产品及特点产品及特点产品及特点产品及特点产品及特点产品及特点产品及特点

1. 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
2. 荧光定量 PCR 检测，反应特异性强。
3. 提供阳性对照，便于分析实验结果。

即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。

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荧光定量 PCR 检测，反应特异性强。

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提供阳性对照，便于分析实验结果。

提供阳性对照，便于分析实验结果。提供阳性对照，便于分析实验结果。提供阳性对照，便于分析实验结果。提供阳性对照，便于分析实验结果。提供阳性对照，便于分析实验结果。提供阳性对照，便于分析实验结果。 4.PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。 4.PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。 4.PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。 4.PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。 4.PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。 4.PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
规格及成分规格及成分规格及成分规格及成分规格及成分规格及成分规格及成分规格及成分

成分	编号	50 次塑料袋包装
2×qPCR Mix	90408	1.0 mL
stn 专一性引物对	yw13891390	200 μL
stn 阳性对照， XXX10E9拷贝/μL	yw13911392	100 μL
超纯水	100935	1 mL
使用手册	1 份

成分编号50 次塑料袋包装2×qPCR Mix904081.0 mLstn 专一性引物对yw13891390200 μLstn 阳性对照，
XXX10E9拷贝/μL
yw13911392
100 μL超纯水1009351 mL使用手册1 份成分编号50 次塑料袋包装成分成分成分成分编号编号编号编号50 次塑料袋包装50 次塑料袋包装50 次塑料袋包装50 次塑料袋包装次塑料袋包装2×qPCR Mix904081.0 mL2×qPCR Mix2×qPCR Mix2×qPCR Mix2××qPCR MixqPCR Mix904089040890408904081.0 mL1.0 mL1.0 mL1.0 mLstn 专一性引物对yw13891390200 μLstn 专一性引物对stn stn stn 专一性引物对专一性引物对专一性引物对yw13891390yw13891390yw13891390yw13891390200 μL200 200 200 μLμLμLLstn 阳性对照，
XXX10E9拷贝/μL
yw13911392
100 μLstn 阳性对照，
XXX10E9拷贝/μLstn stn stn 阳性对照，阳性对照，阳性对照，
XXXXXXXXXXXXXX 1010101010EEEEE9999 拷贝拷贝拷贝拷贝/////μμμμLLLL
yw13911392
yw13911392yw13911392yw13911392
100 μL
100 100 100 μLμLμLL超纯水1009351 mL超纯水超纯水超纯水超纯水1009351009351009351009351 mL1 mL1 mL1 mL使用手册1 份使用手册使用手册使用手册使用手册1 份1 份1 份1 份份 运输及保存运输及保存运输及保存运输及保存运输及保存运输及保存运输及保存运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。低温运输，-20℃保存，保存期限一年。低温运输，-20℃保存，保存期限一年低温运输，-20℃保存，保存期限一年低温运输，低温运输，-20℃保存，保存期限一年℃保存，保存期限一年。。。。
使用方法使用方法使用方法使用方法使用方法使用方法使用方法使用方法
一、样品 DNA 的制备一、样品 DNA 的制备一、样品 DNA 的制备一、样品 DNA 的制备一、样品一、样品 DNA 的制备的制备
用自选方法提取细菌样品 DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。用自选方法提取细菌样品 DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。用自选方法提取细菌样品 DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。用自选方法提取细菌样品 DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。用自选方法提取细菌样品用自选方法提取细菌样品 DNA。注意：。注意：DNA DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNADNA，后面的 ，后面的 PCR PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 stn 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓二、制备 stn 标准曲线二、制备 stn 标准曲线二、制备 stn 标准曲线二、制备 stn 标准曲线二、制备二、制备 stn 标准曲线标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓（以（以 10-10E6 这 这 6 6 个 个 10 10 倍稀释度为例。由于标准品浓倍稀释度为例。由于标准品浓
度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本 试剂盒的其他成分试剂盒的其他成分试剂盒的其他成分试剂盒的其他成分试剂盒的其他成分）））））。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供 活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNADNADNADNA片段作为阳片段作为阳片段作为阳片段作为阳片段作为阳性对照。性对照。性对照。性对照。

1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45μL超纯水（最好用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或超纯水10倍梯度稀释到

标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。

标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。标记标记标记标记标记 666个离心管，分别为个离心管，分别为个离心管，分别为个离心管，分别为个离心管，分别为 6，5，4，3，26，5，4，3，26，，55，，44，，33，，22和和和和和 111号。号。号。号。号。

用带芯枪头分别加入45μL超纯水（最好用带芯枪头，下同）。

用带芯枪头分别加入45μL超纯水（最好用带芯枪头，下同）。用带芯枪头分别加入用带芯枪头分别加入用带芯枪头分别加入用带芯枪头分别加入用带芯枪头分别加入 454545 μLμLμLL超纯水超纯水超纯水超纯水超纯水（最好用带芯枪头，下同（最好用带芯枪头，下同（最好用带芯枪头，下同（最好用带芯枪头，下同）））））。。。。

