人绒毛膜滋养层细胞(HVT)详细信息：人绒毛膜滋养层细胞(HVT)详细信息：人绒毛膜滋养层细胞(HVT)详细信息：人绒毛膜滋养层细胞(HVT)人绒毛膜滋养层细胞(HVT)人绒毛膜滋养层细胞(HVT)人绒毛膜滋养层细胞(HVT)人绒毛膜滋养层细胞(HVT)人绒毛膜滋养层细胞(HVT)人绒毛膜滋养层细胞(HVT)人绒毛膜滋养层细胞(HVT)人绒毛膜滋养层细胞人绒毛膜滋养层细胞(HVT)详细信息：详细信息：详细信息：详细信息：详细信息：详细信息：详细信息：详细信息：详细信息：详细信息：
人绒毛膜滋养层细胞(HVT)细胞培养基本方法人绒毛膜滋养层细胞(HVT)细胞培养基本方法人绒毛膜滋养层细胞(HVT)人绒毛膜滋养层细胞(HVT)人绒毛膜滋养层细胞人绒毛膜滋养层细胞(HVT)细胞培养基本方法细胞培养基本方法细胞培养基本方法细胞培养基本方法细胞培养基本方法细胞培养基本方法细胞培养基本方法细胞培养基本方法细胞培养基本方法细胞培养基本方法细胞培养基本方法
（1）准备和安装过滤器

清洗好过滤器，干燥，放入一张孔径0.22μm的微孔滤膜，用布包装好，15磅20 min进行高压灭菌处理。在超净台内打开过滤器架好，胶管一端接入滤泵再插入待除菌的液体中，出口端胶管深入到已消毒好的瓶子中。用泵过滤，过滤后要检查滤膜是否完好无损。

(二)小牛血清的处理 
市场上出售的小牛血清一般做了灭菌处理，但在使用前还应做热灭活处理，即通过加热的方法破坏补体(近来也有观点认为热灭活处理是不必要的)。胎牛血清不必灭活。

1、将血清加热至56℃并保持30 min，其间要不时轻轻晃动，使受热均匀，防止沉淀析出。

2、处理后的血清贮存于4℃。

3、小牛血清在使用前最好进行筛选以掌握血清的质量。

(三)生长培养基的配制 

　除无血清培养之外，各种合成培养基在使用前需加入一定量的小牛血清或胎牛血清和抗菌素。（1）准备和安装过滤器

清洗好过滤器，干燥，放入一张孔径0.22μm的微孔滤膜，用布包装好，15磅20 min进行高压灭菌处理。在超净台内打开过滤器架好，胶管一端接入滤泵再插入待除菌的液体中，出口端胶管深入到已消毒好的瓶子中。用泵过滤，过滤后要检查滤膜是否完好无损。

(二)小牛血清的处理 
市场上出售的小牛血清一般做了灭菌处理，但在使用前还应做热灭活处理，即通过加热的方法破坏补体(近来也有观点认为热灭活处理是不必要的)。胎牛血清不必灭活。

1、将血清加热至56℃并保持30 min，其间要不时轻轻晃动，使受热均匀，防止沉淀析出。

2、处理后的血清贮存于4℃。

3、小牛血清在使用前最好进行筛选以掌握血清的质量。

(三)生长培养基的配制 

　除无血清培养之外，各种合成培养基在使用前需加入一定量的小牛血清或胎牛血清和抗菌素。（1）准备和安装过滤器（1）准备和安装过滤器（1）准备和安装过滤器（1）准备和安装过滤器（1）准备和安装过滤器（1）准备和安装过滤器（1）准备和安装过滤器（1）准备和安装过滤器（1）准备和安装过滤器（（1）准备和安装过滤器

清洗好过滤器，干燥，放入一张孔径0.22μm的微孔滤膜，用布包装好，15磅20 min进行高压灭菌处理。在超净台内打开过滤器架好，胶管一端接入滤泵再插入待除菌的液体中，出口端胶管深入到已消毒好的瓶子中。用泵过滤，过滤后要检查滤膜是否完好无损。清洗好过滤器，干燥，放入一张孔径0.22μm的微孔滤膜，用布包装好，15磅20 min进行高压灭菌处理。在超净台内打开过滤器架好，胶管一端接入滤泵再插入待除菌的液体中，出口端胶管深入到已消毒好的瓶子中。用泵过滤，过滤后要检查滤膜是否完好无损。清洗好过滤器，干燥，放入一张孔径清洗好过滤器，干燥，放入一张孔径0.22μμmm的微孔滤膜，用布包装好，的微孔滤膜，用布包装好，1515磅磅20 min20 min进行高压灭菌处理。进行高压灭菌处理。在超净台内打开过滤器架好，胶管一端接入滤泵再插入待除菌的液体中，出口端胶管深入到已消毒好的瓶子中。用泵过滤，过滤后要检查滤膜是否完好无损。在超净台内打开过滤器架好，胶管一端接入滤泵再插入待除菌的液体中，出口端胶管深入到已消毒好的瓶子中。用泵过滤，过滤后要检查滤膜是否完好无损。 

