人B细胞刺激因子(BAFF)酶联免疫吸附测定试剂盒
Human BAFF ELISA Kit
本产品冰袋运输；保存于4℃(其中 标准品 需保存于-20℃)，保质期6个月；标准品如存放于4℃，1~2周内有效。

货号规格
HJ00896次

产品特点
g人B细胞刺激因子(BAFF)酶联免疫吸附测定试剂盒人B细胞刺激因子(BAFF)酶联免疫吸附测定试剂盒人B细胞刺激因子(BAFF)酶联免疫吸附测定试剂盒人B细胞刺激因子(BAFF)酶联免疫吸附测定试剂盒
Human BAFF ELISA KitHuman BAFF ELISA KitHuman BAFF ELISA KitHuman BAFF ELISA KitHuman BAFF ELISA Kit
本产品冰袋运输；保存于4℃(其中 标准品 需保存于-20℃)，保质期6个月；标准品如存放于4℃，1~2周内有效。本产品冰袋本产品冰袋本产品冰袋运输；保存于运输；保存于运输；保存于444℃℃℃(((其中 其中 其中 标准品标准品标准品标准品标准品 需保存于 需保存于 需保存于-----202020℃℃℃)))，保质期，保质期，保质期666个月个月个月；；；标准品标准品标准品标准品标准品如存放于4如存放于4如存放于4℃℃℃，1~2周内有效。，1~2周内有效。，1~2周内有效。

货号规格货号规格货号规格货号规格
HJ00896次HJ008HJ008 9996次66次次

产品特点产品特点产品特点产品特点
gggd高灵敏度——多次重复结果表明，最小检出量为39 pg/mL；
gd高特异性——与人APRIL、BAFF R/Fc Chimera及小鼠BAFF均无交叉反应；
gd高灵敏度——多次重复结果表明，最小检出量为39 pg/mL；
gdd高灵敏度高灵敏度————多次重复结果表明，最小检出量为399 pg/mL；
ggd高特异性——与人APRIL、BAFF R/Fc Chimera及小鼠BAFF均无交叉反应；
gdd高特异性高特异性————与人APRIL、BAFF R/Fc Chimera及小鼠BAFF均无交叉反应；
ggd重复性好——板内，板间变异系数均小于10%。

产品简介
本试本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中人B细胞刺激因子(BAFF)的浓度。人BAFF捕获抗体已经预包被于酶标板上，当加入样品或标准品时，其中的人BAFF会与捕获抗体结合，而其它游离成分则会通过洗涤被除去。接着，再加入生物素化的抗人BAFF抗体后，抗人BAFF抗体与人BAFF接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离成分则通过洗涤被除去。随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，这样亲合素上标记的HRP就与夹心的免疫复合物连接起来，而其它游离成分则通过洗涤被除去。最后加入显色剂，若样品中存在人BAFF，则会形成免疫复合物，其上连接的HRP会催化无色的显色剂氧化生成蓝色物质，而后加入终止液，最终产物呈黄色。通过酶标仪检测，读其450 nm处的OD值，人BAFF浓度与OD450值之间呈正比，通过检测标准品绘制标准曲线，对照未知样品中OD值，即可计算出样品中人BAFF浓度。

背景简介
本试B细胞刺激因子(BAFF，也被称为BLYS、TALL-1或THANK)是TNF超家族成员之一，因其能够维持和活化B细胞而得名。BAFF前体蛋白是一个包含285个氨基酸的Ⅱ型跨膜蛋白，其在血液中能检测到的部分是一个155个氨基酸的蛋白，是BAFF的胞外部分。BAFF蛋白可由单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突细胞、T淋巴细胞、淋巴结、肾脏和骨髓等细胞或组织产生。
本试BAFF蛋白在维持和活化B细胞方面发挥着重要作用，其也是B细胞从T1转化到T2的主要作用因子。BAFF表达量在系统性红斑狼疮和干燥症患者的血清中有明显的增高，在类风湿性关节炎患者血清中也有明显上调，在类风湿性关节炎和干燥症患者的血清中抗体滴度也大幅增加。综上，BAFF可能是自身免疫病的潜在治疗靶点。

