pUC57 Simple TA/平端通用克隆载体（含感受态）

pUC57 Simple TA/平端通用克隆载体（含感受态）pUC57 Simple TA/平端通pUC57 Simple TA/平端通用克隆载体（含感受态）

描述：pUC57 Simple 通用克隆载体采用了 TOPO 酶连接技术，载体预先偶联上 TOPO 酶，当加入 PCR 扩增产物后，5 min 就可以完成连接反应，连接阳性率高。pUC57 Simple 通用克隆载体消除了大部分的常用酶切位点，便于后续亚克隆。该产 品适用于 Taq 酶扩增的含“A”尾巴和高保真酶扩增的 PCR 产物的连接，载体含有氨苄青霉素抗性筛选标记。

描述：pUC57 Simple 通用克隆载体采用了 TOPO 酶连接技术，载体预先偶联上 TOPO 酶，当加入 PCR 扩增产物后，5 min 就可以完成连接反应，连接阳性率高。pUC57 Simple 通用克隆载体消除了大部分的常用酶切位点，便于后续亚克隆。该产 品适用于 Taq 酶扩增的含“A”尾巴和高保真酶扩增的 PCR 产物的连接，载体含有氨苄青霉素抗性筛选标记。
描述：描述：pUC57 Simple 通用克隆载体采用了 TOPO 酶连接技术，载体预先偶联上 TOPO 酶，当加入 PCR 扩增产物后，5 min 就可以完成连接反应，连接阳性率高。pUC57 Simple 通用克隆载体消除了大部分的常用酶切位点，便于后续亚克隆。该产 品适用于 Taq 酶扩增的含“A”尾巴和高保真酶扩增的 PCR 产物的连接，载体含有氨苄青霉素抗性筛选标记。

组分

注意：RTS DH5α 冻干感受态在未溶解状态下，可于-20℃长期保存（>2 年），已经溶解后，-60℃以下保存（3 个月）。
主要特征
（1）快速连接，最快仅需 5min；（2）操作简单，仅需加入载体和片段即可；（3）无需蓝白斑筛选，阳性率高；（4）不包含任何酶切位点，便于后续亚克隆（5）平末端和 A 尾产物通用。
注意：引物不能磷酸化。
测序引物
正向测序引物：M13F(-47): 5’- CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3’；
反向测序引物：M13R(-48): 5’- AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-3’；

操作步骤
1. PCR 产物的纯化
1.1 PCR 扩增完毕后，电泳检测产物，如无非特异性扩增、无引物二聚体、条带单一明亮，则可采用 PCR 产物纯化试剂
盒纯化后用于连接。产物不经纯化也可以进行连接，但效果稍差一些。
1.2 PCR 扩增完毕后，电泳检测产物，如有非特异性扩增条带或引物二聚体，则必须采用胶回收后用于连接。
1.3 PCR 扩增模板来源于 Amp 抗性质粒，则必须采用胶回收后用于连接。

4. 转化(以 RTS DH5α 克隆感受态细胞为例说明)
4.1 从-20°C 冰箱中取出 Nano E.coli Transfection Reagent 彻底融化，放置于冰上。取 300 μl Nano E.coli Transfection
Reagent 加入到一支冻干感受态细胞中，并分装到 10 支 1.5 ml EP 管中（每支 30 μl），于-60°C 以下保存（或立即使用）。
4.2 将 5 μl 连接产物加入到分装的感受态细胞中，轻弹 EP 管（或枪头轻轻吹打），置于冰上 15 min。
注意：放置时间不要超过 30 min，过长时间会导致核酸聚合，从而影响转化效价。
4.3 置于 42°C 热激 1min 后，迅速置于冰上急冷 2 min。
4.4 热激完毕后，向上述感受态细胞中加入 450 μL 不含抗生素的 SOC（或 LB）培养基，37°C 振荡（225 rpm）培养 60 min。
使质粒上抗性标记基因表达，菌体复苏。
4.5 取 200 μL 复苏菌液涂布到含相应抗生素的 LB 琼脂平板表面。
4.6 将平板置于 37°C 培养，12~18 小时后可出现菌落。
注意：如使用液体感受态，直接将 5 μl 连接后产物加入到液体感受态，并参照液体感受态操作方法即可。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

组分

注意：RTS DH5α 冻干感受态在未溶解状态下，可于-20℃长期保存（>2 年），已经溶解后，-60℃以下保存（3 个月）。
主要特征
（1）快速连接，最快仅需 5min；（2）操作简单，仅需加入载体和片段即可；（3）无需蓝白斑筛选，阳性率高；（4）不包含任何酶切位点，便于后续亚克隆（5）平末端和 A 尾产物通用。
注意：引物不能磷酸化。
测序引物
正向测序引物：M13F(-47): 5’- CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3’；
反向测序引物：M13R(-48): 5’- AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-3’；