(二)小牛血清的处理 (二)小牛血清的处理 (二)小牛血清的处理 (二)小牛血清的处理 (二)小牛血清的处理 (二)小牛血清的处理 (二)小牛血清的处理 (二)小牛血清的处理 (二)小牛血清的处理 (二)小牛血清的处理 
市场上出售的小牛血清一般做了灭菌处理，但在使用前还应做热灭活处理，即通过加热的方法破坏补体(近来也有观点认为热灭活处理是不必要的)。胎牛血清不必灭活。市场上出售的小牛血清一般做了灭菌处理，但在使用前还应做热灭活处理，即通过加热的方法破坏补体(近来也有观点认为热灭活处理是不必要的)。胎牛血清不必灭活。市场上出售的小牛血清一般做了灭菌处理，但在使用前还应做热灭活处理，即通过加热的方法破坏补体市场上出售的小牛血清一般做了灭菌处理，但在使用前还应做热灭活处理，即通过加热的方法破坏补体(近来也有观点认为热灭活处理是不必要的近来也有观点认为热灭活处理是不必要的))。胎牛血清不必灭活。。胎牛血清不必灭活。

1、将血清加热至56℃并保持30 min，其间要不时轻轻晃动，使受热均匀，防止沉淀析出。1、将血清加热至56℃并保持30 min，其间要不时轻轻晃动，使受热均匀，防止沉淀析出。1、、将血清加热至将血清加热至5656℃并保持℃并保持30 min30 min，其间要不时轻轻晃动，使受热均匀，防止沉淀析出。，其间要不时轻轻晃动，使受热均匀，防止沉淀析出。

2、处理后的血清贮存于4℃。2、处理后的血清贮存于4℃。2、、处理后的血清贮存于处理后的血清贮存于44℃。℃。

3、小牛血清在使用前最好进行筛选以掌握血清的质量。3、小牛血清在使用前最好进行筛选以掌握血清的质量。3、、小牛血清在使用前最好进行筛选以掌握血清的质量。小牛血清在使用前最好进行筛选以掌握血清的质量。 

(三)生长培养基的配制 (三)生长培养基的配制 (三)生长培养基的配制 (三)生长培养基的配制 (三)生长培养基的配制 (三)生长培养基的配制 (三)生长培养基的配制 (三)生长培养基的配制 (三)生长培养基的配制 (三)生长培养基的配制 

