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TT细胞系、TT细胞株、TT细胞、TT甲状腺导管癌细胞

TT细胞系、TT细胞株、TT细胞、TT甲状腺导管癌细胞

细胞划痕实验（Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。

特点：

1. 在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。

2. 非常适合研究细胞与胞外基质（ECM），细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。

3. 与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞间的相互作用

4. 研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。

传统实验方法实验步骤：

1. 培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记（方便拍照时定位同一 个视野）。

2. 细胞消化后接入12孔板，数量以贴壁后铺满板底为宜（数量少时可培养一段时间至铺满板底）。

3. 细胞铺满板底后，用1 ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致。（人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性，影响实验结果，这也是该方法最大的缺陷。）

4. 吸去细胞培养液，用PBS冲洗孔板三次，洗去划痕产生的细胞碎片。

5. 加入无血清培养基，拍照记录。

6. 将培养板放入培养箱培养，每隔4-6小时取出拍照。

7. 根据收集图片数据分析实验结果。

Culture Insert方法
1. 准备细胞，培养液，culture Insert。

2. 如图，将细胞接种于Dish中间的Insert，细胞长满Insert 区域后用镊子移除Insert即可产生500 μm宽度的划痕。

3. 每隔4-6小时拍照记录。

4. 根据收集图片数据分析实验结果。

总结：相比较于传统的划痕实验，Ibidi的设计更科学、重现性更好：
实验目的
掌握细胞计数的方法。
了解区分细胞存活状态的方法。

实验用品
0.4%台盼蓝溶液、无水乙醇或95%乙醇溶液、脱脂棉
普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。

实验原理
在细胞培养工作中，常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活，确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度，如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别，冻存细胞复苏后的活力检测等。细胞悬液制备后，常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色，进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高，可使染料进入细胞内而使细胞着色（蓝色）。细胞计数一般用血细胞计数板，按白细胞计数方法进行计数，便于确定细胞的生活状况。

实验内容与方法
（一）制备动物细胞悬液
将动物细胞用生物盐水制备成适当浓度的细胞悬液备用。

（二）细胞计数
1. 计数板处理
用无水乙醇或95%乙醇溶液擦拭计数板后，用绸布擦净，另擦净盖玻片一张，把盖片覆在计数板上面。

2. 染色
用滴管吸取0.4%台盼蓝染液，按1∶1比例加入细胞悬液中。从计数板边缘缓缓滴入，使之充满计数板和盖片之间的空隙中。注意不要使液体流到旁边的凹槽中或带有气泡，否则要重做。稍候片刻，将计数板放在低倍镜下（10×10倍）观察计数。

3. 计数方法
按图计算计数板的四角大方格（每个大方格又分16个小方格）内的细胞数。计数时，只计数完整的细胞，若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。在一个大方格中，如果有细胞位于线上，一般计下线细胞不计上线细胞，计左线细胞不计右线细胞。二次重复计数误差不应超过±5%（图7-1）。镜下观察，凡折光性强而不着色者为活细胞，染上蓝色者为死细胞。

4. 计数的换算
计完数后，需换算出每ml悬液中的细胞数。由于计数板中每一方格的面积为0.01 cm2，高为0.01 cm，这样它的体积为0.0001 cm3，即0.1 mm3。由于1 ml＝1000 mm3，所以每一大方格内细胞数×10 000＝细胞数/ml，故可按下式计算：
细胞悬液细胞数/ml＝4个大格细胞总数/4×10 000
如计数前已稀释，可再乘稀释倍数。
计数细胞后，计算细胞悬液浓度并求出存活与死亡细胞数的比例。
注意事项：
向计数板中滴细胞悬液时要干净利落，加量要适当，过多易使盖片漂移，或淹过盖片则失败，需重做，过少易出现气泡；不理想时，应重做；
镜下计数时，若方格中细胞分布明显不均，说明细胞悬液混合不均匀，需重新将细胞悬液进行混合，再重新计数。

细胞划痕实验（Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。细胞划痕实验（Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。细胞划痕实验（Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。细胞划痕实验（Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。细胞划痕实验（细胞划痕实验（Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移//肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。

特点：特点：特点：特点：特点：特点：

1. 在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。1. 在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。1. 在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。1. 在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。1. 在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。