产品内容d重复性好——板内，板间变异系数均小于10%。dd重复性好重复性好————板内，板间变异系数均小于10%。

产品简介产品简介产品简介产品简介
本试本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中人B细胞刺激因子(BAFF)的浓度。人BAFF捕获抗体已经预包被于酶标板上，当加入样品或标准品时，其中的人BAFF会与捕获抗体结合，而其它游离成分则会通过洗涤被除去。接着，再加入生物素化的抗人BAFF抗体后，抗人BAFF抗体与人BAFF接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离成分则通过洗涤被除去。随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，这样亲合素上标记的HRP就与夹心的免疫复合物连接起来，而其它游离成分则通过洗涤被除去。最后加入显色剂，若样品中存在人BAFF，则会形成免疫复合物，其上连接的HRP会催化无色的显色剂氧化生成蓝色物质，而后加入终止液，最终产物呈黄色。通过酶标仪检测，读其450 nm处的OD值，人BAFF浓度与OD450值之间呈正比，通过检测标准品绘制标准曲线，对照未知样品中OD值，即可计算出样品中人BAFF浓度。本试本试本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中人B细胞刺激因子(BAFF)的浓度。人BAFF捕获抗体已经预包被于酶标板上，当加入样品或标准品时，其中的人BAFF会与捕获抗体结合，而其它游离成分则会通过洗涤被除去。接着，再加入生物素化的抗人BAFF抗体后，抗人BAFF抗体与人BAFF接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离成分则通过洗涤被除去。随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，这样亲合素上标记的HRP就与夹心的免疫复合物连接起来，而其它游离成分则通过洗涤被除去。最后加入显色剂，若样品中存在人BAFF，则会形成免疫复合物，其上连接的HRP会催化无色的显色剂氧化生成蓝色物质，而后加入终止液，最终产物呈黄色。通过酶标仪检测，读其4500 nm处的OD值，人BAFF浓度与OD450值之间呈正比，通过检测标准品绘制标准曲线，对照未知样品中OD值，即可计算出样品中人BAFF浓度。

背景简介背景简介背景简介背景简介
本试B细胞刺激因子(BAFF，也被称为BLYS、TALL-1或THANK)是TNF超家族成员之一，因其能够维持和活化B细胞而得名。BAFF前体蛋白是一个包含285个氨基酸的Ⅱ型跨膜蛋白，其在血液中能检测到的部分是一个155个氨基酸的蛋白，是BAFF的胞外部分。BAFF蛋白可由单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突细胞、T淋巴细胞、淋巴结、肾脏和骨髓等细胞或组织产生。
本试BAFF蛋白在维持和活化B细胞方面发挥着重要作用，其也是B细胞从T1转化到T2的主要作用因子。BAFF表达量在系统性红斑狼疮和干燥症患者的血清中有明显的增高，在类风湿性关节炎患者血清中也有明显上调，在类风湿性关节炎和干燥症患者的血清中抗体滴度也大幅增加。综上，BAFF可能是自身免疫病的潜在治疗靶点。本试本试B细胞刺激因子(BAFF，也被称为BLYS、TALL-1或THANK)是TNF超家族成员之一，因其能够维持和活化B细胞而得名。BAFF前体蛋白是一个包含285个氨基酸的Ⅱ型跨膜蛋白，其在血液中能检测到的部分是一个155个氨基酸的蛋白，是BAFF的胞外部分。BAFF蛋白可由单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突细胞、T淋巴细胞、淋巴结、肾脏和骨髓等细胞或组织产生。
本试本试BAFF蛋白在维持和活化B细胞方面发挥着重要作用，其也是B细胞从T1转化到T2的主要作用因子。BAFF表达量在系统性红斑狼疮和干燥症患者的血清中有明显的增高，在类风湿性关节炎患者血清中也有明显上调，在类风湿性关节炎和干燥症患者的血清中抗体滴度也大幅增加。综上，BAFF可能是自身免疫病的潜在治疗靶点。

产品内容产品内容产品内容产品内容

组分	体积或数量
人BAFF预包被板	12条
样品分析缓冲液	5mL
标准品稀释液(5×)	10mL
人BAFF标准品	≥2支(冻干)
人BAFF生物素化抗体	10mL
HRP标记的亲和素	10mL
浓缩洗涤液(20×)	30mL
显色剂TMB	10mL
终止液	5mL
封板胶纸	3张