　除无血清培养之外，各种合成培养基在使用前需加入一定量的小牛血清或胎牛血清和抗菌素。　除无血清培养之外，各种合成培养基在使用前需加入一定量的小牛血清或胎牛血清和抗菌素。　除无血清培养之外，各种合成培养基在使用前需加入一定量的小牛血清或胎牛血清和抗菌素。　除无血清培养之外，各种合成培养基在使用前需加入一定量的小牛血清或胎牛血清和抗菌素。
培养基分装成小瓶(100～200 mL)以便使用，翻帽塞塞紧瓶口。培养基分装成小瓶(100～200 mL)以便使用，翻帽塞塞紧瓶口。培养基分装成小瓶(100～200 mL)以便使用，翻帽塞塞紧瓶口。培养基分装成小瓶(100～200 mL)以便使用，翻帽塞塞紧瓶口。培养基分装成小瓶培养基分装成小瓶(100～～200 mL)200 mL)以便使用，翻帽塞塞紧瓶口。以便使用，翻帽塞塞紧瓶口。
按如下比例配制：基本培养基占80％~90％，小牛血清或胎牛血清占10％~20％。按1％体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U／mL和100 μ／mL，。按如下比例配制：基本培养基占80％~90％，小牛血清或胎牛血清占10％~20％。按1％体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U／mL和100 μ／mL，。按如下比例配制：基本培养基占80％~90％，小牛血清或胎牛血清占10％~20％。按1％体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U／mL和100 μ／mL，。按如下比例配制：基本培养基占80％~90％，小牛血清或胎牛血清占10％~20％。按1％体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U／mL和100 μ／mL，。按如下比例配制：按如下比例配制： 基本培养基占基本培养基占8080％％~90~90％，小牛血清或胎牛血清占％，小牛血清或胎牛血清占1010％％~20~20％。％。按按11％体积分数加入双抗贮存液％体积分数加入双抗贮存液((青霉素青霉素++链霉素链霉素))，使青霉素和链霉素的终浓度分别为，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U100 U／／mLmL和和100 100 μ／μ／mLmL，。，。
(四)冻存细胞的复苏(四)冻存细胞的复苏(四)冻存细胞的复苏(四)冻存细胞的复苏(四)冻存细胞的复苏(四)冻存细胞的复苏(四)冻存细胞的复苏(四)冻存细胞的复苏(四)冻存细胞的复苏(四)冻存细胞的复苏(四)冻存细胞的复苏(四)冻存细胞的复苏
应遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至37-37。5度，取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸至水面以下不断摇动至融化。应遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至37-37。5度，取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸至水面以下不断摇动至融化。应遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至37-37。5度，取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸至水面以下不断摇动至融化。应遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至37-37。5度，取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸至水面以下不断摇动至融化。应遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至应遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至37-37。。55度，取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸至水面以下不断摇动至融化。度，取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸至水面以下不断摇动至融化。
在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内，约5ml左右，然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞，置培养并内轻轻摇晃，使细胞均匀后置培养箱内培养。在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内，约5ml左右，然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞，置培养并内轻轻摇晃，使细胞均匀后置培养箱内培养。在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内，约5ml左右，然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞，置培养并内轻轻摇晃，使细胞均匀后置培养箱内培养。在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内，约5ml左右，然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞，置培养并内轻轻摇晃，使细胞均匀后置培养箱内培养。在无菌台内将完全培养基加入在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内，约的小培养瓶内，约5ml5ml左右，然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞，置培养并内轻轻摇晃，使细胞均匀后置培养箱内培养。左右，然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞，置培养并内轻轻摇晃，使细胞均匀后置培养箱内培养。
(五)传代:(五)传代:(五)传代:(五)传代:(五)传代:(五)传代:(五)传代:(五)传代:(五)传代:(五)传代:(五)传代:(五)传代:
贴壁细胞:贴壁细胞:贴壁细胞:贴壁细胞:贴壁细胞贴壁细胞:
对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml完全培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入完全培养基后继续培养或实验。对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml完全培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入完全培养基后继续培养或实验。对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml完全培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入完全培养基后继续培养或实验。对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml完全培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入完全培养基后继续培养或实验。对于贴壁细胞应先吸对于贴壁细胞应先吸(倒倒))尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBSPBS洗洗11－－33次）。次）。50ml50ml培养瓶加入消化液约培养瓶加入消化液约1-3ml1-3ml，按此比例进行消化，，按此比例进行消化，((根据经验根据经验))，晃动使消化液铺均匀置，晃动使消化液铺均匀置3737度培养箱约度培养箱约2-52-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml2-3ml完全培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入完全培养基后继续培养或实验。完全培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入完全培养基后继续培养或实验。

悬浮细胞:悬浮细胞:悬浮细胞:悬浮细胞:悬浮细胞悬浮细胞:
一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。

(六)冻存 

将贴壁细胞消化后离心收集，悬浮细胞直接离心收集，以完全培养基或胎牛血清重悬细胞至终浓度约106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分装至冻存管中。用绝热材料包裹置-70摄氏度冰箱冷冻过夜。次日保存到液氮中。

(七)注意事项
1.玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上;

2.无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净，紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上;

3.培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内，用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天，肉眼见无浑浊或沉淀等异物。分装后置4度保存;

4.消化液(pH7.8)或其它加入液，应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌，分装成支置-20度保存;

5.培养箱应先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外线的应照射1小时以上，如有高温灭菌的应按程序来菌)。至少每月一次。

6.进入操作时应注意先清洗双手及手腕，然后用75%酒精擦拭，操作时注意无菌台内空间层次。手及物品不要在暴露的瓶口上方来往，如果数量较多，培养瓶应放在与酒精灯平行地方便于操作，瓶与瓶之间应相隔一定的距离，开瓶(盖)时应先用75%酒精反复擦拭或用灯烧，打开后应用灯先烧口，然后烧盖。用完后同样操作。整个操作过程尽量在无菌台靠里面一点。一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。