先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或超纯水10倍梯度稀释到

先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或超纯水10倍梯度稀释到先将本试剂盒提供的阳性对照用先将本试剂盒提供的阳性对照用先将本试剂盒提供的阳性对照用先将本试剂盒提供的阳性对照用先将本试剂盒提供的阳性对照用 TETETE缓冲液或超纯水缓冲液或超纯水缓冲液或超纯水缓冲液或超纯水缓冲液或超纯水 101010倍梯度稀释到倍梯度稀释到倍梯度稀释到倍梯度稀释到倍梯度稀释到10101010EEEE777 拷贝拷贝拷贝拷贝////μμμLLLL（（（（（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 11110000EEEE777拷贝拷贝拷贝拷贝////μμμLLLL，建议每次稀释，建议每次稀释，建议每次稀释，建议每次稀释 1111000 倍，梯度稀释至倍，梯度稀释至倍，梯度稀释至倍，梯度稀释至 10101010EEEE777 拷贝拷贝拷贝拷贝拷贝////μμμLLLL）。）。）。）。）。

1. 在6号管中加入5μL10E7拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
2. 换枪头，从6号管中取5μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5 拷贝/μL的阳性对照。
3. 换枪头，从5号管中取5μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6 个稀释度的阳性对照。
4. NC 管中不加任何阳性对照。
5. 从1-6号管中分别取5μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCRCt值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。

在6号管中加入5μL10E7拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。

在6号管中加入5μL10E7拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。在在在在 666 号管中加入号管中加入号管中加入号管中加入 555 μμμLLL 10101010EEEE777 拷贝拷贝拷贝拷贝拷贝////μμμLLL 的阳性对照的阳性对照的阳性对照的阳性对照((((上步稀释所得上步稀释所得上步稀释所得上步稀释所得))))，充分震荡，充分震荡，充分震荡，充分震荡，充分震荡 111 分钟，得分钟，得分钟，得分钟，得 10101010EEEE666 拷贝拷贝拷贝拷贝////μμμLLL 的阳性对照。的阳性对照。的阳性对照。的阳性对照。

换枪头，从6号管中取5μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5 拷贝/μL的阳性对照。

换枪头，从6号管中取5μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5 拷贝/μL的阳性对照。换枪头，从换枪头，从换枪头，从换枪头，从换枪头，从 666号管中取号管中取号管中取号管中取号管中取 555 μLμLμLL 溶液到溶液到溶液到溶液到溶液到 555号管中，充分震荡号管中，充分震荡号管中，充分震荡号管中，充分震荡号管中，充分震荡 111分钟，得分钟，得分钟，得分钟，得分钟，得 10E5 10E5 10E5 拷贝拷贝拷贝拷贝////μμμLLL 的阳性对照。的阳性对照。的阳性对照。的阳性对照。

换枪头，从5号管中取5μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6 个稀释度的阳性对照。

换枪头，从5号管中取5μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6 个稀释度的阳性对照。换枪头，从换枪头，从换枪头，从换枪头，从换枪头，从 555 号管中取号管中取号管中取号管中取号管中取 555 μLμLμLL溶液到溶液到溶液到溶液到溶液到 444 号管中，重复上面的操作直到得到号管中，重复上面的操作直到得到号管中，重复上面的操作直到得到号管中，重复上面的操作直到得到号管中，重复上面的操作直到得到 6 6 6 个稀释度的阳性对照。个稀释度的阳性对照。个稀释度的阳性对照。个稀释度的阳性对照。

NC 管中不加任何阳性对照。

NC 管中不加任何阳性对照。NC 管中不加任何阳性对照。NC 管中不加任何阳性对照。管中不加任何阳性对照。

从1-6号管中分别取5μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCRCt值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。

从1-6号管中分别取5μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCRCt值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。从1-6号管中分别取5μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCRCt值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。从从从从 1111----666 号管中分别取号管中分别取号管中分别取号管中分别取 555 μμμLLL 和待测样品一起进行定量和待测样品一起进行定量和待测样品一起进行定量和待测样品一起进行定量 PPPPCCCCRRRR（（（（见下步见下步见下步见下步见下步））））），每个，每个，每个，每个，每个样品做样品做样品做样品做样品做 333次重复。次重复。次重复。次重复。次重复。PCRPCRPCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光后得到每个阳性对照稀释样品的荧光后得到每个阳性对照稀释样品的荧光后得到每个阳性对照稀释样品的荧光后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCRPCRPCR CtCtCt值，值，值，值，值， 并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。