2. 非常适合研究细胞与胞外基质（ECM），细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。2. 非常适合研究细胞与胞外基质（ECM），细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。2. 非常适合研究细胞与胞外基质（ECM），细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。2. 非常适合研究细胞与胞外基质（ECM），细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。2. 非常适合研究细胞与胞外基质（非常适合研究细胞与胞外基质（ECMECM），细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。），细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。

3. 与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞间的相互作用3. 与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞间的相互作用3. 与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞间的相互作用3. 与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞间的相互作用3. 与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞间的相互作用与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞间的相互作用

4. 研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。4. 研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。4. 研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。4. 研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。4. 研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。

传统实验方法实验步骤：传统实验方法实验步骤：传统实验方法实验步骤：传统实验方法实验步骤：传统实验方法实验步骤：传统实验方法实验步骤：

1. 培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记（方便拍照时定位同一 个视野）。1. 培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记（方便拍照时定位同一 个视野）。1. 培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记（方便拍照时定位同一 个视野）。1. 培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记（方便拍照时定位同一 个视野）。1. 培养板接种细胞之前先用培养板接种细胞之前先用markermarker笔在笔在1212孔板背面画横线标记（方便拍照时定位同一 个视野）。孔板背面画横线标记（方便拍照时定位同一 个视野）。

2. 细胞消化后接入12孔板，数量以贴壁后铺满板底为宜（数量少时可培养一段时间至铺满板底）。2. 细胞消化后接入12孔板，数量以贴壁后铺满板底为宜（数量少时可培养一段时间至铺满板底）。2. 细胞消化后接入12孔板，数量以贴壁后铺满板底为宜（数量少时可培养一段时间至铺满板底）。2. 细胞消化后接入12孔板，数量以贴壁后铺满板底为宜（数量少时可培养一段时间至铺满板底）。2. 细胞消化后接入细胞消化后接入1212孔板，数量以贴壁后铺满板底为宜（数量少时可培养一段时间至铺满板底）。孔板，数量以贴壁后铺满板底为宜（数量少时可培养一段时间至铺满板底）。

3. 细胞铺满板底后，用1 ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致。（人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性，影响实验结果，这也是该方法最大的缺陷。）3. 细胞铺满板底后，用1 ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致。（人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性，影响实验结果，这也是该方法最大的缺陷。）3. 细胞铺满板底后，用1 ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致。（人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性，影响实验结果，这也是该方法最大的缺陷。）3. 细胞铺满板底后，用1 ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致。（人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性，影响实验结果，这也是该方法最大的缺陷。）3. 细胞铺满板底后，用细胞铺满板底后，用1 ml1 ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致。（人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性，影响实验结果，这也是该方法最大的缺陷。）枪头垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致。（人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性，影响实验结果，这也是该方法最大的缺陷。）

4. 吸去细胞培养液，用PBS冲洗孔板三次，洗去划痕产生的细胞碎片。4. 吸去细胞培养液，用PBS冲洗孔板三次，洗去划痕产生的细胞碎片。4. 吸去细胞培养液，用PBS冲洗孔板三次，洗去划痕产生的细胞碎片。4. 吸去细胞培养液，用PBS冲洗孔板三次，洗去划痕产生的细胞碎片。4. 吸去细胞培养液，用吸去细胞培养液，用PBSPBS冲洗孔板三次，洗去划痕产生的细胞碎片。冲洗孔板三次，洗去划痕产生的细胞碎片。

5. 加入无血清培养基，拍照记录。5. 加入无血清培养基，拍照记录。5. 加入无血清培养基，拍照记录。5. 加入无血清培养基，拍照记录。5. 加入无血清培养基，拍照记录。加入无血清培养基，拍照记录。

6. 将培养板放入培养箱培养，每隔4-6小时取出拍照。6. 将培养板放入培养箱培养，每隔4-6小时取出拍照。6. 将培养板放入培养箱培养，每隔4-6小时取出拍照。6. 将培养板放入培养箱培养，每隔4-6小时取出拍照。6. 将培养板放入培养箱培养，每隔将培养板放入培养箱培养，每隔4-64-6小时取出拍照。小时取出拍照。

7. 根据收集图片数据分析实验结果。7. 根据收集图片数据分析实验结果。7. 根据收集图片数据分析实验结果。7. 根据收集图片数据分析实验结果。7. 根据收集图片数据分析实验结果。根据收集图片数据分析实验结果。