(六)冻存 

将贴壁细胞消化后离心收集，悬浮细胞直接离心收集，以完全培养基或胎牛血清重悬细胞至终浓度约106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分装至冻存管中。用绝热材料包裹置-70摄氏度冰箱冷冻过夜。次日保存到液氮中。

(七)注意事项
1.玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上;

2.无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净，紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上;

3.培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内，用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天，肉眼见无浑浊或沉淀等异物。分装后置4度保存;

4.消化液(pH7.8)或其它加入液，应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌，分装成支置-20度保存;

5.培养箱应先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外线的应照射1小时以上，如有高温灭菌的应按程序来菌)。至少每月一次。

6.进入操作时应注意先清洗双手及手腕，然后用75%酒精擦拭，操作时注意无菌台内空间层次。手及物品不要在暴露的瓶口上方来往，如果数量较多，培养瓶应放在与酒精灯平行地方便于操作，瓶与瓶之间应相隔一定的距离，开瓶(盖)时应先用75%酒精反复擦拭或用灯烧，打开后应用灯先烧口，然后烧盖。用完后同样操作。整个操作过程尽量在无菌台靠里面一点。一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，，5min5min后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。

(六)冻存 (六)冻存 (六)冻存 (六)冻存 (六)冻存 (六)冻存 (六)冻存 (六)冻存 (六)冻存 (六)冻存 

将贴壁细胞消化后离心收集，悬浮细胞直接离心收集，以完全培养基或胎牛血清重悬细胞至终浓度约106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分装至冻存管中。用绝热材料包裹置-70摄氏度冰箱冷冻过夜。次日保存到液氮中。将贴壁细胞消化后离心收集，悬浮细胞直接离心收集，以完全培养基或胎牛血清重悬细胞至终浓度约106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分装至冻存管中。用绝热材料包裹置-70摄氏度冰箱冷冻过夜。次日保存到液氮中。将贴壁细胞消化后离心收集，悬浮细胞直接离心收集，以完全培养基或胎牛血清重悬细胞至终浓度约将贴壁细胞消化后离心收集，悬浮细胞直接离心收集，以完全培养基或胎牛血清重悬细胞至终浓度约106/ml106/ml。加入。加入10%10%的的DMSODMSO。以每管。以每管11～～2ml2ml分装至冻存管中。用绝热材料包裹置分装至冻存管中。用绝热材料包裹置-70-70摄氏度冰箱冷冻过夜。次日保存到液氮中。摄氏度冰箱冷冻过夜。次日保存到液氮中。 

(七)注意事项(七)注意事项(七)注意事项(七)注意事项(七)注意事项(七)注意事项(七)注意事项(七)注意事项(七)注意事项(七)注意事项
1.玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上;1.玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上;1.玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1):1)高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌1515分钟以上分钟以上;2);2)干烤消毒干烤消毒140140度度22小时以上小时以上;;

2.无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净，紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上;2.无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净，紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上;2.无菌工作台先清洗后用无菌工作台先清洗后用75%75%酒精擦拭干净，紫外线照射酒精擦拭干净，紫外线照射4040分钟以上分钟以上;;各种培养板照射各种培养板照射33小时以上小时以上;;

3.培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内，用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天，肉眼见无浑浊或沉淀等异物。分装后置4度保存;3.培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内，用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天，肉眼见无浑浊或沉淀等异物。分装后置4度保存;3.培养基培养基(pH7.2)(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验和血清配制好后要做无菌试验::将血清按将血清按10%10%加入培养基内，用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基加入培养基内，用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基5-10ml5-10ml置培养箱内培养置培养箱内培养2-32-3天，肉眼见无浑浊或沉淀等异物。分装后置天，肉眼见无浑浊或沉淀等异物。分装后置44度保存度保存;;

4.消化液(pH7.8)或其它加入液，应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌，分装成支置-20度保存;4.消化液(pH7.8)或其它加入液，应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌，分装成支置-20度保存;4.消化液消化液(pH7.8)(pH7.8)或其它加入液，应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌，分装成支置或其它加入液，应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌，分装成支置-20-20度保存度保存;;

