
b)\xa0退火温度和时间:请根据引物和目的基因的长度进行调整。
c)\xa0荧光信号采集:请参考仪器设置。
d)\xa0熔解曲线:通常情况下可以使用仪器默认程序。


结果分析

定量实验至少需要三个生物学重复。反应结束后需要确认扩增曲线及熔解曲线。
1)\xa0扩增曲线:标准扩增曲线为S型。
    \t
  • 值落在20-30之间时,定量分析最准确;
  • \t
  • 值小于10,需要将稀释模板后,重新进行实验;
  • \t
  • 值介于30-35之间时,需要提高模板浓度,或者增大反应体系的体积,以提高扩增效率,保证结果分析的准确性;
  • \t
  • Ct值大于35时,检测结果无法定量分析基因的表达量,但可用于定性分析。
2)\xa0熔解曲线:
    \t
  • 熔解曲线单峰,表明反应特异性好可以进行定量结果分析;若熔解曲线出现双峰或者多峰,则不能进行定量分析。
  • \t
  • 熔解曲线出现双峰,需要通过DNA琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。
  • \t
  • 如果是引物二聚体,建议降低引物浓度,或者重新设计扩增效率高的引物。
  • \t
  • 如果是非特异性扩增,请提高退火温度,或者重新设计更高特异性的引物。

引物设计指南
1.\xa0推荐引物长度25bp左右。扩增产物长度150bp为佳,可以在100bp-300bp内选择。
2.\xa0正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。引物Tm值60℃-65℃为佳。
3.\xa0引物碱基分布要均匀,避免出现连续的4个相同碱基,GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。
4.\xa0引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。
5.\xa0引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物3’端有2个碱基以上的非特异性互补。
6.\xa0设计完成的引物需要进行扩增效率的检测,只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。

注意事项
1.\xa0推荐使用本公司cDNA合成试剂盒(货号:11104),以有效去除RNA样品中残留的基因组。
2.\xa0为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

运输与保存方式
冰袋运输。-20℃避光储存,有效期1年。
本品避免反复冻融。产品中含有荧光染料SYBR?\xa0Green I,保存或配制反应体系时需避免强光照射。