组分体积或数量人BAFF预包被板12条样品分析缓冲液5mL标准品稀释液(5×)10mL人BAFF标准品≥2支(冻干)人BAFF生物素化抗体10mLHRP标记的亲和素10mL浓缩洗涤液(20×)30mL显色剂TMB10mL终止液5mL封板胶纸3张组分体积或数量组分组分组分组分组分组分组分组分组分体积或数量体积或数量体积或数量体积或数量体积或数量体积或数量体积或数量体积或数量体积或数量体积或数量体积或数量人BAFF预包被板12条人BAFF预包被板人BAFF预包被板人BAFF预包被板人BAFF预包被板人BAFF预包被板人BAFF人BAFF人人BAFFBAFF预包被板预包被板预包被板预包被板12条12条12条12条12条12条12条12条条样品分析缓冲液5mL样品分析缓冲液样品分析缓冲液样品分析缓冲液样品分析缓冲液样品分析缓冲液样品分析缓冲液样品分析缓冲液样品分析缓冲液样品分析缓冲液5mL5mL5mL5mL5mL5555 mLmLmLmL标准品稀释液(5×)10mL标准品稀释液(5×)标准品稀释液(5×)标准品稀释液(5×)标准品稀释液(5×)标准品稀释液(5×)标准品稀释液标准品稀释液标准品稀释液标准品稀释液((((555××××))))10mL10mL10mL10mL10mL11110000 mLmLmLmL人BAFF标准品≥2支(冻干)人BAFF标准品人BAFF标准品人BAFF标准品人BAFF标准品人BAFF标准品人BAFF人BAFF人人BAFFBAFF标准品标准品标准品标准品≥2支(冻干)≥2支(冻干)≥2支(冻干)≥2支(冻干)≥2支(冻干)≥≥≥≥2222支支支支((((冻干冻干冻干冻干))))人BAFF生物素化抗体10mL人BAFF生物素化抗体人BAFF生物素化抗体人BAFF生物素化抗体人BAFF生物素化抗体人BAFF生物素化抗体人BAFF人BAFF人人BAFFBAFF生物素化抗体生物素化抗体生物素化抗体生物素化抗体10mL10mL10mL10mL10mL1110000 mLmLmLmLHRP标记的亲和素10mLHRP标记的亲和素HRP标记的亲和素HRP标记的亲和素HRP标记的亲和素HRP标记的亲和素HRPHRPHRP标记的标记的标记的标记的亲和素亲和素亲和素亲和素10mL10mL10mL10mL10mL1110000 mLmLmLmL浓缩洗涤液(20×)30mL浓缩洗涤液(20×)浓缩洗涤液(20×)浓缩洗涤液(20×)浓缩洗涤液(20×)浓缩洗涤液(20×)浓缩洗涤液浓缩洗涤液浓缩洗涤液浓缩洗涤液((((202020××××))))30mL30mL30mL30mL30mL3330000 mLmLmLmL显色剂TMB10mL显色剂TMB显色剂TMB显色剂TMB显色剂TMB显色剂TMB显色剂显色剂显色剂显色剂TMBTMBTMB10mL10mL10mL10mL10mL1110000 mLmLmLmL终止液5mL终止液终止液终止液终止液终止液终终终终止液止液止液止液5mL5mL5mL5mL5mL5555 mLmLmLmL封板胶纸3张封板胶纸封板胶纸封板胶纸封板胶纸封板胶纸封板胶纸封板胶纸封板胶纸封板胶纸3张3张3张3张3张3张3张3张张


