一、细胞特性一、细胞特性一、细胞特性一、细胞特性一、细胞特性

1. 细胞名称：PANC-1细胞（人胰腺癌细胞）
2. 形态：上皮型，贴壁生长
3. 含量：>1x10⁶ 个/瓶
4. 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5. 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

细胞名称：PANC-1细胞（人胰腺癌细胞）

细胞名称：PANC-1细胞（人胰腺癌细胞）细胞名称：PANC-1细胞名称：细胞名称：PANC-1PANC-1PANC-1细胞（人胰腺癌细胞）细胞（人胰腺癌细胞）细胞（人胰腺癌细胞）

形态：上皮型，贴壁生长

形态：上皮型，贴壁生长形态：上皮型，贴壁生长形态：上皮型形态：上皮型形态：上皮型，贴壁生长，贴壁生长

含量：>1x10⁶ 个/瓶

含量：>1x10⁶ 个/瓶含量：>1x10⁶ 个/瓶含量：含量：含量：>1x10⁶ >1x10⁶ 6 个个//瓶瓶

污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性污染：污染：污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

规格：T25瓶或者1mL冻存管包装规格：T25瓶或者1mL冻存管包装规格：规格：规格：T25T25瓶或者瓶或者1mL1mL冻存管包装冻存管包装
二、细胞接收后的处理：
1、贴壁细胞二、细胞接收后的处理：二、细胞接收后的处理：二、细胞接收后的处理：二、细胞接收后的处理：
1、贴壁细胞111、贴壁细胞、贴壁细胞、贴壁细胞

1. 收到T25方瓶细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们（冻存管细胞收到后直接37℃水浴复苏或直接放置于液氮中长期储存）。
2. 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3. 弃去T25瓶中的培养基，换用新鲜的完全培养基。
4. 如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。
5. 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

收到T25方瓶细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们（冻存管细胞收到后直接37℃水浴复苏或直接放置于液氮中长期储存）。

收到T25方瓶细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们（冻存管细胞收到后直接37℃水浴复苏或直接放置于液氮中长期储存）。收到T25方瓶细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们（冻存管细胞收到后直接37℃水浴复苏或直接放置于液氮中长期储存）。收到收到T25T25方瓶细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们（冻存管细胞收到后直接方瓶细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们（冻存管细胞收到后直接3737℃水浴复苏或直接放置于液氮中长期储存）。℃水浴复苏或直接放置于液氮中长期储存）。

请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25T25瓶置于瓶置于3737℃培养约℃培养约2-3h2-3h。。

弃去T25瓶中的培养基，换用新鲜的完全培养基。

弃去T25瓶中的培养基，换用新鲜的完全培养基。弃去T25瓶中的培养基，换用新鲜的完全培养基。弃去弃去T25T25瓶中的培养基，换用新鲜的完全培养基。瓶中的培养基，换用新鲜的完全培养基。

如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。

如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。如果细胞长满（如果细胞长满（90%90%以上）请及时进行细胞传代。以上）请及时进行细胞传代。

接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。2、悬浮细胞2、悬浮细胞222、悬浮细胞、悬浮细胞、悬浮细胞

1. 收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2. 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将15ml离心管置于37℃培养约2-3h。
3. 1200rpm离心5min，弃去15ml离心管中的培养基，细胞沉淀用新鲜的完全培养基重悬并培养。
4. 如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。
5. 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将15ml离心管置于37℃培养约2-3h。

请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将15ml离心管置于37℃培养约2-3h。请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将15ml离心管置于37℃培养约2-3h。请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将15ml15ml离心管置于离心管置于3737℃培养约℃培养约2-3h2-3h。。

1200rpm离心5min，弃去15ml离心管中的培养基，细胞沉淀用新鲜的完全培养基重悬并培养。

1200rpm离心5min，弃去15ml离心管中的培养基，细胞沉淀用新鲜的完全培养基重悬并培养。1200rpm离心5min，弃去15ml离心管中的培养基，细胞沉淀用新鲜的完全培养基重悬并培养。1200rpm1200rpm离心离心5min5min，弃去，弃去15ml15ml离心管中的培养基，细胞沉淀用新鲜的完全培养基重悬并培养。离心管中的培养基，细胞沉淀用新鲜的完全培养基重悬并培养。