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产品名称产品货号规格价格(元)回报价(元)
UNICONTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (抗体法,No Rox)11198ES031ml336.00196.00
11198ES085×1ml1466.00586.00
11198ES255×5ml6156.002496.00
11198ES5010×5ml11086.004596.00
11198ES6020×5ml17596.007966.00
UNICONTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (抗体法,High Rox)11200ES031ml336.00196.00
11200ES085×1ml1466.00586.00
11200ES255×5ml6156.002496.00
11200ES5010×5ml11086.004596.00
11200ES6020×5ml17596.007966.00
HieffTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (No\xa0Rox)11201ES031ml180.00180.00
11201ES085×1ml740.00498.00
11201ES6020×5ml12877.005980.00
HieffTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (Low\xa0Rox\xa0Plus)11202ES031ml180.00180.00
11202ES085×1ml740.00498.00
11202ES6020×5ml12877.005980.00
HieffTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (High\xa0Rox\xa0Plus)11203ES031ml180.00180.00
11203ES085×1ml740.00498.00
11203ES6020×5ml12877.005980.00
HieffTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (Rox Provided Seperately)11204ES031ml180.00180.00
11204ES085×1ml740.00740.00
HieffTM\xa0qPCR TaqMan Probe Master Mix11205ES031ml225.00225.00
11205ES085×1ml740.00740.00\t\t\t
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产品信息
产品信息产品信息产品信息\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t
产品名称产品编号规格储存价格(元)回报价(元)
HieffTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (No Rox)11201ES031ml-20避光180.00180.00
11201ES085×1ml-20℃避光740.00498.00
11201ES6020×5ml-20℃避光12877.005980.00
\t\t\t\t\t\t产品名称\t\t\t产品编号\t\t\t规格\t\t\t储存\t\t\t价格(元)\t\t\t回报价(元)\t\t\t\t\t\t\tHieffTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (No Rox)\t\t\t11201ES03\t\t\t1ml\t\t\t-20避光\t\t\t180.00\t\t\t180.00\t\t\t\t\t\t\t11201ES08\t\t\t5×1ml\t\t\t-20℃避光\t\t\t740.00\t\t\t498.00\t\t\t\t\t\t\t11201ES60\t\t\t20×5ml\t\t\t-20℃避光\t\t\t12877.00\t\t\t5980.00\t\t\t\t\t\t\t\t产品名称\t\t\t产品编号\t\t\t规格\t\t\t储存\t\t\t价格(元)\t\t\t回报价(元)\t\t\t\t\t产品名称产品名称产品名称产品名称\t\t\t产品编号产品编号产品编号产品编号\t\t\t规格规格规格规格\t\t\t储存储存储存储存\t\t\t价格(元)价格(元)价格(元)价格(元)\t\t\t回报价(元)回报价(元)回报价(元)回报价(元)\t\t\t\t\t\t\tHieffTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (No Rox)\t\t\t11201ES03\t\t\t1ml\t\t\t-20避光\t\t\t180.00\t\t\t180.00\t\t\t\t\tHieffTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (No Rox)HieffTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (No Rox)HieffTMTM\xa0qPCR SYBR?\xa0?\xa0Green Master Mix (No Rox)\t\t\t11201ES0311201ES0311201ES03\t\t\t1ml1ml1ml\t\t\t-20避光-20-20避光避光\t\t\t180.00180.00180.00\t\t\t180.00180.00180.00\t\t\t\t\t\t\t11201ES08\t\t\t5×1ml\t\t\t-20℃避光\t\t\t740.00\t\t\t498.00\t\t\t\t\t11201ES0811201ES0811201ES08\t\t\t5×1ml5×1ml5×1ml\t\t\t-20℃避光-20℃避光-20℃避光\t\t\t740.00740.00740.00\t\t\t498.00498.00498.00\t\t\t\t\t\t\t11201ES60\t\t\t20×5ml\t\t\t-20℃避光\t\t\t12877.00\t\t\t5980.00\t\t\t\t\t11201ES6011201ES6011201ES60\t\t\t20×5ml20×5ml20×5ml\t\t\t-20℃避光-20℃避光-20℃避光\t\t\t12877.0012877.0012877.00\t\t\t5980.005980.005980.00\t\t\t
\xa0
\xa0产品描述
产品描述产品描述
HieffHieffHieffTM\xa0qPCR\xa0SYBR?\xa0Green\xa0Master Mix(No Rox)是2×实时定量PCR扩增的预混合溶液。Mix中含有热启动TMTM\xa0qPCR\xa0SYBR??\xa0Green\xa0Master Mix(No Rox)是2×实时定量PCR扩增的预混合溶液。Mix中含有热启动HieffTMHieffTMHieffTMTM\xa0DNA Polymerase、SYBR?\xa0Green I、dNTPs、Mg2+。使用时,仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时荧光定量PCR,大大简化操作过程,降低污染几率。
本品采用的DNA聚合酶配体可以随温度变化实时调节DNA聚合酶活性。配方添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子,使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。

适用机型
Bio-Rad:\xa0CFX96TM, CFX384TM, iCycler iQTM, iQTM5, MyiQTM, MiniOpticonTM, Opticon?,\xa0Opticon?\xa02, Chromo4TM;
Eppendorf:\xa0Mastercycler?\xa0ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen:\xa0Corbett Rotor-Gene?\xa0Q, Rotor-Gene?\xa03000, Rotor-Gene?\xa06000;
Roche Applied Science:\xa0LightCycler?\xa0480, LightCycler?\xa02.0; Lightcycler?\xa096;
Thermo Scientific:\xa0PikoReal Cycler;\xa0Cepheid:\xa0SmartCycler?;\xa0Illumina:\xa0Eco qPCR.

反应体系(推荐冰上配制)
\xa0DNA Polymerase、SYBR??\xa0Green I、dNTPs、Mg2+2+。使用时,仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时荧光定量PCR,大大简化操作过程,降低污染几率。
本品采用的DNA聚合酶配体可以随温度变化实时调节DNA聚合酶活性。配方添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子,使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。

适用机型适用机型
Bio-Rad:\xa0Bio-Rad:\xa0CFX96TMTM, CFX384TMTM, iCycler iQTMTM, iQTMTM5, MyiQTMTM, MiniOpticonTMTM, Opticon??,\xa0Opticon??\xa02, Chromo4TMTM;
Eppendorf:Eppendorf:\xa0Mastercycler??\xa0ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen:\xa0Qiagen:\xa0Corbett Rotor-Gene??\xa0Q, Rotor-Gene??\xa03000, Rotor-Gene??\xa06000;
Roche Applied Science:\xa0Roche Applied Science:\xa0LightCycler??\xa0480, LightCycler??\xa02.0; Lightcycler?\xa0?\xa096;
Thermo Scientific:Thermo Scientific:\xa0PikoReal Cycler;\xa0Cepheid:Cepheid:\xa0SmartCycler??;\xa0Illumina:Illumina:\xa0Eco qPCR.

