霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)双重荧光PCR检测试剂盒具有下列特点：霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)双重荧光PCR检测试剂盒具有下列特点：霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/霍乱弧菌霍乱毒素基因霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)毒素共调菌毛亚单位基因毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)双重荧光PCR双重荧光双重荧光PCR检测试剂盒检测试剂盒检测试剂盒具有下列特点：具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒 RNA 模板。1. 即开即用，用户只需要提供病毒 RNA 模板。1. 即开即用，用户只需要提供病毒即开即用，用户只需要提供病毒 RNA 模板。模板。
2. 两管式 RT-PCR，一次 RT 反应产物可以作为多次 PCR 的模板。本试剂盒提供 10 次的 RT 反应试剂和 50 次的 PCR 试剂。2. 两管式 RT-PCR，一次 RT 反应产物可以作为多次 PCR 的模板。本试剂盒提供 10 次的 RT 反应试剂和 50 次的 PCR 试剂。2. 两管式两管式 RT-PCR，一次，一次 RT 反应产物可以作为多次反应产物可以作为多次 PCR 的模板。本试剂盒提供的模板。本试剂盒提供 10 次的次的 RT 反应试剂和反应试剂和 50 次的次的 PCR 试剂。试剂。
3. 引物经过优化，特异性高，引物是根据基因的保守区域设计，适用于所有强、中、弱新城疫毒株，产物长度为 421 bp。3. 引物经过优化，特异性高，引物是根据基因的保守区域设计，适用于所有强、中、弱新城疫毒株，产物长度为 421 bp。3. 引物经过优化，特异性高，引物是根据基因的保守区域设计，适用于所有强、中、弱新城疫毒株，产物长度为引物经过优化，特异性高，引物是根据基因的保守区域设计，适用于所有强、中、弱新城疫毒株，产物长度为 421 bp。。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。4. PCR mix 中含上样染料，中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。后可以直接上样电泳。
霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)双重荧光PCR检测试剂盒特点优势：霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)双重荧光PCR检测试剂盒特点优势：霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/霍乱弧菌霍乱毒素基因霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)毒素共调菌毛亚单位基因毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)双重荧光PCR双重荧光双重荧光PCR检测试剂盒检测试剂盒检测试剂盒特点优势：特点优势：
1. 特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。 1. 特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。 1. 特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。。
2. 重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。 2. 重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。 2. 重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。。
3. 灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。 3. 灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。 3. 灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4. 实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。 4. 实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。 4. 实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。个小时。
5. 优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。 5. 优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。 5. 优势优势1：序列资源丰富，除：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