Culture Insert方法Culture Insert方法Culture Insert方法Culture Insert方法Culture Insert方法方法
1. 准备细胞，培养液，culture Insert。1. 准备细胞，培养液，culture Insert。1. 准备细胞，培养液，culture Insert。1. 准备细胞，培养液，culture Insert。1. 准备细胞，培养液，准备细胞，培养液，culture Insertculture Insert。。

2. 如图，将细胞接种于Dish中间的Insert，细胞长满Insert 区域后用镊子移除Insert即可产生500 μm宽度的划痕。2. 如图，将细胞接种于Dish中间的Insert，细胞长满Insert 区域后用镊子移除Insert即可产生500 μm宽度的划痕。2. 如图，将细胞接种于Dish中间的Insert，细胞长满Insert 区域后用镊子移除Insert即可产生500 μm宽度的划痕。2. 如图，将细胞接种于Dish中间的Insert，细胞长满Insert 区域后用镊子移除Insert即可产生500 μm宽度的划痕。2. 如图，将细胞接种于如图，将细胞接种于DishDish中间的中间的InsertInsert，细胞长满，细胞长满Insert Insert 区域后用镊子移除区域后用镊子移除InsertInsert即可产生即可产生500 500 μμmm宽度的划痕。宽度的划痕。

3. 每隔4-6小时拍照记录。3. 每隔4-6小时拍照记录。3. 每隔4-6小时拍照记录。3. 每隔4-6小时拍照记录。3. 每隔每隔4-64-6小时拍照记录。小时拍照记录。

4. 根据收集图片数据分析实验结果。4. 根据收集图片数据分析实验结果。4. 根据收集图片数据分析实验结果。4. 根据收集图片数据分析实验结果。4. 根据收集图片数据分析实验结果。根据收集图片数据分析实验结果。

总结：相比较于传统的划痕实验，Ibidi的设计更科学、重现性更好：总结：相比较于传统的划痕实验，Ibidi的设计更科学、重现性更好：总结：相比较于传统的划痕实验，Ibidi的设计更科学、重现性更好：总结：相比较于传统的划痕实验，Ibidi的设计更科学、重现性更好：总结：相比较于传统的划痕实验，总结：相比较于传统的划痕实验，Ibidi的设计更科学、重现性更好：的设计更科学、重现性更好：
实验目的实验目的实验目的实验目的实验目的实验目的
掌握细胞计数的方法。掌握细胞计数的方法。掌握细胞计数的方法。掌握细胞计数的方法。掌握细胞计数的方法。掌握细胞计数的方法。
了解区分细胞存活状态的方法。了解区分细胞存活状态的方法。了解区分细胞存活状态的方法。了解区分细胞存活状态的方法。了解区分细胞存活状态的方法。了解区分细胞存活状态的方法。

实验用品实验用品实验用品实验用品实验用品实验用品
0.4%台盼蓝溶液、无水乙醇或95%乙醇溶液、脱脂棉0.4%台盼蓝溶液、无水乙醇或95%乙醇溶液、脱脂棉0.4%台盼蓝溶液、无水乙醇或95%乙醇溶液、脱脂棉0.4%台盼蓝溶液、无水乙醇或95%乙醇溶液、脱脂棉0.4%台盼蓝溶液、无水乙醇或台盼蓝溶液、无水乙醇或95%95%乙醇溶液、脱脂棉乙醇溶液、脱脂棉
普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。