反应体系(推荐冰上配制)反应体系(推荐冰上配制)\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t
组分体积(μl体积(μl终浓度
HieffTM\xa0qPCR\xa0SYBR?\xa0Green\xa0Master Mix\xa0(No Rox)2510
Forward Primer (10μM)10.40.2μM
Reverse Primer (10μM)10.40.2μM
模板DNAXX-
无菌超纯水to 50to 20-
\t\t\t\t\t\t组分\t\t\t体积(μl\t\t\t体积(μl\t\t\t终浓度\t\t\t\t\t\t\tHieffTM\xa0qPCR\xa0SYBR?\xa0Green\xa0Master Mix\xa0(No Rox)\t\t\t25\t\t\t10\t\t\t\t\t\t\t\t\t\tForward Primer (10μM)\t\t\t1\t\t\t0.4\t\t\t0.2μM\t\t\t\t\t\t\tReverse Primer (10μM)\t\t\t1\t\t\t0.4\t\t\t0.2μM\t\t\t\t\t\t\t模板DNA\t\t\tX\t\t\tX\t\t\t-\t\t\t\t\t\t\t无菌超纯水\t\t\tto 50\t\t\tto 20\t\t\t-\t\t\t\t\t\t\t\t组分\t\t\t体积(μl\t\t\t体积(μl\t\t\t终浓度\t\t\t\t\t组分组分组分组分\t\t\t体积(μl体积(体积(体积(μlμlμlμl)\t\t\t体积(μl体积(μl体积(体积(μlμl)\t\t\t终浓度终浓度终浓度终浓度\t\t\t\t\t\t\tHieffTM\xa0qPCR\xa0SYBR?\xa0Green\xa0Master Mix\xa0(No Rox)\t\t\t25\t\t\t10\t\t\t\t\t\t\t\tHieffTM\xa0qPCR\xa0SYBR?\xa0Green\xa0Master Mix\xa0(No Rox)HieffTM\xa0qPCR\xa0SYBR?\xa0Green\xa0Master Mix\xa0(No Rox)HieffTMTM\xa0qPCR\xa0SYBR??\xa0Green\xa0Master Mix\xa0(No Rox)\t\t\t252525\t\t\t101010\t\t\t1×\t\t\t\t\t\t\tForward Primer (10μM)\t\t\t1\t\t\t0.4\t\t\t0.2μM\t\t\t\t\tForward Primer (10μM)Forward Primer (10μM)Forward Primer (10μM)\t\t\t111\t\t\t0.40.40.4\t\t\t0.2μM0.2μM0.2μM\t\t\t\t\t\t\tReverse Primer (10μM)\t\t\t1\t\t\t0.4\t\t\t0.2μM\t\t\t\t\tReverse Primer (10μM)Reverse Primer (10μM)Reverse Primer (10μM)\t\t\t111\t\t\t0.40.40.4\t\t\t0.2μM0.2μM0.2μM\t\t\t\t\t\t\t模板DNA\t\t\tX\t\t\tX\t\t\t-\t\t\t\t\t模板DNA模板DNA模板DNA\t\t\tXXX\t\t\tXXX\t\t\t---\t\t\t\t\t\t\t无菌超纯水\t\t\tto 50\t\t\tto 20\t\t\t-\t\t\t\t\t无菌超纯水无菌超纯水无菌超纯水\t\t\tto 50to 50to 50\t\t\tto 20to 20to 20\t\t\t---\t\t\t注】:\xa0使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。
a)\xa0引物浓度:通常引物终浓度为0.2μM,也可以根据情况在0.1-1.0μM之间进行调整。
b)\xa0模板浓度
注】注】:\xa0使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。
a)\xa0引物浓度引物浓度:通常引物终浓度为0.2μM,也可以根据情况在0.1-1.0μM之间进行调整。
b)\xa0模板浓度模板浓度:如模板类型为未稀释cDNA原液,使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。
c)\xa0c)\xa0模板稀释模板稀释:cDNA原液建议5-10倍稀释,最佳模板加入量以扩增得到的CT值在20-30个循环为好。
d)\xa0反应体系:推荐使用20μl或50μl,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e)\xa0体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
扩增程序\xa0\xa0本产品可适用三步法和两步法程序)
d)\xa0反应体系反应体系:推荐使用20μl或50μl,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e)\xa0体系配制体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
扩增程序扩增程序\xa0\xa0本产品可适用三步法和两步法程序)本产品可适用三步法和两步法程序)

