产品类别：脾脏淋巴细胞的分离

产品编号：LTS10965PK

产品名称：兔脾脏淋巴细胞分离液试剂盒

产品规格：200ml/KIT

产品价格：￥550元

本品用于分离兔脾脏淋巴细胞



“XXXX”“XXXX”动物脾脏组织淋巴细胞分离液实验方法动物脾脏组织淋巴细胞分离液实验方法


技术文档编号：技术文档编号：TBD0019SOP

【产品规格】【产品规格】

200ml/Kit

【产品组成】【产品组成】

为方便广大用户使用，试剂内容如下：

	名称	产品编号	规格
A	XXXX 动物脾脏组织淋巴细胞分离液		200ml
B	样本稀释液（赠品）	2010C1119	200ml
C	清洗液（赠品）	2010X1118	200ml
D	F 液（赠品）	F2013TBD	200ml
E	说明书		1 份

名称产品编号规格AXXXX 动物脾脏组织淋巴细胞分离液200mlB样本稀释液（赠品）2010C1119200mlC清洗液（赠品）2010X1118200mlDF 液（赠品）F2013TBD200mlE说明书1 份名称产品编号规格名称名称名称产品编号产品编号产品编号规格规格规格AXXXX 动物脾脏组织淋巴细胞分离液200mlAAAXXXX 动物脾脏组织淋巴细胞分离液XXXX 动物脾脏组织淋巴细胞分离液200ml200mlB样本稀释液（赠品）2010C1119200mlBBB样本稀释液（赠品）样本稀释液（赠品）2010C11192010C1119200ml200mlC清洗液（赠品）2010X1118200mlCCC清洗液（赠品）清洗液（赠品）2010X11182010X1118200ml200mlDF 液（赠品）F2013TBD200mlDDDF 液（赠品）F 液（赠品）F2013TBDF2013TBD200ml200mlE说明书1 份EEE说明书说明书1 份1 份
【实验前准备】【实验前准备】

适用仪器：最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机

【检验方法】【检验方法】

全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。

• 首先制备脾脏组织单细胞悬液，制备方法详见“脾脏组织单细胞悬液制备技术”。

首先制备脾脏组织单细胞悬液，制备方法详见“脾脏组织单细胞悬液制备技术”。

首先制备脾脏组织单细胞悬液，制备方法详见“脾脏组织单细胞悬液制备技术”。

• 取一支 15ml 离心管，加入与脾脏组织单细胞悬液等量的分离液（注：分离液最少不得少于 3ml）。
• 用吸管小心吸取脾脏组织单细胞悬液加于分离液液面上，400-500g，离心 20-30min。（注：根据脾脏组织单细胞悬液量确定离心条件，脾脏组织单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。

取一支 15ml 离心管，加入与脾脏组织单细胞悬液等量的分离液（注：分离液最少不得少于 3ml）。

取一支 15ml 离心管，加入与脾脏组织单细胞悬液等量的分离液（注：分离液最少不得少于 3ml）。

用吸管小心吸取脾脏组织单细胞悬液加于分离液液面上，400-500g，离心 20-30min。（注：根据脾脏组织单细胞悬液量确定离心条件，脾脏组织单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。

用吸管小心吸取脾脏组织单细胞悬液加于分离液液面上，400-500g，离心 20-30min。（注：根据脾脏组织单细胞悬液量确定离心条件，脾脏组织单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。

• 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为稀释液层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为稀释液层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为稀释液层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

• 用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一 15ml 离心管中，向离心管中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。
• 250g，离心 10min。

用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一 15ml 离心管中，向离心管中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。

用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一 15ml 离心管中，向离心管中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。

250g，离心 10min。

250g，离心 10min。

• 弃上清。

弃上清。

弃上清。

• 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

• 250g，离心 10min。

250g，离心 10min。

250g，离心 10min。

• 重复 7、8、9，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。

重复 7、8、9，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。

重复 7、8、9，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。 
分离图例：分离图例：



【注意事项】【注意事项】

• 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最好在取样 2h 内进行实验，样品存放时间越长，细胞分离效果越差。样品放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。

全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最好在取样 2h 内进行实验，样品存放时间越长，细胞分离效果越差。样品放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。

全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最好在取样 2h 内进行实验，样品存放时间越长，细胞分离效果越差。样品放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。