6. 优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。 6. 优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。 6. 优势优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)双重荧光PCR检测试剂盒性能指标：霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)双重荧光PCR检测试剂盒性能指标：霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/霍乱弧菌霍乱毒素基因霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)毒素共调菌毛亚单位基因毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)双重荧光PCR双重荧光双重荧光PCR检测试剂盒检测试剂盒检测试剂盒性能指标：性能指标：
1. 试剂盒检测特异性为100%1. 试剂盒检测特异性为100%1. 试剂盒检测特异性为试剂盒检测特异性为100%
2. 检测试剂盒重现性为100%2. 检测试剂盒重现性为100%2. 检测试剂盒重现性为检测试剂盒重现性为100%
3. 灵敏度可达到103/ml3. 灵敏度可达到103/ml3. 灵敏度可达到灵敏度可达到103/ml
4. 有效期为6个月4. 有效期为6个月4. 有效期为有效期为6个月个月
规格及成分规格及成分规格及成分规格及成分规格及成分规格及成分规格及成分规格及成分规格及成分规格及成分

成分	编号	50 次纸盒包装
MMLV 逆转录酶 (含 RI)	80206A	20 μL
RT Buffer（含 dNTP）	60906C	60 uL
PCR Mix 3.0（含染料）	90805	1.5 mL
ND 阳性对照	896897	50 μL
ND 专一性引物一（正向引物）	yw896	50 μL
ND 专一性引物二（反向引物）	yw897	50 μL
RNase-free 水	80403	1 mL
使用手册	11-171201sc	1 份

成分编号50 次纸盒包装MMLV 逆转录酶 (含 RI) 80206A20 μLRT Buffer（含 dNTP）60906C60 uLPCR Mix 3.0（含染料）908051.5 mLND 阳性对照89689750 μLND 专一性引物一（正向引物）yw89650 μLND 专一性引物二（反向引物）yw89750 μLRNase-free 水804031 mL使用手册11-171201sc1 份成分编号50 次纸盒包装成分成分成分成分成分成分成分成分编号编号编号编号编号编号编号编号50 次纸盒包装50 次纸盒包装50 次纸盒包装50 次纸盒包装50 50 50 50 次纸盒包装次纸盒包装次纸盒包装次纸盒包装MMLV 逆转录酶 (含 RI) 80206A20 μLMMLV 逆转录酶 (含 RI)MMLV 逆转录酶 (含 RI)MMLV 逆转录酶 (含 RI)MMLV 逆转录酶 (含 RI)MMLV MMLV MMLV 逆转录酶 (含 RI)逆转录酶 (含 RI)逆转录酶 (含 RI) 80206A 80206A 80206A 80206A 80206A 80206A 80206A20 μL20 μL20 μL20 μL20 20 20 μLμLμLRT Buffer（含 dNTP）60906C60 uLRT Buffer（含 dNTP）RT Buffer（含 dNTP）RT Buffer（含 dNTP）RT Buffer（含 dNTP）RT BufferRT BufferRT Buffer（含 dNTP）（含 dNTP）（含 dNTP）60906C60906C60906C60906C60906C60906C60906C60 uL60 uL60 uL60 uL60 uL60 uL60 uLPCR Mix 3.0（含染料）908051.5 mLPCR Mix 3.0（含染料）PCR Mix 3.0（含染料）PCR Mix 3.0（含染料）PCR Mix 3.0（含染料）PCR Mix 3.0PCR Mix 3.0PCR Mix 3.0（含染料）（含染料）（含染料）908059080590805908059080590805908051.5 mL1.5 mL1.5 mL1.5 mL1.5 mL1.5 mL1.5 mLND 阳性对照89689750 μLND 阳性对照ND 阳性对照ND 阳性对照ND 阳性对照ND ND ND 阳性对照阳性对照阳性对照89689789689789689789689789689789689789689750 μL50 μL50 μL50 μL50 50 50 μLμLμLND 专一性引物一（正向引物）yw89650 μLND 专一性引物一（正向引物）ND 专一性引物一（正向引物）ND 专一性引物一（正向引物）ND 专一性引物一（正向引物）ND ND ND 专一性引物一（正向引物）专一性引物一（正向引物）专一性引物一（正向引物）yw896yw896yw896yw896yw896yw896yw89650 μL50 μL50 μL50 μL50 50 50 μLμLμLND 专一性引物二（反向引物）yw89750 μLND 专一性引物二（反向引物）ND 专一性引物二（反向引物）ND 专一性引物二（反向引物）ND 专一性引物二（反向引物）ND ND ND 专一性引物二（反向引物）专一性引物二（反向引物）专一性引物二（反向引物）yw897yw897yw897yw897yw897yw897yw89750 