三步法程序三步法程序三步法程序\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t
循环步骤温度时间循环数
预变性95℃5min1
变性95℃10sec40
退火55-60℃20sec
延伸72℃20sec
熔解曲线95℃15sec1
\t\t\t
\t\t\t\xa0
60℃60sec
95℃1
\t\t\t\t\t\t循环步骤\t\t\t温度\t\t\t时间\t\t\t循环数\t\t\t\t\t\t\t预变性\t\t\t95℃\t\t\t5min\t\t\t1\t\t\t\t\t\t\t变性\t\t\t95℃\t\t\t10sec\t\t\t40\t\t\t\t\t\t\t退火\t\t\t55-60℃\t\t\t20sec\t\t\t\t\t\t\t延伸\t\t\t72℃\t\t\t20sec\t\t\t\t\t\t\t熔解曲线\t\t\t95℃\t\t\t15sec\t\t\t1
\t\t\t
\t\t\t\xa0\t\t\t\t\t\t\t60℃\t\t\t60sec\t\t\t\t\t\t\t95℃\t\t\t1\t\t\t\t\t\t\t\t循环步骤\t\t\t温度\t\t\t时间\t\t\t循环数\t\t\t\t\t循环步骤循环步骤循环步骤循环步骤\t\t\t温度温度温度温度\t\t\t时间时间时间时间\t\t\t循环数循环数循环数循环数\t\t\t\t\t\t\t预变性\t\t\t95℃\t\t\t5min\t\t\t1\t\t\t\t\t预变性预变性预变性\t\t\t95℃95℃95℃\t\t\t5min5min5min\t\t\t111\t\t\t\t\t\t\t变性\t\t\t95℃\t\t\t10sec\t\t\t40\t\t\t\t\t变性变性变性\t\t\t95℃95℃95℃\t\t\t10sec10sec10sec\t\t\t404040\t\t\t\t\t\t\t退火\t\t\t55-60℃\t\t\t20sec\t\t\t\t\t退火退火退火\t\t\t55-60℃55-60℃55-60℃\t\t\t20sec20sec20sec\t\t\t\t\t\t\t延伸\t\t\t72℃\t\t\t20sec\t\t\t\t\t延伸延伸延伸\t\t\t72℃72℃72℃\t\t\t20sec20sec20sec\t\t\t\t\t\t\t熔解曲线\t\t\t95℃\t\t\t15sec\t\t\t1
\t\t\t
\t\t\t\xa0\t\t\t\t\t熔解曲线熔解曲线熔解曲线\t\t\t95℃95℃95℃\t\t\t15sec15sec15sec\t\t\t1
\t\t\t
\t\t\t\xa011
\t\t\t
\t\t\t\xa0\t\t\t\t\t\t\t60℃\t\t\t60sec\t\t\t\t\t60℃60℃60℃\t\t\t60sec60sec60sec\t\t\t\t\t\t\t95℃\t\t\t1\t\t\t\t\t95℃95℃95℃\t\t\t111\t\t\t