5.培养箱应先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外线的应照射1小时以上，如有高温灭菌的应按程序来菌)。至少每月一次。5.培养箱应先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外线的应照射1小时以上，如有高温灭菌的应按程序来菌)。至少每月一次。5.培养箱应先用清水清洗后用培养箱应先用清水清洗后用75%75%酒精擦拭一遍酒精擦拭一遍((如有紫外线的应照射如有紫外线的应照射11小时以上，如有高温灭菌的应按程序来菌小时以上，如有高温灭菌的应按程序来菌))。至少每月一次。。至少每月一次。

6.进入操作时应注意先清洗双手及手腕，然后用75%酒精擦拭，操作时注意无菌台内空间层次。手及物品不要在暴露的瓶口上方来往，如果数量较多，培养瓶应放在与酒精灯平行地方便于操作，瓶与瓶之间应相隔一定的距离，开瓶(盖)时应先用75%酒精反复擦拭或用灯烧，打开后应用灯先烧口，然后烧盖。用完后同样操作。整个操作过程尽量在无菌台靠里面一点。6.进入操作时应注意先清洗双手及手腕，然后用75%酒精擦拭，操作时注意无菌台内空间层次。手及物品不要在暴露的瓶口上方来往，如果数量较多，培养瓶应放在与酒精灯平行地方便于操作，瓶与瓶之间应相隔一定的距离，开瓶(盖)时应先用75%酒精反复擦拭或用灯烧，打开后应用灯先烧口，然后烧盖。用完后同样操作。整个操作过程尽量在无菌台靠里面一点。6.进入操作时应注意先清洗双手及手腕，然后用进入操作时应注意先清洗双手及手腕，然后用75%75%酒精擦拭，操作时注意无菌台内空间层次。手及物品不要在暴露的瓶口上方来往，如果数量较多，培养瓶应放在与酒精灯平行地方便于操作，瓶与瓶之间应相隔一定的距离，开瓶酒精擦拭，操作时注意无菌台内空间层次。手及物品不要在暴露的瓶口上方来往，如果数量较多，培养瓶应放在与酒精灯平行地方便于操作，瓶与瓶之间应相隔一定的距离，开瓶((盖盖))时应先用时应先用75%75%酒精反复擦拭或用灯烧，打开后应用灯先烧口，然后烧盖。用完后同样操作。整个操作过程尽量在无菌台靠里面一点。酒精反复擦拭或用灯烧，打开后应用灯先烧口，然后烧盖。用完后同样操作。整个操作过程尽量在无菌台靠里面一点。
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P388D1	淋巴样瘤
NS-1	骨髓瘤
SP2/0	骨髓瘤
SRS-82	腹水瘤
P3-NS-1/1-Ag4.1	骨髓瘤
SAC-IIB2	腹水瘤
SAC-IIC3	腹水瘤
45.6.TG1.7	骨髓瘤
S180	腹水瘤
P3-X63-Ag8	骨髓瘤
B16	黑色素瘤
J774A.1	单核细胞－巨噬细胞
C127	乳腺肿瘤
RAW264.7	单核细胞－巨噬细胞
F9	胚胎瘤
NG108-15	小鼠神经细胞瘤×大鼠神经胶质细胞杂交细胞
C6	胶质瘤
RH－35	肝癌
SHZ－88	乳腺癌
CBRH－7919	肝癌
PC-12	肾上腺嗜铬细胞瘤
A431	表皮癌
QGY-7701	肝癌
A673	横纹肌癌
QGY-7703	肝癌
Tca-8113	舌鳞癌
SMMC-7721	肝癌
Acc-2	涎腺腺样囊性癌
786-O	肾透明细胞腺癌
Acc-3	涎腺腺样囊性癌
PC-3	前列腺癌
KB	口腔表皮样癌
人绒毛膜滋养层细胞(HVT) T-24	膀胱变移细胞癌