实验原理实验原理实验原理实验原理实验原理实验原理
在细胞培养工作中，常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活，确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度，如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别，冻存细胞复苏后的活力检测等。细胞悬液制备后，常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色，进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高，可使染料进入细胞内而使细胞着色（蓝色）。细胞计数一般用血细胞计数板，按白细胞计数方法进行计数，便于确定细胞的生活状况。在细胞培养工作中，常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活，确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度，如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别，冻存细胞复苏后的活力检测等。细胞悬液制备后，常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色，进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高，可使染料进入细胞内而使细胞着色（蓝色）。细胞计数一般用血细胞计数板，按白细胞计数方法进行计数，便于确定细胞的生活状况。在细胞培养工作中，常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活，确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度，如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别，冻存细胞复苏后的活力检测等。细胞悬液制备后，常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色，进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高，可使染料进入细胞内而使细胞着色（蓝色）。细胞计数一般用血细胞计数板，按白细胞计数方法进行计数，便于确定细胞的生活状况。在细胞培养工作中，常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活，确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度，如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别，冻存细胞复苏后的活力检测等。细胞悬液制备后，常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色，进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高，可使染料进入细胞内而使细胞着色（蓝色）。细胞计数一般用血细胞计数板，按白细胞计数方法进行计数，便于确定细胞的生活状况。在细胞培养工作中，常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活，确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度，如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别，冻存细胞复苏后的活力检测等。细胞悬液制备后，常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色，进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高，可使染料进入细胞内而使细胞着色（蓝色）。细胞计数一般用血细胞计数板，按白细胞计数方法进行计数，便于确定细胞的生活状况。在细胞培养工作中，常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活，确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度，如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别，冻存细胞复苏后的活力检测等。细胞悬液制备后，常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色，进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高，可使染料进入细胞内而使细胞着色（蓝色）。细胞计数一般用血细胞计数板，按白细胞计数方法进行计数，便于确定细胞的生活状况。

实验内容与方法实验内容与方法实验内容与方法实验内容与方法实验内容与方法实验内容与方法
（一）制备动物细胞悬液（一）制备动物细胞悬液（一）制备动物细胞悬液（一）制备动物细胞悬液（一）制备动物细胞悬液（一）制备动物细胞悬液
将动物细胞用生物盐水制备成适当浓度的细胞悬液备用。将动物细胞用生物盐水制备成适当浓度的细胞悬液备用。将动物细胞用生物盐水制备成适当浓度的细胞悬液备用。将动物细胞用生物盐水制备成适当浓度的细胞悬液备用。将动物细胞用生物盐水制备成适当浓度的细胞悬液备用。将动物细胞用生物盐水制备成适当浓度的细胞悬液备用。

（二）细胞计数（二）细胞计数（二）细胞计数（二）细胞计数（二）细胞计数（二）细胞计数
1. 计数板处理1. 计数板处理1. 计数板处理1. 计数板处理1. 计数板处理计数板处理
用无水乙醇或95%乙醇溶液擦拭计数板后，用绸布擦净，另擦净盖玻片一张，把盖片覆在计数板上面。用无水乙醇或95%乙醇溶液擦拭计数板后，用绸布擦净，另擦净盖玻片一张，把盖片覆在计数板上面。用无水乙醇或95%乙醇溶液擦拭计数板后，用绸布擦净，另擦净盖玻片一张，把盖片覆在计数板上面。用无水乙醇或95%乙醇溶液擦拭计数板后，用绸布擦净，另擦净盖玻片一张，把盖片覆在计数板上面。用无水乙醇或用无水乙醇或95%乙醇溶液擦拭计数板后，用绸布擦净，另擦净盖玻片一张，把盖片覆在计数板上面。乙醇溶液擦拭计数板后，用绸布擦净，另擦净盖玻片一张，把盖片覆在计数板上面。

2. 染色2. 染色2. 染色2. 染色2. 染色染色
用滴管吸取0.4%台盼蓝染液，按1∶1比例加入细胞悬液中。从计数板边缘缓缓滴入，使之充满计数板和盖片之间的空隙中。注意不要使液体流到旁边的凹槽中或带有气泡，否则要重做。稍候片刻，将计数板放在低倍镜下（10×10倍）观察计数。用滴管吸取0.4%台盼蓝染液，按1∶1比例加入细胞悬液中。从计数板边缘缓缓滴入，使之充满计数板和盖片之间的空隙中。注意不要使液体流到旁边的凹槽中或带有气泡，否则要重做。稍候片刻，将计数板放在低倍镜下（10×10倍）观察计数。用滴管吸取0.4%台盼蓝染液，按1∶1比例加入细胞悬液中。从计数板边缘缓缓滴入，使之充满计数板和盖片之间的空隙中。注意不要使液体流到旁边的凹槽中或带有气泡，否则要重做。稍候片刻，将计数板放在低倍镜下（10×10倍）观察计数。用滴管吸取0.4%台盼蓝染液，按1∶1比例加入细胞悬液中。从计数板边缘缓缓滴入，使之充满计数板和盖片之间的空隙中。注意不要使液体流到旁边的凹槽中或带有气泡，否则要重做。稍候片刻，将计数板放在低倍镜下（10×10倍）观察计数。用滴管吸取用滴管吸取0.4%台盼蓝染液，按台盼蓝染液，按11∶∶11比例加入细胞悬液中。从计数板边缘缓缓滴入，使之充满计数板和盖片之间的空隙中。注意不要使液体流到旁边的凹槽中或带有气泡，否则要重做。稍候片刻，将计数板放在低倍镜下（比例加入细胞悬液中。从计数板边缘缓缓滴入，使之充满计数板和盖片之间的空隙中。注意不要使液体流到旁边的凹槽中或带有气泡，否则要重做。稍候片刻，将计数板放在低倍镜下（1010××1010倍）观察计数。倍）观察计数。