两步法程序两步法程序\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t
循环步骤温度时间循环数
预变性95℃5min1
变性95℃10sec40
退火、延伸60℃30sec
熔解曲线95℃15sec1
60℃60sec
95℃15sec\t\t\t
\xa0
\t\t\t
\t\t\t\t\t\t循环步骤\t\t\t温度\t\t\t时间\t\t\t循环数\t\t\t\t\t\t\t预变性\t\t\t95℃\t\t\t5min\t\t\t1\t\t\t\t\t\t\t变性\t\t\t95℃\t\t\t10sec\t\t\t40\t\t\t\t\t\t\t退火、延伸\t\t\t60℃\t\t\t30sec\t\t\t\t\t\t\t熔解曲线\t\t\t95℃\t\t\t15sec\t\t\t1\t\t\t\t\t\t\t60℃\t\t\t60sec\t\t\t\t\t\t\t95℃\t\t\t15sec\t\t\t
\xa0
\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t循环步骤\t\t\t温度\t\t\t时间\t\t\t循环数\t\t\t\t\t循环步骤循环步骤循环步骤\t\t\t温度温度温度\t\t\t时间时间时间\t\t\t循环数循环数循环数\t\t\t\t\t\t\t预变性\t\t\t95℃\t\t\t5min\t\t\t1\t\t\t\t\t预变性预变性\t\t\t95℃95℃\t\t\t5min5min\t\t\t11\t\t\t\t\t\t\t变性\t\t\t95℃\t\t\t10sec\t\t\t40\t\t\t\t\t变性变性\t\t\t95℃95℃\t\t\t10sec10sec\t\t\t4040\t\t\t\t\t\t\t退火、延伸\t\t\t60℃\t\t\t30sec\t\t\t\t\t退火、延伸退火、延伸\t\t\t60℃60℃\t\t\t30sec30sec\t\t\t\t\t\t\t熔解曲线\t\t\t95℃\t\t\t15sec\t\t\t1\t\t\t\t\t熔解曲线熔解曲线\t\t\t95℃95℃\t\t\t15sec15sec\t\t\t11\t\t\t\t\t\t\t60℃\t\t\t60sec\t\t\t\t\t60℃60℃\t\t\t60sec60sec\t\t\t\t\t\t\t95℃\t\t\t15sec\t\t\t
\xa0
\t\t\t\t\t\t\t\t95℃95℃\t\t\t15sec\t\t\t
\xa0
\t\t\t15sec\t\t\t
\xa0
\xa0\t\t\t\t\t\t
【注】
a)\xa0预变性时间:根据不同模板和引物的具体情况可适当缩短至2min。
b)\xa0退火温度和时间:请根据引物和目的基因的长度进行调整。
c)\xa0荧光信号采集:请参考仪器设置。
d)\xa0熔解曲线:通常情况下可以使用仪器默认程序。
【注】【注】:
a)\xa0预变性时间:预变性时间:根据不同模板和引物的具体情况可适当缩短至2min。
b)\xa0退火温度和时间退火温度和时间:请根据引物和目的基因的长度进行调整。
c)\xa0荧光信号采集荧光信号采集:请参考仪器设置。
d)\xa0熔解曲线:熔解曲线:通常情况下可以使用仪器默认程序。

结果分析

结果分析结果分析结果分析
定量实验至少需要三个生物学重复。反应结束后需要确认扩增曲线及熔解曲线。
1)\xa01)\xa0扩增曲线扩增曲线:标准扩增曲线为S型。
    \t
  • 值落在20-30之间时,定量分析最准确;
  • \t
  • 值小于10,需要将稀释模板后,重新进行实验;
  • \t
  • 值介于30-35之间时,需要提高模板浓度,或者增大反应体系的体积,以提高扩增效率,保证结果分析的准确性;
  • \t
  • Ct值大于35时,检测结果无法定量分析基因的表达量,但可用于定性分析。
\t
  • 值落在20-30之间时,定量分析最准确;
  • 值落在20-30之间时,定量分析最准确;\t
  • 值小于10,需要将稀释模板后,重新进行实验;
  • 值小于10,需要将稀释模板后,重新进行实验;\t
  • 值介于30-35之间时,需要提高模板浓度,或者增大反应体系的体积,以提高扩增效率,保证结果分析的准确性;
  • 值介于30-35之间时,需要提高模板浓度,或者增大反应体系的体积,以提高扩增效率,保证结果分析的准确性;\t
  • Ct值大于35时,检测结果无法定量分析基因的表达量,但可用于定性分析。
  • Ct值大于35时,检测结果无法定量分析基因的表达量,但可用于定性分析。2)\xa02)\xa0熔解曲线:熔解曲线:
      \t
    • 熔解曲线单峰,表明反应特异性好可以进行定量结果分析;若熔解曲线出现双峰或者多峰,则不能进行定量分析。
    • \t
    • 熔解曲线出现双峰,需要通过DNA琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。
    • \t
    • 如果是引物二聚体,建议降低引物浓度,或者重新设计扩增效率高的引物。
    • \t
    • 如果是非特异性扩增,请提高退火温度,或者重新设计更高特异性的引物。
    \t
  • 熔解曲线单峰,表明反应特异性好可以进行定量结果分析;若熔解曲线出现双峰或者多峰,则不能进行定量分析。
  • 熔解曲线单峰,表明反应特异性好可以进行定量结果分析;若熔解曲线出现双峰或者多峰,则不能进行定量分析。熔解曲线单峰,表明反应特异性好可以进行定量结果分析;若熔解曲线出现双峰或者多峰,则不能进行定量分析。\t
  • 熔解曲线出现双峰,需要通过DNA琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。
  • 熔解曲线出现双峰,需要通过熔解曲线出现双峰,需要通过DNADNA琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。\t
  • 如果是引物二聚体,建议降低引物浓度,或者重新设计扩增效率高的引物。
  • 如果是引物二聚体,建议降低引物浓度,或者重新设计扩增效率高的引物。如果是引物二聚体,建议降低引物浓度,或者重新设计扩增效率高的引物。\t
  • 如果是非特异性扩增,请提高退火温度,或者重新设计更高特异性的引物。
  • 如果是非特异性扩增,请提高退火温度,或者重新设计更高特异性的引物。如果是非特异性扩增,请提高退火温度,或者重新设计更高特异性的引物。
    引物设计指南
    1.\xa0推荐引物长度25bp左右。扩增产物长度150bp为佳,可以在100bp-300bp内选择。
    2.\xa0正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。引物Tm值60℃-65℃为佳。
    3.\xa0引物碱基分布要均匀,避免出现连续的4个相同碱基,GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。
    4.\xa0引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。
    5.\xa0引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物3’端有2个碱基以上的非特异性互补。
    6.\xa0设计完成的引物需要进行扩增效率的检测,只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。