μL50 μL50 μL50 μL50 50 50 μLμLμLRNase-free 水804031 mLRNase-free 水RNase-free 水RNase-free 水RNase-free 水RNase-free RNase-free RNase-free 水水水804038040380403804038040380403804031 mL1 mL1 mL1 mL1 mL1 mL1 mL使用手册11-171201sc1 份使用手册使用手册使用手册使用手册使用手册使用手册使用手册11-171201sc11-171201sc11-171201sc11-171201sc11-171201sc11-171201sc11-171201sc1 份1 份1 份1 份1 1 1 份份份 运输及保存:低温运输,-20℃保存, 保存期限为 6 个月。运输及保存:低温运输,-20℃保存, 保存期限为 6 个月。运输及保存:低温运输,-20℃保存, 保存期限为 6 个月。运输及保存:低温运输,-20℃保存, 保存期限为 6 个月。运输及保存:运输及保存:运输及保存:运输及保存:运输及保存:运输及保存:低温运输,-20℃保存, 保存期限为 6 个月。低温运输,-20℃保存, 保存期限为 6 个月。低温运输,-20℃保存, 保存期限为 6 个月。低温运输,-20℃保存, 保存期限为 6 个月。低温运输,-20℃保存, 保存期限为 6 个月。
自备试剂：样品 RNA。自备试剂：样品 RNA。自备试剂：样品 RNA。自备试剂：样品 RNA。自备试剂：自备试剂：自备试剂：自备试剂：自备试剂：自备试剂：样品 RNA。样品 RNA。样品 RNA。样品 RNA。样品 RNA。
霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)双重荧光PCR检测试剂盒使用方法:霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)双重荧光PCR检测试剂盒使用方法:霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)双重荧光PCR检测试剂盒使用方法:霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)双重荧光PCR检测试剂盒使用方法:霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/霍乱弧菌霍乱毒素基因霍乱弧菌霍乱毒素基因(CTXA)/毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)毒素共调菌毛亚单位基因毒素共调菌毛亚单位基因(TCPA)双重荧光PCR双重荧光双重荧光PCR检测试剂盒检测试剂盒检测试剂盒使用方法:使用方法:使用方法:使用方法:使用方法:使用方法:
一、样品 RNA 的制备一、样品 RNA 的制备一、样品 RNA 的制备一、样品 RNA 的制备一、样品 RNA 的制备一、样品 RNA 的制备一、样品 RNA 的制备一、样品 RNA 的制备一、样品 RNA 的制备一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout11111、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。2、或柱式病毒 RNAout。2、或柱式病毒 RNAout。2、或柱式病毒 RNAout。22222、或柱式病毒 RNAout。、或柱式病毒 RNAout。、或柱式病毒 RNAout。、或柱式病毒 RNAout。、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆转录）反应合成 cDNA二：RT（逆转录）反应合成 cDNA二：RT（逆转录）反应合成 cDNA二：RT（逆转录）反应合成 cDNA二：RT（逆转录）反应合成 cDNA二：RT（逆转录）反应合成 cDNA二：RT（逆转录）反应合成 cDNA二：RT（逆转录）反应合成 cDNA二：RT（逆转录）反应合成 cDNA二：RT（逆转录）反应合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）:1. 按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）:1. 按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）:1. 按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）:1. 1. 1. 1. 1. 按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）:按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）:按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）:按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）:按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）:

RNA 模板	0.01pg-500 ng （如果丌知道浓度则用 1-10 μL）
ND 专一性引物二（反向引物）	2 μL