操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤
good◆ goodgoodgood◆ ◆ ◆ ◆ ◆ 样品制备
good◆gg1. 根据样品种类选择相应的处理方法：
good◆ 样1. 根A. 细胞上清：将细胞培养上清液100~500×g离心5 min，去除悬浮物后即可；
good◆ 样1. 根B. 血清样品：将全血在室温下静置0.5~2 h，待其自然凝固并析出血清后，离心取黄色上清即可(4℃，1,000~2,000×g，10 min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血清需置于冰上待用，请勿在其中添加任何防腐剂或抗凝剂；
good◆ 样1. 根C. 血浆样品：使用EDTA对全血进行抗凝处理后，混合均匀置于冰上，离心取黄色上清即可(4℃，1,000~2,000×g，10 min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血浆需置于冰上待用；样品制备样品制备
good◆gggood◆gg1. 根据样品种类选择相应的处理方法：根据样品种类选择相应的处理方法：
good◆ 样1. 根good◆ 样1. 根A. 细胞上清：将细胞培养上清液100~500×g离心5 min，去除悬浮物后即可；细胞上清：将细胞培养上清液：将细胞培养上清液100~500×ggg离心55 min，去除悬浮物后即可；
good◆ 样1. 根good◆ 样1. 根B. 血清样品：将全血在室温下静置0.5~2 h，待其自然凝固并析出血清后，离心取黄色上清即可(4℃，1,000~2,000×g，10 min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血清需置于冰上待用，请勿在其中添加任何防腐剂或抗凝剂；血清样品：将全血在室温下静置0.5~22 h，待其自然凝固并析出血清并析出血清后，离心取黄色上清即可(4℃，1,000~2,000×ggg，100 min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血清需置于冰上待用，请勿在其中添加任何防腐剂或抗凝剂；
good◆ 样1. 根good◆ 样1. 根C. 血浆样品：使用EDTA对全血进行抗凝处理后，混合均匀置于冰上，离心取黄色上清即可(4℃，1,000~2,000×g，10 min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血浆需置于冰上待用；血浆样品：使用EDTA对全血进行抗凝处理后，混合均匀置于冰上，离心取黄色上清即可(4℃，1,000~2,000×ggg，100 min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血浆需置于冰上待用；注意：①人血清或血浆样品请用样品分析缓冲液做倍比稀释后再检测；
注意：②若待测样品无法及时检测，样品制备完成后，请分装冻存于-20℃，避免反复冻融；
注意：③ 请保证待测样品清澈透明，检测前如发现样品中有悬浮物，需通过离心去除；
注意：④ 为了保证检测结果准确，请勿使用溶血、黄疸、高血脂或污染的样品。注意：①人血清或血浆样品请用样品分析缓冲液做倍比稀释后再检测；
注意：②若待测样品无法及时检测，样品制备完成后，请分装冻存于-20℃，避免反复冻融；
注意：③ 请保证待测样品清澈透明，检测前如发现样品中有悬浮物，需通过离心去除；
注意：④ 为了保证检测结果准确，请勿使用溶血、黄疸、高血脂或污染的样品。注意：①注意：①① 人血清或血浆样品请用人血清或血浆样品请用 样品分析缓冲液样品分析缓冲液样品分析缓冲液 做倍比稀释后再检测；做倍比稀释后再检测；
注意：注意：②②② 若待测样品无法及时检测，样品制备完成后，请分装冻存于-20℃，避免反复冻融；若待测样品无法及时检测，样品制备完成后，请分装冻存于-20℃，避免反复冻融；
注意：注意：③ 请保证待测样品清澈透明，检测前如发现样品中有悬浮物，需通过离心去除；③③ 请保证待测样品清澈透明，检测前如发现样品中有悬浮物，需通过离心去除；
注意：注意：④ 为了保证检测结果准确，请勿使用溶血、黄疸、高血脂或污染的样品。④④ 为了保证检测结果准确，请勿使用溶血、黄疸、高血脂或污染的样品。
good◆ goodgoodgood◆ ◆ ◆ ◆ ◆ 检测准备工作
good◆gg2. 试剂盒自冰箱取出后，请置于室温平衡20 min；检测完成后，剩余试剂请及时置于4℃保存；
good◆gg3. 将 浓缩洗涤液(20×) 用双蒸水或去离子水稀释为1×洗涤液；
good◆gg4. 将 标准品稀释液(5×) 用双蒸水或去离子水稀释为1×标准品稀释液；
good◆gg5. 按标准品标签上注明的复溶体积，用1×标准品稀释液复溶使标准品终浓度达到2,500 pg/mL，室温操作，请严格控制在25~28℃，静置15~20 min后轻轻混悬，用移液器吹打数次，使其彻底溶解，然后按下表用1×标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。(最高浓度为2,500 pg/mL，将1×标准品稀释液作为浓度0 pg/mL。)检测准备工作
good◆gg2. 试剂盒自冰箱取出后，请置于室温平衡20 min；检测完成后，剩余试剂请及时置于4℃保存；
good◆gg3. 将 浓缩洗涤液(20×) 用双蒸水或去离子水稀释为1×洗涤液；
good◆gg4. 将 标准品稀释液(5×) 用双蒸水或去离子水稀释为1×标准品稀释液；
good◆gg5. 按标准品标签上注明的复溶体积，用1×标准品稀释液复溶使标准品终浓度达到2,500 pg/mL，室温操作，请严格控制在25~28℃，静置15~20 min后轻轻混悬，用移液器吹打数次，使其彻底溶解，然后按下表用1×标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。(最高浓度为2,500 pg/mL，将1×标准品稀释液作为浓度0 pg/mL。)检测准备工作
good◆gggood◆gg2. 试剂盒自冰箱取出后，请置于室温平衡200 min；检测完成后，剩余试剂请及时置于4℃保存；；
good◆gggood◆gg3. 将 浓缩洗涤液浓缩洗涤液((2020××)) 用双蒸水或去离子水稀释为1×洗涤液；
good◆gggood◆gg4. 将 标准品稀释液标准品稀释液((55×)×) 用双蒸水或去离子水稀释为1×标准品稀释液；
good◆gggood◆gg5. 按标准品标签上注明的复溶体积，用1×标准品稀释液复溶使标准品终浓度达到2,5000 pg/mL，室温操作，请严格控制在25~28℃请严格控制在25~28℃，静置15~200 min后轻轻混悬，用移液器吹打数次，使其彻底溶解，然后按下表用1×标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。(最高浓度为2,5000 pg/mL，将1×标准品稀释液作为浓度00 pg/mL。)