    注意事项
    1.\xa0推荐使用本公司cDNA合成试剂盒(货号:11104),以有效去除RNA样品中残留的基因组。
    2.\xa0为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

    运输与保存方式
    冰袋运输。-20℃避光储存,有效期1年。
    本品避免反复冻融。产品中含有荧光染料SYBR?\xa0Green I,保存或配制反应体系时需避免强光照射。

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    2.\xa0正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。引物Tm值60℃-65℃为佳。
    3.\xa0引物碱基分布要均匀,避免出现连续的4个相同碱基,GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。
    4.\xa0引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。
    5.\xa0引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物3’端有2个碱基以上的非特异性互补。
    6.\xa0设计完成的引物需要进行扩增效率的检测,只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。

    注意事项注意事项
    1.\xa0推荐使用本公司cDNA合成试剂盒(货号货号:11104),以有效去除RNA样品中残留的基因组。
    2.\xa0为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

    运输与保存方式运输与保存方式
    冰袋运输。-20℃避光储存,有效期1年。
    本品避免反复冻融。产品中含有荧光染料SYBR??\xa0Green I,保存或配制反应体系时需避免强光照射。

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    产品名称产品货号规格价格(元)回报价(元)
    UNICONTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (抗体法,No Rox)11198ES031ml336.00196.00
    11198ES085×1ml1466.00586.00
    11198ES255×5ml6156.002496.00
    11198ES5010×5ml11086.004596.00
    11198ES6020×5ml17596.007966.00
    UNICONTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (抗体法,High Rox)11200ES031ml336.00196.00
    11200ES085×1ml1466.00586.00
    11200ES255×5ml6156.002496.00
    11200ES5010×5ml11086.004596.00
    11200ES6020×5ml17596.007966.00
    HieffTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (No\xa0Rox)11201ES031ml180.00180.00
    11201ES085×1ml740.00498.00
    11201ES6020×5ml12877.005980.00
    HieffTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (Low\xa0Rox\xa0Plus)11202ES031ml180.00180.00
    11202ES085×1ml740.00498.00
    11202ES6020×5ml12877.005980.00
    HieffTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (High\xa0Rox\xa0Plus)11203ES031ml180.00180.00
    11203ES085×1ml740.00498.00
    11203ES6020×5ml12877.005980.00
    HieffTM\xa0qPCR SYBR?\xa0Green Master Mix (Rox Provided Seperately)11204ES031ml180.00180.00
    11204ES085×1ml740.00740.00
    HieffTM\xa0qPCR TaqMan Probe Master Mix11205ES031ml225.00225.00
    11205ES085×1ml740.00740.00\t\t\t
    \xa0
    \t\t\t
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