• 本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。

本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。

本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。

• 吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。

吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。

吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。

• 分离液用量大于脾脏组织单细胞悬液样本时，分离效果更佳。

分离液用量大于脾脏组织单细胞悬液样本时，分离效果更佳。

分离液用量大于脾脏组织单细胞悬液样本时，分离效果更佳。

• 如实验后细胞得率或活性过低，请联系研谨生物技术以寻求帮助。

如实验后细胞得率或活性过低，请联系研谨生物技术以寻求帮助。

如实验后细胞得率或活性过低，请联系研谨生物技术以寻求帮助。 
【储存条件及有效期】【储存条件及有效期】

常温保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
【参考值（参考范围）】【参考值（参考范围）】

本实验淋巴细胞提取率及纯度均大于 80%。

下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。

	红细胞		白细胞			血小板
		（4.0-10.0）×109
含量（个/L）	（4.0-5.5）×1012	中性粒细胞	淋巴细胞		单核细胞	（1.0-3.0）×1011
		50%-70%	20%-40%		3%-8%

红细胞白细胞血小板（4.0-10.0）×10⁹含量（个/L）（4.0-5.5）×10¹²中性粒细胞淋巴细胞单核细胞（1.0-3.0）×10¹¹50%-70%20%-40%3%-8%红细胞白细胞血小板红细胞红细胞白细胞白细胞血小板血小板（4.0-10.0）×10⁹（4.0-10.0）×10⁹（4.0-10.0）×10⁹9含量（个/L）（4.0-5.5）×10¹²中性粒细胞淋巴细胞单核细胞（1.0-3.0）×10¹¹含量（个/L）含量（个/L）（4.0-5.5）×10¹²（4.0-5.5）×10¹²12中性粒细胞中性粒细胞淋巴细胞淋巴细胞单核细胞单核细胞（1.0-3.0）×10¹¹（1.0-3.0）×10¹¹1150%-70%20%-40%3%-8%50%-70%50%-70%20%-40%20%-40%3%-8%3%-8%
【相关实验技术方案】【相关实验技术方案】

• 脾脏组织单细胞悬液制备技术。

脾脏组织单细胞悬液制备技术。

脾脏组织单细胞悬液制备技术。

• 所获得淋巴细胞的培养技术。

所获得淋巴细胞的培养技术。

所获得淋巴细胞的培养技术。

• 所获得淋巴细胞的核酸提取技术。

所获得淋巴细胞的核酸提取技术。

所获得淋巴细胞的核酸提取技术。

• 所获得淋巴细胞的鉴定方法A.流式细胞技术B.免疫组化技术C.原位杂交技术D.PCR 技术

所获得淋巴细胞的鉴定方法A.流式细胞技术B.免疫组化技术C.原位杂交技术D.PCR 技术

所获得淋巴细胞的鉴定方法A.流式细胞技术B.免疫组化技术C.原位杂交技术D.PCR 技术 

【可能存在的问题及解决方法】【可能存在的问题及解决方法】

1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：

出现情况	出现原因	建议解决方案
离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层	转速过小或离心时间过短	适当增减转速
离心后目的细胞存在于分离液中	转速过大或离心时间过长
离心后白环层弥散	细胞密度过大	调整细胞密度
离心后白环层太浅或看不见	细胞密度过小

出现情况出现原因建议解决方案离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层转速过小或离心时间过短适当增减转速离心后目的细胞存在于分离液中转速过大或离心时间过长离心后白环层弥散细胞密度过大调整细胞密度离心后白环层太浅或看不见细胞密度过小出现情况出现原因建议解决方案出现情况出现情况出现原因出现原因建议解决方案建议解决方案离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层转速过小或离心时间过短适当增减转速离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层转速过小或离心时间过短转速过小或离心时间过短适当增减转速适当增减转速离心后目的细胞存在于分离液中转速过大或离心时间过长离心后目的细胞存在于分离液中离心后目的细胞存在于分离液中转速过大或离心时间过长转速过大或离心时间过长离心后白环层弥散细胞密度过大调整细胞密度离心后白环层弥散离心后白环层弥散细胞密度过大细胞密度过大调整细胞密度调整细胞密度离心后白环层太浅或看不见细胞密度过小离心后白环层太浅或看不见离心后白环层太浅或看不见细胞密度过小细胞密度过小

• 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。

本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。

本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。

• 本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可

本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可

本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可 
能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。

注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以 50-100g 为基数，直至达到最佳分离效果，离心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。