如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。

如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。如果细胞长满（如果细胞长满（90%90%以上）请及时进行细胞传代。以上）请及时进行细胞传代。

接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
本公司的细胞培养操作规程，供参考
一、培养基及培养冻存条件准备：
本公司的细胞培养操作规程，供参考本公司的细胞培养操作规程，供参考本公司的细胞培养操作规程，供参考本公司的细胞培养操作规程，供参考
一、培养基及培养冻存条件准备：一、培养基及培养冻存条件准备：一、培养基及培养冻存条件准备：一、培养基及培养冻存条件准备：

1. 准备H-DMEM培养基，90%；优质胎牛血清，10%。
2. 培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3. 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

准备H-DMEM培养基，90%；优质胎牛血清，10%。

准备H-DMEM培养基，90%；优质胎牛血清，10%。准备准备H-DMEMH-DMEMH-DMEM培养基，培养基，培养基，90%90%90%；优质胎牛血清，；优质胎牛血清，；优质胎牛血清，10%10%10%。。。

培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。培养条件：培养条件： 气相：空气，气相：空气，95%95%；二氧化碳，；二氧化碳，5%5%。。 温度：温度：3737℃，培养箱湿度为℃，培养箱湿度为70%-80%70%-80%。。

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。冻存液：冻存液：90%90%血清，血清，10%DMSO10%DMSO，现用现配。液氮储存。，现用现配。液氮储存。二、细胞处理：二、细胞处理：二、细胞处理：二、细胞处理：二、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。1）复苏细胞：将含有1）复苏细胞：将含有1mL1mL细胞悬液的冻存管迅速放入细胞悬液的冻存管迅速放入3737℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL4mL培养基的培养基的15ml15ml离心管中混合均匀。在离心管中混合均匀。在1000RPM1000RPM条件下离心条件下离心44分钟，弃去上清液，加入分钟，弃去上清液，加入1mL1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。2）细胞传代：如果细胞密度达2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%80%-90%，即可进行传代培养。，即可进行传代培养。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化2-3分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。
3. 轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1200RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。
4. 移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。弃去培养上清，用不含钙、镁离子的弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBSPBS润洗细胞润洗细胞1-21-2次。次。

加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化2-3分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。

加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化2-3分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化2-3分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。加加2ml2ml消化液（消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于）于培养瓶中，置于3737℃培养箱中消化℃培养箱中消化2-32-3分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml3ml此细胞的培养基终止消化。此细胞的培养基终止消化。

轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1200RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。

轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1200RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1200RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。轻轻吹打后吸出，移入轻轻吹打后吸出，移入15ml15ml离心管中，在离心管中，在1200RPM1200RPM条件下离心条件下离心55分钟，弃去上清液，加入分钟，弃去上清液，加入1mL1mL培养液后吹匀。培养液后吹匀。

移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。

移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。移入到事先准备好的含有移入到事先准备好的含有5ml5ml培养基的培养基的T-25T-25培养瓶中或含有培养瓶中或含有14ml14ml培养基的培养基的T-75T-75培养瓶中培养。培养瓶中培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行，最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X10⁶个细胞冻存。

注意事项：
1. 收到冻存管细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
3. 细胞用途：仅供科研使用。

发货方式：
复苏后发货：我们复苏细胞后发货，货期一周左右，免运费。（气温较好建议复苏后发货）
冻存发货(干冰运输）：需额外增加干冰运费，选择干冰运输的我们发两管细胞，为了保证客户接种可靠性多发一管。（气温低于0℃须冻存发货）
细胞发货采取专业的运输包装，并选择最快捷的运输方式（顺丰速运或其他空运快递）
本公司细胞引种来源：ATCC、DSMZ、ECACC、武大细胞库、上海生化细胞所、中国科学院典型培养物保藏委员会等。