管号	稀释液用量(μL)	复溶后标准品用量(μL)	标准品的最终浓度(pg/mL)
A	0	250	2,500
B	250	250	1,250
C	250	250(从B管中取)	625
D	250	250(从C管中取)	312.5
E	250	250(从D管中取)	156.25
F	250	250(从E管中取)	78.125
G	250	0	0

管号稀释液用量(μL)复溶后标准品用量(μL)标准品的最终浓度(pg/mL)A02502,500B2502501,250C250250(从B管中取)625D250250(从C管中取)312.5E250250(从D管中取)156.25F250250(从E管中取)78.125G25000管号稀释液用量(μL)复溶后标准品用量(μL)标准品的最终浓度(pg/mL)管号管号管号管号管号管号管号稀释液用量(μL)稀释液用量(μL)稀释液用量(μL)稀释液用量(稀释液用量(稀释液用量稀释液用量(μLμLμL))))复溶后标准品用量(μL)复溶后标准品用量(μL)复溶后标准品用量(μL)复溶后标准品用量(复溶后标准品用量(复溶后标准品用量复溶后标准品用量(μLμLμL))))标准品的最终浓度(pg/mL)标准品的最终浓度(pg/mL)标准品的最终浓度(pg/mL)标准品的最终浓度(标准品的最终浓度(标准品的最终浓度标准品的最终浓度(ppppggg////mLmLmLmL))))A02502,500AAAAAAA00000002502502502502502502502,5002,5002,5002,52,52,52,5000000B2502501,250BBBBBBB2502502502502502502502502502502502502502501,2501,2501,2501,2501,2501,2501,250C250250(从B管中取)625CCCCCCC250250250250250250250250(从B管中取)250(从B管中取)250(从B管中取)2225555000((((从B管中取从B管中取从从BB管中取管中取))))625625625625625625625D250250(从C管中取)312.5DDDDDDD250250250250250250250250(从C管中取)250(从C管中取)250(从C管中取)2225555000((((从从从从CCCC管中取管中取管中取管中取))))312.5312.5312.5312.5312.5312.5312.5E250250(从D管中取)156.25EEEEEEE250250250250250250250250(从D管中取)250(从D管中取)250(从D管中取)2225555000((((从从从从DDDD管中取管中取管中取管中取))))156.25156.25156.25156.25156.25156.25156.25F250250(从E管中取)78.125FFFFFFF250250250250250250250250(从E管中取)250(从E管中取)250(从E管中取)2225555000((((从从从从EEEE管中取管中取管中取管中取))))78.12578.12578.12578.12578.12578.12578.125G25000GGGGGGG25025025025025025025000000000000000
注意：标准品复溶加样后，剩余部份请丢弃。注意：标准品复溶加样后，剩余部份请丢弃。注意：标准品复溶加样后，剩余部份请丢弃。注意：标准品复溶加样后，剩余部份请丢弃。
good◆ goodgoodgood◆ ◆ ◆ ◆ ◆ 检测流程
good◆gg6. 通过计算确定一次实验所需的板条数，取出所需板条放置于框架内，多余的板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃；检测流程
good◆gg6. 通过计算确定一次实验所需的板条数，取出所需板条放置于框架内，多余的板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃；检测流程
good◆gggood◆gg6. 通过计算确定一次实验所需的板条数，取出所需板条放置于框架内，多余的板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃；注意：①标准品和样品建议做双复孔检测；
注意：② 建议设置本底较正孔，即空白孔，只加入相应体积的 显色剂TMB 和 终止液 即可；
注意：③ 每次实验均需绘制标准曲线。
good◆gg7. 将样品和不同浓度标准品(100μL/孔)分别加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育120min。细胞上清样品一般可直接进行检测，如超过试剂盒的检测范围，可用1×标准品稀释液进行相应稀释；对于血清或血浆样品，可先在孔中加入50μL样品分析缓冲液，接着加入50μL样品，如超出检测范围，可先加入50μL样品分析缓冲液，接着加入50μL用1×标准品稀释液稀释后的样品，再进行检测，请注意记录好样品的稀释倍数；
注意：① 请查阅相关文献确定样品中待检测蛋白的大致浓度，若其大于或小于本试剂盒的最高或最低标准品浓度，请将样品适当稀释或浓缩后再进行检测；