3. 计数方法3. 计数方法3. 计数方法3. 计数方法3. 计数方法计数方法
按图计算计数板的四角大方格（每个大方格又分16个小方格）内的细胞数。计数时，只计数完整的细胞，若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。在一个大方格中，如果有细胞位于线上，一般计下线细胞不计上线细胞，计左线细胞不计右线细胞。二次重复计数误差不应超过±5%（图7-1）。镜下观察，凡折光性强而不着色者为活细胞，染上蓝色者为死细胞。按图计算计数板的四角大方格（每个大方格又分16个小方格）内的细胞数。计数时，只计数完整的细胞，若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。在一个大方格中，如果有细胞位于线上，一般计下线细胞不计上线细胞，计左线细胞不计右线细胞。二次重复计数误差不应超过±5%（图7-1）。镜下观察，凡折光性强而不着色者为活细胞，染上蓝色者为死细胞。按图计算计数板的四角大方格（每个大方格又分16个小方格）内的细胞数。计数时，只计数完整的细胞，若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。在一个大方格中，如果有细胞位于线上，一般计下线细胞不计上线细胞，计左线细胞不计右线细胞。二次重复计数误差不应超过±5%（图7-1）。镜下观察，凡折光性强而不着色者为活细胞，染上蓝色者为死细胞。按图计算计数板的四角大方格（每个大方格又分16个小方格）内的细胞数。计数时，只计数完整的细胞，若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。在一个大方格中，如果有细胞位于线上，一般计下线细胞不计上线细胞，计左线细胞不计右线细胞。二次重复计数误差不应超过±5%（图7-1）。镜下观察，凡折光性强而不着色者为活细胞，染上蓝色者为死细胞。按图计算计数板的四角大方格（每个大方格又分按图计算计数板的四角大方格（每个大方格又分16个小方格）内的细胞数。计数时，只计数完整的细胞，若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。在一个大方格中，如果有细胞位于线上，一般计下线细胞不计上线细胞，计左线细胞不计右线细胞。二次重复计数误差不应超过±个小方格）内的细胞数。计数时，只计数完整的细胞，若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。在一个大方格中，如果有细胞位于线上，一般计下线细胞不计上线细胞，计左线细胞不计右线细胞。二次重复计数误差不应超过±5%5%（图（图7-17-1）。镜下观察，凡折光性强而不着色者为活细胞，染上蓝色者为死细胞。）。镜下观察，凡折光性强而不着色者为活细胞，染上蓝色者为死细胞。