YAC-1淋巴瘤MFC前胃癌L1210淋巴白血病AtT20垂体瘤P388D1淋巴样瘤NS-1骨髓瘤SP2/0骨髓瘤SRS-82腹水瘤P3-NS-1/1-Ag4.1骨髓瘤SAC-IIB2腹水瘤SAC-IIC3腹水瘤45.6.TG1.7骨髓瘤S180腹水瘤P3-X63-Ag8骨髓瘤B16黑色素瘤J774A.1单核细胞－巨噬细胞C127乳腺肿瘤RAW264.7单核细胞－巨噬细胞F9胚胎瘤NG108-15小鼠神经细胞瘤×大鼠神经胶质细胞杂交细胞C6胶质瘤RH－35肝癌SHZ－88乳腺癌CBRH－7919肝癌PC-12肾上腺嗜铬细胞瘤A431表皮癌QGY-7701肝癌A673横纹肌癌QGY-7703肝癌Tca-8113舌鳞癌SMMC-7721肝癌Acc-2涎腺腺样囊性癌786-O肾透明细胞腺癌Acc-3涎腺腺样囊性癌PC-3前列腺癌KB口腔表皮样癌人绒毛膜滋养层细胞(HVT) T-24膀胱变移细胞癌YAC-1淋巴瘤YAC-1YAC-1淋巴瘤淋巴瘤MFC前胃癌MFCMFC前胃癌前胃癌L1210淋巴白血病L1210L1210淋巴白血病淋巴白血病AtT20垂体瘤AtT20AtT20垂体瘤垂体瘤P388D1淋巴样瘤P388D1P388D1淋巴样瘤淋巴样瘤NS-1骨髓瘤NS-1NS-1骨髓瘤骨髓瘤SP2/0骨髓瘤SP2/0SP2/0骨髓瘤骨髓瘤SRS-82腹水瘤SRS-82SRS-82腹水瘤腹水瘤P3-NS-1/1-Ag4.1骨髓瘤P3-NS-1/1-Ag4.1P3-NS-1/1-Ag4.1骨髓瘤骨髓瘤SAC-IIB2腹水瘤SAC-IIB2SAC-IIB2腹水瘤腹水瘤SAC-IIC3腹水瘤SAC-IIC3SAC-IIC3腹水瘤腹水瘤45.6.TG1.7骨髓瘤45.6.TG1.745.6.TG1.7骨髓瘤骨髓瘤S180腹水瘤S180S180腹水瘤腹水瘤P3-X63-Ag8骨髓瘤P3-X63-Ag8P3-X63-Ag8骨髓瘤骨髓瘤B16黑色素瘤B16B16黑色素瘤黑色素瘤J774A.1单核细胞－巨噬细胞J774A.1J774A.1单核细胞－巨噬细胞单核细胞－巨噬细胞C127乳腺肿瘤C127C127乳腺肿瘤乳腺肿瘤RAW264.7单核细胞－巨噬细胞RAW264.7RAW264.7单核细胞－巨噬细胞单核细胞－巨噬细胞F9胚胎瘤F9F9胚胎瘤胚胎瘤NG108-15小鼠神经细胞瘤×大鼠神经胶质细胞杂交细胞NG108-15NG108-15小鼠神经细胞瘤×大鼠神经胶质细胞杂交细胞小鼠神经细胞瘤×大鼠神经胶质细胞杂交细胞C6胶质瘤C6C6胶质瘤胶质瘤RH－35肝癌RH－35RH－35肝癌肝癌SHZ－88乳腺癌SHZ－88SHZ－88乳腺癌乳腺癌CBRH－7919肝癌CBRH－7919CBRH－7919肝癌肝癌PC-12肾上腺嗜铬细胞瘤PC-12PC-12肾上腺嗜铬细胞瘤肾上腺嗜铬细胞瘤A431表皮癌A431A431表皮癌表皮癌QGY-7701肝癌QGY-7701QGY-7701肝癌肝癌A673横纹肌癌A673A673横纹肌癌横纹肌癌QGY-7703肝癌QGY-7703QGY-7703肝癌肝癌Tca-8113舌鳞癌Tca-8113Tca-8113舌鳞癌舌鳞癌SMMC-7721肝癌SMMC-7721SMMC-7721肝癌肝癌Acc-2涎腺腺样囊性癌Acc-2Acc-2涎腺腺样囊性癌涎腺腺样囊性癌786-O肾透明细胞腺癌786-O786-O肾透明细胞腺癌肾透明细胞腺癌Acc-3涎腺腺样囊性癌Acc-3Acc-3涎腺腺样囊性癌涎腺腺样囊性癌PC-3前列腺癌PC-3PC-3前列腺癌前列腺癌KB口腔表皮样癌KBKB口腔表皮样癌口腔表皮样癌人绒毛膜滋养层细胞(HVT) T-24膀胱变移细胞癌人绒毛膜滋养层细胞(HVT) T-24人绒毛膜滋养层细胞(HVT) T-24膀胱变移细胞癌膀胱变移细胞癌