RNase-free 水	补水到 12 μL

RNA 模板0.01pg-500 ng
（如果丌知道浓度则用 1-10 μL）ND 专一性引物二（反向引物）2 μLRNase-free 水补水到 12 μLRNA 模板0.01pg-500 ng
（如果丌知道浓度则用 1-10 μL）RNA 模板RNA 模板RNA 模板RNA 模板RNA RNA RNA 模板模板模板0.01pg-500 ng
（如果丌知道浓度则用 1-10 μL）0.01pg-500 ng0.01pg-500 ng0.01pg-500 ng0.01pg-500 ng0.01pg-500 ng0.01pg-500 ng
（如果丌知道浓度则用 1-10 μL）（如果丌知道浓度则用 1-10 μL）（如果丌知道浓度则用 1-10 μL）（如果丌知道浓度则用 1-10 μL）（如果丌知道浓度则用 1-10 μL）（如果丌知道浓度则用 1-10 μL）ND 专一性引物二（反向引物）2 μLND 专一性引物二（反向引物）ND 专一性引物二（反向引物）ND 专一性引物二（反向引物）ND 专一性引物二（反向引物）ND ND ND 专一性引物二（反向引物）专一性引物二（反向引物）专一性引物二（反向引物）2 μL2 μL2 μL2 μL2 2 2 μLμLμLRNase-free 水补水到 12 μLRNase-free 水RNase-free 水RNase-free 水RNase-free 水RNase-free RNase-free RNase-free 水水水补水到 12 μL补水到 12 μL补水到 12 μL补水到 12 μL补水到 12 μL补水到 12 μL补水到 12 μL 2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。2. 702. 702. 702. 702. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），3. 3. 3. 3. 3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），
反应终体积为 20μL。反应终体积为 20μL。反应终体积为 20μL。反应终体积为 20μL。反应终体积为 20μL。反应终体积为 20μL。反应终体积为 20μL。反应终体积为 20μL。反应终体积为 20μL。
4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。4. 424. 424. 424. 424. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
5. 70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。5. 70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。5. 70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。5. 70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。5. 705. 705. 705. 705. 70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。
三、PCR（60 μL 体系）三、PCR（60 μL 体系）三、PCR（60 μL 体系）三、PCR（60 μL 体系）三、PCR（60 μL 体系）三、PCR（60 μL 体系）三、PCR（60 μL 体系）三、PCR（60 μL 体系）三、PCR（60 μL 体系）三、PCR（60 μL 体系）
1、在 PCR 管中加入下列成分：1、在 PCR 管中加入下列成分：1、在 PCR 管中加入下列成分：1、在 PCR 管中加入下列成分：11111、在 PCR 管中加入下列成分：、在 PCR 管中加入下列成分：、在 PCR 管中加入下列成分：、在 PCR 管中加入下列成分：、在 PCR 管中加入下列成分：

成 份	样品	ND 阳性对照	阴性对照
PCR MagicMix 3.0	30 μL	30 μL	30 μL
cDNA 样品（上步的 RT 反应液）	1-5 uL	无	无
ND 阳性对照	无	2 μL	无
ND 专一性引物一（正向引物）	1 μL	1 μL	1 μL
ND 专一性引物二（反向引物）	1 μL	1 μL	1 μL
补水到	60 uL

成 份样品ND 阳性对照阴性对照PCR MagicMix 3.0 30 μL30 μL30 μLcDNA 样品（上步的 RT 反应液）1-5 uL无无ND 阳性对照无2 μL无ND 专一性引物一（正向引物）1 μL1 μL1 μLND 专一性引物二（反向引物）1 μL1 μL1 μL补水到60 uL成 份样品ND 阳性对照阴性对照成 份成 份成 份成 份成 份成 份成 份成 份样品样品样品样品样品样品样品样品ND 阳性对照ND 阳性对照ND 阳性对照ND 阳性对照ND ND ND ND 阳性对照阳性对照阳性对照阳性对照阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照PCR MagicMix 3.0 30 μL30 μL30 μLPCR MagicMix 3.0PCR MagicMix 3.0PCR MagicMix 3.0PCR MagicMix 3.0PCR MagicMix 3.0PCR MagicMix 3.0PCR