细胞培养常用试剂使用问答
1.谷氨酰胺使用方法是什么？
答：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中最好单独配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中。
2.碳酸氢钠在室温条件存放是否稳定？
答：碳酸氢钠白色粉末，或不透明单斜晶系细微结晶。比重2.159。无臭、味咸，可溶于水，微溶于乙醇。其水溶液因水解而呈微碱性，受热易分解，在65℃以上迅速分解，在270℃时完全失去二氧化碳，在干燥空气中无变化，在潮湿空气中缓慢分解。
3.培养细胞生长减慢的原因有哪些？其解决办法有哪些？
答：可能得原因有：更换了不同的培养液或血清；培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子等耗尽或缺乏或已被破坏；培养物中有少量细菌或真菌污染；试剂保存不当；比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验找出可能的原因。
解决办法：增加起始培养细胞浓度；让细胞逐渐适应新培养液；换入新鲜配制培养液；补加谷氨酰胺或生长因子等；用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物，或用抗生素除菌；血清需保存在-5℃到-20℃；培养液需在2－8℃避光保存；含血清完全培养液在2-8℃保存，并在2 周内用完；分离培养物，检测支原体。
4.L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？
答：L-谷氨酰胺在细胞培养时非常重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，降解率随保存温度而变。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。
5.细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？
答：不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37 oC 其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反复冲洗细胞培养瓶，以便于将含血清的培养基冲洗干净，这样就能大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液浓度为：
 (1)0.05％胰蛋白酶＋0.02％EDTA；
(2)0.25% 胰蛋白酶
多数细胞传代消化可使用0.25％胰蛋白酶＋0.02％EDTA这种消化液。
6.二价离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的是什么？
答：二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用EDTA清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。
7.GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？
答：GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽，是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解
8.Hank′s 平衡盐溶液(HBSS)和Earle′s平衡盐溶液(EBSS)有什么本质的功能差别？
答：HBSS和 EBSS的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagle′s (2.2g/L)中比在Hanks′ (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO₂平衡，以维持溶液的PH值。Eagle′s液在空气水平的CO₂ 中，溶液会变碱，Hanks′液在CO₂培养箱中会变酸。如果希望在CO₂培养箱中保存组织，需要用Eagle′s液。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks′液就可以了。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行，最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X10⁶个细胞冻存。33）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-31-3步骤进行，最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加步骤进行，最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSODMSO至最终浓度为至最终浓度为10%10%。加入。加入DMSODMSO后迅速混匀，按每后迅速混匀，按每1ml1ml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X10⁶1X10⁶6个细胞冻存。个细胞冻存。

注意事项：注意事项：注意事项：注意事项：
1. 收到冻存管细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。1. 1. 收到冻存管细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。收到冻存管细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。2. 2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
3. 细胞用途：仅供科研使用。3. 3. 3. 细胞用途：细胞用途：细胞用途：仅供科研使用。仅供科研使用。

发货方式：
复苏后发货：我们复苏细胞后发货，货期一周左右，免运费。（气温较好建议复苏后发货）
冻存发货(干冰运输）：需额外增加干冰运费，选择干冰运输的我们发两管细胞，为了保证客户接种可靠性多发一管。（气温低于0℃须冻存发货）
细胞发货采取专业的运输包装，并选择最快捷的运输方式（顺丰速运或其他空运快递）
本公司细胞引种来源：ATCC、DSMZ、ECACC、武大细胞库、上海生化细胞所、中国科学院典型培养物保藏委员会等。发货方式：发货方式：发货方式：
复苏后发货：我们复苏细胞后发货，货期一周左右，免运费。（气温较好建议复苏后发货）复苏后发货：我们复苏细胞后发货，货期一周左右，免运费。（气温较好建议复苏后发货）
冻存发货冻存发货((干冰运输）：需额外增加干冰运费，选择干冰运输的我们发两管细胞，为了保证客户接种可靠性多发一管。（气温低于干冰运输）：需额外增加干冰运费，选择干冰运输的我们发两管细胞，为了保证客户接种可靠性多发一管。（气温低于00℃须冻存发货）℃须冻存发货）
细胞发货采取专业的运输包装，并选择最快捷的运输方式（顺丰速运或其他空运快递）细胞发货采取专业的运输包装，并选择最快捷的运输方式（顺丰速运或其他空运快递）
本公司细胞引种来源：本公司细胞引种来源：ATCCATCCATCCATCC、DSMZ、ECACC、武大细胞库、上海生化细胞所、中国科学院典型培养物保藏委员会等。、DSMZ、ECACC、武大细胞库、上海生化细胞所、中国科学院典型培养物保藏委员会等。、DSMZ、ECACC、武大细胞库、上海生化细胞所、中国科学院典型培养物保藏委员会等。