4. 计数的换算4. 计数的换算4. 计数的换算4. 计数的换算4. 计数的换算计数的换算
计完数后，需换算出每ml悬液中的细胞数。由于计数板中每一方格的面积为0.01 cm2，高为0.01 cm，这样它的体积为0.0001 cm3，即0.1 mm3。由于1 ml＝1000 mm3，所以每一大方格内细胞数×10 000＝细胞数/ml，故可按下式计算：计完数后，需换算出每ml悬液中的细胞数。由于计数板中每一方格的面积为0.01 cm2，高为0.01 cm，这样它的体积为0.0001 cm3，即0.1 mm3。由于1 ml＝1000 mm3，所以每一大方格内细胞数×10 000＝细胞数/ml，故可按下式计算：计完数后，需换算出每ml悬液中的细胞数。由于计数板中每一方格的面积为0.01 cm2，高为0.01 cm，这样它的体积为0.0001 cm3，即0.1 mm3。由于1 ml＝1000 mm3，所以每一大方格内细胞数×10 000＝细胞数/ml，故可按下式计算：计完数后，需换算出每ml悬液中的细胞数。由于计数板中每一方格的面积为0.01 cm2，高为0.01 cm，这样它的体积为0.0001 cm3，即0.1 mm3。由于1 ml＝1000 mm3，所以每一大方格内细胞数×10 000＝细胞数/ml，故可按下式计算：计完数后，需换算出每计完数后，需换算出每ml悬液中的细胞数。由于计数板中每一方格的面积为悬液中的细胞数。由于计数板中每一方格的面积为0.01 cm20.01 cm2，高为，高为0.01 cm0.01 cm，这样它的体积为，这样它的体积为0.0001 cm30.0001 cm3，即，即0.1 mm30.1 mm3。由于。由于1 ml1 ml＝＝1000 mm31000 mm3，所以每一大方格内细胞数×，所以每一大方格内细胞数×10 00010 000＝细胞数＝细胞数/ml/ml，故可按下式计算：，故可按下式计算：
细胞悬液细胞数/ml＝4个大格细胞总数/4×10 000细胞悬液细胞数/ml＝4个大格细胞总数/4×10 000细胞悬液细胞数/ml＝4个大格细胞总数/4×10 000细胞悬液细胞数/ml＝4个大格细胞总数/4×10 000细胞悬液细胞数细胞悬液细胞数/ml＝＝44个大格细胞总数个大格细胞总数/4/4××10 00010 000
如计数前已稀释，可再乘稀释倍数。如计数前已稀释，可再乘稀释倍数。如计数前已稀释，可再乘稀释倍数。如计数前已稀释，可再乘稀释倍数。如计数前已稀释，可再乘稀释倍数。如计数前已稀释，可再乘稀释倍数。
计数细胞后，计算细胞悬液浓度并求出存活与死亡细胞数的比例。
注意事项：计数细胞后，计算细胞悬液浓度并求出存活与死亡细胞数的比例。
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注意事项：
向计数板中滴细胞悬液时要干净利落，加量要适当，过多易使盖片漂移，或淹过盖片则失败，需重做，过少易出现气泡；不理想时，应重做；向计数板中滴细胞悬液时要干净利落，加量要适当，过多易使盖片漂移，或淹过盖片则失败，需重做，过少易出现气泡；不理想时，应重做；向计数板中滴细胞悬液时要干净利落，加量要适当，过多易使盖片漂移，或淹过盖片则失败，需重做，过少易出现气泡；不理想时，应重做；向计数板中滴细胞悬液时要干净利落，加量要适当，过多易使盖片漂移，或淹过盖片则失败，需重做，过少易出现气泡；不理想时，应重做；向计数板中滴细胞悬液时要干净利落，加量要适当，过多易使盖片漂移，或淹过盖片则失败，需重做，过少易出现气泡；不理想时，应重做；向计数板中滴细胞悬液时要干净利落，加量要适当，过多易使盖片漂移，或淹过盖片则失败，需重做，过少易出现气泡；不理想时，应重做；
镜下计数时，若方格中细胞分布明显不均，说明细胞悬液混合不均匀，需重新将细胞悬液进行混合，再重新计数。镜下计数时，若方格中细胞分布明显不均，说明细胞悬液混合不均匀，需重新将细胞悬液进行混合，再重新计数。镜下计数时，若方格中细胞分布明显不均，说明细胞悬液混合不均匀，需重新将细胞悬液进行混合，再重新计数。镜下计数时，若方格中细胞分布明显不均，说明细胞悬液混合不均匀，需重新将细胞悬液进行混合，再重新计数。镜下计数时，若方格中细胞分布明显不均，说明细胞悬液混合不均匀，需重新将细胞悬液进行混合，再重新计数。镜下计数时，若方格中细胞分布明显不均，说明细胞悬液混合不均匀，需重新将细胞悬液进行混合，再重新计数。

\xa0 \xa0我司本着“科技领先，精益求精”的经营理念致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供科研试剂和完善的技术服务，满足生物化学、分子生物学\xa0、细胞生物学、免疫学等生物科技实验需求。

\xa0\xa0\xa0 经过多年的努力现与：清华大学、复旦大学、上海交通大学、华东师范大学、武汉大学等高校医院建立了良好的长期合作关系。

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