MagicMix 3.0 30 μL 30 μL 30 μL 30 μL 30  30  30 μLμLμL30 μL30 μL30 μL30 μL30 30 30 μLμLμL30 μL30 μL30 μL30 μL30 30 30 μLμLμLcDNA 样品（上步的 RT 反应液）1-5 uL无无cDNA 样品（上步的 RT 反应液）cDNA 样品（上步的 RT 反应液）cDNA 样品（上步的 RT 反应液）cDNA 样品（上步的 RT 反应液）cDNA cDNA cDNA 样品（上步的 RT 反应液）样品（上步的 RT 反应液）样品（上步的 RT 反应液）1-5 uL1-5 uL1-5 uL1-5 uL1-5 uL1-5 uL1-5 uL无无无无无无无无无无无无无无ND 阳性对照无2 μL无ND 阳性对照ND 阳性对照ND 阳性对照ND 阳性对照ND ND ND 阳性对照阳性对照阳性对照无无无无无无无2 μL2 μL2 μL2 μL2 2 2 μLμLμL无无无无无无无ND 专一性引物一（正向引物）1 μL1 μL1 μLND 专一性引物一（正向引物）ND 专一性引物一（正向引物）ND 专一性引物一（正向引物）ND 专一性引物一（正向引物）ND ND ND 专一性引物一（正向引物）专一性引物一（正向引物）专一性引物一（正向引物）1 μL1 μL1 μL1 μL1 1 1 μLμLμL1 μL1 μL1 μL1 μL1 1 1 μLμLμL1 μL1 μL1 μL1 μL1 1 1 μLμLμLND 专一性引物二（反向引物）1 μL1 μL1 μLND 专一性引物二（反向引物）ND 专一性引物二（反向引物）ND 专一性引物二（反向引物）ND 专一性引物二（反向引物）ND ND ND 专一性引物二（反向引物）专一性引物二（反向引物）专一性引物二（反向引物）1 μL1 μL1 μL1 μL1 1 1 μLμLμL1 μL1 μL1 μL1 μL1 1 1 μLμLμL1 μL1 μL1 μL1 μL1 1 1 μLμLμL补水到60 uL补水到补水到补水到补水到补水到补水到补水到60 uL60 uL60 uL60 uL60 uL60 uL60 uL 2. PCR 反应参数：2. PCR 反应参数：2. PCR 反应参数：2. PCR 反应参数：2. PCR 2. PCR 2. PCR 2. PCR 2. PCR 2. PCR 反应参数：反应参数：反应参数：反应参数：反应参数：反应参数：

过程	温度	时间	其他
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （40个循环）	95℃	30 s
	50℃	30 s
	72℃	40 s
最后延伸	72℃	5 min

过程温度时间其他预变性95℃5 minPCR 反应
（40个循环）
95℃30 s50℃30 s 72℃  40 s最后延伸 72℃5 min过程温度时间其他过程过程过程过程过程过程过程过程温度温度温度温度温度温度温度温度时间时间时间时间时间时间时间时间其他其他其他其他其他其他其他其他预变性95℃5 min预变性预变性预变性预变性预变性预变性预变性95℃95℃95℃95℃959595℃℃℃5 min5 min5 min5 min5 min5 min5 minPCR 反应
（40个循环）
95℃30 sPCR 反应
（40个循环）
PCR 反应PCR 反应PCR 反应PCR PCR PCR 反应反应反应
（40个循环）（40个循环）（40个循环）（40个循环）（40个循环）（40个循环）
95℃95℃95℃95℃959595℃℃℃30 s30 s30 s30 s30 s30 s30 s50℃30 s50℃50℃50℃50℃505050℃℃℃30 s30 s30 s30 s30 s30 s30 s 72℃  40 s 72℃ 72℃ 72℃ 72℃ 72 72 72℃ ℃ ℃ 40 s 40 s 40 s 40 s 40 s 40 s 40 s最后延伸 72℃5 min最后延伸最后延伸最后延伸最后延伸最后延伸最后延伸最后延伸 72℃ 72℃ 72℃ 72℃ 72 72 72℃℃℃5 min5 min5 min5 min5 min5 min5 min 四、电泳检测四、电泳检测四、电泳检测四、电泳检测四、电泳检测四、电泳检测四、电泳检测四、电泳检测四、电泳检测四、电泳检测
1、取 10-20μL PCR 产物直接在 PAGE 或琼脂糖凝胶上电泳，正确的扩增产物的大小为421 bp。1、取 10-20μL PCR 产物直接在 PAGE 或琼脂糖凝胶上电泳，正确的扩增产物的大小为421 bp。1、取 10-20μL PCR 产物直接在 PAGE 或琼脂糖凝胶上电泳，正确的扩增产物的大小为421 bp。1、取 10-20μL PCR 产物直接在 PAGE 或琼脂糖凝胶上电泳，正确的扩增产物的大小为421 bp。11111、取 10-20μL PCR 产物直接在 PAGE 或琼脂糖凝胶上电泳，正确的扩增产物的大小为421 bp。、取 10-20μL PCR 产物直接在 PAGE 或琼脂糖凝胶上电泳，正确的扩增产物的大小为421 bp。、取 10-20μL PCR 产物直接在 PAGE 或琼脂糖凝胶上电泳，正确的扩增产物的大小为421 bp。、取 10-20μL PCR 产物直接在 PAGE 或琼脂糖凝胶上电泳，正确的扩增产物的大小为421 bp。、取 10-20μL PCR 产物直接在 PAGE 或琼脂糖凝胶上电泳，正确的扩增产物的大小为421 bp。
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