注意：②整个加样过程不宜超过10 min，否则可能会影响检测结果。
good◆gg8. 洗板5次，每孔1×洗涤液用量为300μL，注入与吸出间隔15~30s，洗完后将板倒扣在厚吸水纸上拍干；
注意：洗涤过程至关重要，洗涤不充分会导致结果产生较大误差。
good◆gg9. 加入人BAFF生物素化抗体(100μL/孔，无需稀释)。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育60min；
注意：检测血清和血浆样品时，检测抗体的孵育时间应适当延长。
good◆gg10. 洗板5次，方法同步骤8；
good◆gg11. 加入HRP标记的亲和素(100μL/孔，无需稀释)。用封板胶纸封住反应孔，避光室温孵育20min；
good◆gg12. 洗板5次，方法同步骤8；
good◆gg13. 加入显色剂TMB(100μL/孔)，避光室温孵育10~20min；
注意：在保存和使用时，请勿将TMB接触氧化剂和金属。
good◆gg14. 加入终止液(50μL/孔)，混匀后即刻使用酶标仪测量OD450，同时设定540nm或570nm作为校正波长，即可计算得到校正吸光度值(OD450－OD540或OD450－OD570)；
注意：读取OD值建议在10 min内完成。注意：①标准品和样品建议做双复孔检测；
注意：② 建议设置本底较正孔，即空白孔，只加入相应体积的 显色剂TMB 和 终止液 即可；
注意：③ 每次实验均需绘制标准曲线。
good◆gg7. 将样品和不同浓度标准品(100μL/孔)分别加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育120min。细胞上清样品一般可直接进行检测，如超过试剂盒的检测范围，可用1×标准品稀释液进行相应稀释；对于血清或血浆样品，可先在孔中加入50μL样品分析缓冲液，接着加入50μL样品，如超出检测范围，可先加入50μL样品分析缓冲液，接着加入50μL用1×标准品稀释液稀释后的样品，再进行检测，请注意记录好样品的稀释倍数；
注意：① 请查阅相关文献确定样品中待检测蛋白的大致浓度，若其大于或小于本试剂盒的最高或最低标准品浓度，请将样品适当稀释或浓缩后再进行检测；
注意：②整个加样过程不宜超过10 min，否则可能会影响检测结果。
good◆gg8. 洗板5次，每孔1×洗涤液用量为300μL，注入与吸出间隔15~30s，洗完后将板倒扣在厚吸水纸上拍干；
注意：洗涤过程至关重要，洗涤不充分会导致结果产生较大误差。
good◆gg9. 加入人BAFF生物素化抗体(100μL/孔，无需稀释)。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育60min；
注意：检测血清和血浆样品时，检测抗体的孵育时间应适当延长。
good◆gg10. 洗板5次，方法同步骤8；
good◆gg11. 加入HRP标记的亲和素(100μL/孔，无需稀释)。用封板胶纸封住反应孔，避光室温孵育20min；
good◆gg12. 洗板5次，方法同步骤8；
good◆gg13. 加入显色剂TMB(100μL/孔)，避光室温孵育10~20min；
注意：在保存和使用时，请勿将TMB接触氧化剂和金属。
good◆gg14. 加入终止液(50μL/孔)，混匀后即刻使用酶标仪测量OD450，同时设定540nm或570nm作为校正波长，即可计算得到校正吸光度值(OD450－OD540或OD450－OD570)；
注意：读取OD值建议在10 min内完成。注意：①注意：①① 标准品和样品建议做双复孔检测；标准品和样品建议做双复孔检测；
注意：注意：② 建议设置本底较正孔，即空白孔，只加入相应体积的 ②② 建议设置本底较正孔，即空白孔，只加入相应体积的 显色剂显色剂显色剂TMBTMBTMB 和  和 终止液终止液终止液 即可； 即可；
注意：注意：③ 每次实验均需绘制标准曲线。③③ 每次实验均需绘制标准曲线。
good◆gggood◆gg7. 将样品和不同浓度标准品(将样品和不同浓度标准品(1010000μLμL//孔孔))分别分别分别加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育1212000min。细胞上清样品一般可直接进行检测，如超过试剂盒的检测范围，可用1×标准品稀释液进行相应稀释；对于血清或血浆样品，可先在孔中加入5min。细胞上清样品一般可直接进行检测，如超过试剂盒的检测范围，可用1×标准品稀释液进行相应稀释；对于血清或血浆样品，可先在孔中加入5000μLμL样品分析缓冲液样品分析缓冲液，接着加入5，接着加入5000μLμL样品，如超出检测范围，可先加入5样品，如超出检测范围，可先加入5000μLμL样品分析缓冲液样品分析缓冲液，接着加入5，接着加入5000μLμL用1用1××标准品稀释液标准品稀释液稀释后的样品，再进行检测，请注意记录好样品的稀释倍数；稀释后的样品，再进行检测，请注意记录好样品的稀释倍数；