操作步骤
1. PCR 产物的纯化
1.1 PCR 扩增完毕后，电泳检测产物，如无非特异性扩增、无引物二聚体、条带单一明亮，则可采用 PCR 产物纯化试剂
盒纯化后用于连接。产物不经纯化也可以进行连接，但效果稍差一些。
1.2 PCR 扩增完毕后，电泳检测产物，如有非特异性扩增条带或引物二聚体，则必须采用胶回收后用于连接。
1.3 PCR 扩增模板来源于 Amp 抗性质粒，则必须采用胶回收后用于连接。

4. 转化(以 RTS DH5α 克隆感受态细胞为例说明)
4.1 从-20°C 冰箱中取出 Nano E.coli Transfection Reagent 彻底融化，放置于冰上。取 300 μl Nano E.coli Transfection
Reagent 加入到一支冻干感受态细胞中，并分装到 10 支 1.5 ml EP 管中（每支 30 μl），于-60°C 以下保存（或立即使用）。
4.2 将 5 μl 连接产物加入到分装的感受态细胞中，轻弹 EP 管（或枪头轻轻吹打），置于冰上 15 min。
注意：放置时间不要超过 30 min，过长时间会导致核酸聚合，从而影响转化效价。
4.3 置于 42°C 热激 1min 后，迅速置于冰上急冷 2 min。
4.4 热激完毕后，向上述感受态细胞中加入 450 μL 不含抗生素的 SOC（或 LB）培养基，37°C 振荡（225 rpm）培养 60 min。
使质粒上抗性标记基因表达，菌体复苏。
4.5 取 200 μL 复苏菌液涂布到含相应抗生素的 LB 琼脂平板表面。
4.6 将平板置于 37°C 培养，12~18 小时后可出现菌落。
注意：如使用液体感受态，直接将 5 μl 连接后产物加入到液体感受态，并参照液体感受态操作方法即可。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！组分组分

注意：RTS DH5α 冻干感受态在未溶解状态下，可于-20℃长期保存（>2 年），已经溶解后，-60℃以下保存（3 个月）。
主要特征主要特征
（1）快速连接，最快仅需 5min；（2）操作简单，仅需加入载体和片段即可；（3）无需蓝白斑筛选，阳性率高；（4）不包含任何酶切位点，便于后续亚克隆（5）平末端和 A 尾产物通用。
注意：引物不能磷酸化。
测序引物测序引物
正向测序引物：M13F(-47): 5’- CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3’；
反向测序引物：M13R(-48): 5’- AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-3’；

操作步骤操作步骤
1. PCR 产物的纯化
1.1 PCR 扩增完毕后，电泳检测产物，如无非特异性扩增、无引物二聚体、条带单一明亮，则可采用 PCR 产物纯化试剂
盒纯化后用于连接。产物不经纯化也可以进行连接，但效果稍差一些。
1.2 PCR 扩增完毕后，电泳检测产物，如有非特异性扩增条带或引物二聚体，则必须采用胶回收后用于连接。
1.3 PCR 扩增模板来源于 Amp 抗性质粒，则必须采用胶回收后用于连接。

4. 转化(以 RTS DH5α 克隆感受态细胞为例说明)
4.1 从-20°C 冰箱中取出 Nano E.coli Transfection Reagent 彻底融化，放置于冰上。取 300 μl Nano E.coli Transfection
Reagent 加入到一支冻干感受态细胞中，并分装到 10 支 1.5 ml EP 管中（每支 30 μl），于-60°C 以下保存（或立即使用）。
4.2 将 5 μl 连接产物加入到分装的感受态细胞中，轻弹 EP 管（或枪头轻轻吹打），置于冰上 15 min。
注意：放置时间不要超过 30 min，过长时间会导致核酸聚合，从而影响转化效价。
4.3 置于 42°C 热激 1min 后，迅速置于冰上急冷 2 min。
4.4 热激完毕后，向上述感受态细胞中加入 450 μL 不含抗生素的 SOC（或 LB）培养基，37°C 振荡（225 rpm）培养 60 min。
使质粒上抗性标记基因表达，菌体复苏。
4.5 取 200 μL 复苏菌液涂布到含相应抗生素的 LB 琼脂平板表面。
4.6 将平板置于 37°C 培养，12~18 小时后可出现菌落。
注意：如使用液体感受态，直接将 5 μl 连接后产物加入到液体感受态，并参照液体感受态操作方法即可。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！