• PCR 检测（20 μL 体系）

PCR 检测（20 μL 体系）

PCR 检测（20 μL 体系）PCR 检测（20 μL 体系）PCR 检测（20 μL 体系）PCR 检测（20 μL 体系）PCR 检测（20 μL 体系）PCR 检测（检测（20 20 μμL L 体系）体系）

1. 在PCR管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次）

在PCR管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次）

在PCR管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次）在在在在 PPPPCCCCRRR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次）））））
注:仅 ABI7500、7700和7900仪器需要使用ROX作为对照，其他荧光PCR 仪器（如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene6000和LightCycler480）不需要使用ROX。
注:仅
注:仅
注:仅
注
注:仅 仅 ABI7500、7700ABI7500、7700ABI7500、、77007700和和和和和 790079007900仪器需要使用仪器需要使用仪器需要使用仪器需要使用仪器需要使用 ROXROXROX作为对照，其他荧光作为对照，其他荧光作为对照，其他荧光作为对照，其他荧光作为对照，其他荧光 PCR 仪器（PCR 仪器（PCR 仪器（仪器（如如如如如 iCycler IQ、MJ OptioniCycler IQ、MJ OptioniCycler IQ、、MJ OptionMJ Option、、、、、MJ Chromo4MJ Chromo4MJ Chromo4、、、、、MX3000、MX4000、RotorGeneMX3000、MX4000、RotorGeneMX3000、、MX4000MX4000、、RotorGeneRotorGene 3000、RotorGene3000、RotorGene3000、、RotorGeneRotorGene 600060006000和和和和和 LightCycler480）LightCycler480）LightCycler480））不需要使用不需要使用不需要使用不需要使用不需要使用 ROX。ROX。ROX。。

1. 建议PCR 反应参数（具体PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）

建议PCR 反应参数（具体PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）

建议PCR 反应参数（具体PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）建议PCR 反应参数（具体PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）建议建议建议建议建议 PCR 反应参数PCR 反应参数PCR 反应参数反应参数（（（（（具体具体具体具体具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）参数可以根据仪器不同而自行优化）

过程	温度	时间
预变性	93℃	5 min
PCR 反应 （40 个循环）	93℃	35 s
	55℃	45 s

过程温度时间预变性93℃5 minPCR 反应
（40 个循环）93℃35 s55℃45 s过程温度时间过程过程过程过程过程过程温度温度温度温度温度温度时间时间时间时间时间时间预变性93℃5 min预变性预变性预变性预变性93℃93℃93℃93℃℃5 min5 min5 min5 minPCR 反应
（40 个循环）93℃35 sPCR 反应
（40 个循环）PCR 反应PCR 反应PCR 反应反应
（40 个循环）（40 个循环）（40 40 个循环）个循环）93℃93℃93℃93℃℃35 s35 s35 s35 s55℃45 s55℃55℃55℃55℃℃45 s45 s45 s45 s 3.3.3. 数据采集数据采集数据采集数据采集
按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合
DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm， 最大发射光谱在 530 nm。DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm， DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm， DNA 时，最大吸收光谱在 时，最大吸收光谱在 471 nm471 nm，结合 ，结合 DNA DNA 时的最大吸收光谱在 时的最大吸收光谱在 500 nm500 nm， ， 最大发射光谱在 530 nm。最大发射光谱在 530 nm。最大发射光谱在最大发射光谱在 530 nm。。
四、数据处理四、数据处理四、数据处理四、数据处理
以以以以以 stn stn stn 阳性对照浓度的阳性对照浓度的阳性对照浓度的阳性对照浓度的阳性对照浓度的 logloglog值为横轴，以值为横轴，以值为横轴，以值为横轴，以值为横轴，以 CtCtCt值为纵轴，绘制标准曲线。再值为纵轴，绘制标准曲线。再值为纵轴，绘制标准曲线。再值为纵轴，绘制标准曲线。再值为纵轴，绘制标准曲线。再
以待测样品浓度的log为横轴，以Ct值为纵轴，通过待测样品的Ct值计算出样品DNA 的浓度。以待测样品浓度的log为横轴，以Ct值为纵轴，通过待测样品的Ct值计算出样品DNA 的浓度。以待测样品浓度的以待测样品浓度的以待测样品浓度的以待测样品浓度的以待测样品浓度的 logloglog为横轴，以为横轴，以为横轴，以为横轴，以为横轴，以 CtCtCt值为纵轴，通过待测样品的值为纵轴，通过待测样品的值为纵轴，通过待测样品的值为纵轴，通过待测样品的值为纵轴，通过待测样品的 CtCtCt值计算出值计算出值计算出值计算出值计算出样品样品样品样品样品 DNA 的浓度。DNA 的浓度。DNA 的浓度。的浓度。