注意：① 请查阅相关文献确定样品中待检测蛋白的大致浓度，若其大于或小于本试剂盒的最高或最低标准品浓度，请将样品适当稀释或浓缩后再进行检测；注意：①① 请查阅相关文献确定样品中待检测蛋白的大致浓度，，若其大于或小于本试剂盒的最高或最低标准品浓度，请将样品适当稀释或浓缩后再进行检测；
注意：注意：②②② 整个加样过程不宜超过10 min，否则可能会影响检测结果。整个加样过程不宜超过100 min，否则可能会影响检测结果。
good◆gggood◆gg8. 洗板5次，每孔1洗板5次，每孔1××洗涤液洗涤液用量用量为30为30000μLμL，注入与吸出间隔15，注入与吸出间隔15~~33000ss，，洗完后洗完后将板倒扣在厚吸水纸上拍干将板倒扣在厚吸水纸上拍干；；
注意：洗涤过程至关重要，洗涤不充分会导致结果产生较大误差。注意：洗涤过程至关重要，洗涤不充分会导致结果产生较大误差。
good◆gggood◆gg9. 加入加入人BAFF人BAFF生物素化抗体生物素化抗体((1010000μLμL//孔孔，，无需稀释无需稀释))。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育6。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育6000minmin；；
注意：检测血清和血浆样品时，检测抗体的孵育时间应适当延长。注意：检测血清和血浆样品时，检测抗体的孵育时间应适当延长。
good◆gggood◆gg10. 洗板5次，方法同步骤8；洗板5次，方法同步骤8；
good◆gggood◆gg11. 加入加入HRPHRP标记的标记的亲和素亲和素((1010000μLμL//孔孔，，无需稀释无需稀释))。用封板胶纸封住反应孔，避光室温孵育2。用封板胶纸封住反应孔，避光室温孵育2000min；min；
good◆gggood◆gg12. 洗板5次，方法同步骤8；洗板5次，方法同步骤8；
good◆gggood◆gg13. 加入加入显色剂TMB显色剂TMB((1010000μLμL//孔孔))，避光室温孵育，避光室温孵育10~10~22000minmin；；
注意：在保存和使用时，请勿将TMB接触氧化剂和金属。注意：在保存和使用时，请勿将TMB接触氧化剂和金属。
good◆gggood◆gg14. 加入加入终止液终止液((55000μLμL//孔孔))，，混匀后即刻混匀后即刻使用酶标仪使用酶标仪测量OD450测量OD450，，同时同时设定54设定54000nm或57nm或57000nm作为校正波长，nm作为校正波长，即可计算得到校正吸光度值即可计算得到校正吸光度值((ODOD450450－－OD540OD540或或ODOD450450－－OD570OD570))；；
注意：读取OD值建议在10 min内完成。注意：读取OD值建议在100 min内完成。
good◆ goodgoodgood◆ ◆ ◆ ◆ ◆ 数据分析
good◆gg15. 绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，利用计算机软件作四参数逻辑(4-PL)曲线拟合创建标准曲线，通过样品的OD值即可在标准曲线上计算出其相应浓度。数据分析
good◆gg15. 绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，利用计算机软件作四参数逻辑(4-PL)曲线拟合创建标准曲线，通过样品的OD值即可在标准曲线上计算出其相应浓度。数据分析
good◆gggood◆gg15. 绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，利用计算机软件作四参数逻辑(4-PL)曲线拟合创建标准曲线，通过样品的OD值即可在标准曲线上计算出其相应浓度。注意：①复孔OD值在20%的差异范围内结果才有效，复孔OD值取平均后可作为测量值；
注意：② 每个标准品或样品的OD值应减去本底校正孔的OD值；
注意：③ 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。注意：①复孔OD值在20%的差异范围内结果才有效，复孔OD值取平均后可作为测量值；
注意：② 每个标准品或样品的OD值应减去本底校正孔的OD值；
注意：③ 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。注意：①注意：①① 复孔OD值在20%的差异范围内结果才有效，复孔OD值取平均后可作为测量值；复孔OD值在20%的差异范围内结果才有效，复孔OD值取平均后可作为测量值；
注意：注意：② 每个标准品或样品的OD值应减去本底校正孔的OD值；②② 每个标准品或样品的OD值应减去本底校正孔的OD值；
注意：注意：③ 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。③③ 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
good◆ 标准曲线范例goodgoodgood◆ ◆ ◆ ◆ ◆ 标准曲线范例标准曲线范例人B细胞刺激因子参考标准曲线人B细胞刺激因子参考标准曲线人B细胞刺激因子参考标准曲线人B细胞刺激因子参考标准曲线

注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算样品含量。

注意事项注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算样品含量。注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算样品含量。样品含量。样品含量。

注意事项注意事项注意事项注意事项good1. 浓缩洗涤液低温情况下可能会出现结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液；goodgoodgood1. 1. 1. 浓缩洗涤液低温情况下可能会出现结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液；浓缩洗涤液浓缩洗涤液浓缩洗涤液浓缩洗涤液 低温低温低温情况情况情况下可能下可能下可能会出现会出现会出现结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液；结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液；结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液；good2. 严禁混用不同批号试剂盒的组分；goodgoodgood2. 2. 2. 严禁混用不同批号试剂盒的组分；严禁混用不同批号试剂盒的组分；严禁混用不同批号试剂盒的组分；严禁混用不同批号试剂盒的组分；good3. 加样过程请避免产生气泡，实验操作过程中一定要保证试剂充分混匀，否则会使结果产生较大误差；goodgoodgood3. 3. 3. 加样过程请避免产生气泡，实验操作过程中一定要保证试剂充分混匀，否则会使结果产生较大误差；加样过程请加样过程请加样过程请避免避免避免产生气泡，实验操作过程中一定要保证试剂充分混匀产生气泡，实验操作过程中一定要保证试剂充分混匀产生气泡，实验操作过程中一定要保证试剂充分混匀，否则会使结果产生较大误差；，否则会使结果产生较大误差；，否则会使结果产生较大误差；good4. 说明书中提到的室温条件，请严格控制在25~28℃；goodgoodgood4. 4. 4. 说明书中提到的室温条件，请严格控制在25~28℃；说明书中提到的室温条件，说明书中提到的室温条件说明书中提到的室温条件，请严格控制在25~28请严格控制在25~28℃；℃；；good5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；goodgoodgood5. 5. 5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；good6. 本产品仅限科研使用。goodgoodgood6. 6. 6. 本产品仅限科研使用。本产品仅限科研使用。本产品仅限科研使用。本产品仅限科研使用。