细胞培养常用试剂使用问答
1.谷氨酰胺使用方法是什么？
答：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中最好单独配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中。
2.碳酸氢钠在室温条件存放是否稳定？
答：碳酸氢钠白色粉末，或不透明单斜晶系细微结晶。比重2.159。无臭、味咸，可溶于水，微溶于乙醇。其水溶液因水解而呈微碱性，受热易分解，在65℃以上迅速分解，在270℃时完全失去二氧化碳，在干燥空气中无变化，在潮湿空气中缓慢分解。
3.培养细胞生长减慢的原因有哪些？其解决办法有哪些？
答：可能得原因有：更换了不同的培养液或血清；培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子等耗尽或缺乏或已被破坏；培养物中有少量细菌或真菌污染；试剂保存不当；比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验找出可能的原因。
解决办法：增加起始培养细胞浓度；让细胞逐渐适应新培养液；换入新鲜配制培养液；补加谷氨酰胺或生长因子等；用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物，或用抗生素除菌；血清需保存在-5℃到-20℃；培养液需在2－8℃避光保存；含血清完全培养液在2-8℃保存，并在2 周内用完；分离培养物，检测支原体。
4.L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？
答：L-谷氨酰胺在细胞培养时非常重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，降解率随保存温度而变。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。
5.细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？
答：不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37 oC 其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反复冲洗细胞培养瓶，以便于将含血清的培养基冲洗干净，这样就能大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液浓度为：
 (1)0.05％胰蛋白酶＋0.02％EDTA；
(2)0.25% 胰蛋白酶
多数细胞传代消化可使用0.25％胰蛋白酶＋0.02％EDTA这种消化液。
6.二价离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的是什么？
答：二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用EDTA清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。
7.GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？
答：GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽，是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解
8.Hank′s 平衡盐溶液(HBSS)和Earle′s平衡盐溶液(EBSS)有什么本质的功能差别？细胞培养常用试剂使用问答细胞培养常用试剂使用问答细胞培养常用试剂使用问答
1.1.1.谷氨酰胺使用方法是什么？谷氨酰胺使用方法是什么？谷氨酰胺使用方法是什么？
答：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故答：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故44℃下放置℃下放置11周可分解周可分解50%50%，使用中最好单独配制，置，使用中最好单独配制，置-20-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中。℃冰箱中保存，用前加入培养液中。
2.2.2.碳酸氢钠在室温条件存放是否稳定？碳酸氢钠在室温条件存放是否稳定？碳酸氢钠在室温条件存放是否稳定？
答：碳酸氢钠白色粉末，或不透明单斜晶系细微结晶。比重答：碳酸氢钠白色粉末，或不透明单斜晶系细微结晶。比重2.1592.159。无臭、味咸，可溶于水，微溶于乙醇。其水溶液因水解而呈微碱性，受热易分解，在。无臭、味咸，可溶于水，微溶于乙醇。其水溶液因水解而呈微碱性，受热易分解，在6565℃以上迅速分解，在℃以上迅速分解，在270270℃时完全失去二氧化碳，在干燥空气中无变化，在潮湿空气中缓慢分解。℃时完全失去二氧化碳，在干燥空气中无变化，在潮湿空气中缓慢分解。
3.3.3.培养细胞生长减慢的原因有哪些？其解决办法有哪些？培养细胞生长减慢的原因有哪些？其解决办法有哪些？培养细胞生长减慢的原因有哪些？其解决办法有哪些？
答：可能得原因有：更换了不同的培养液或血清；培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子等耗尽或缺乏或已被破坏；培养物中有少量细菌或真菌污染；试剂保存不当；比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验找出可能的原因。答：可能得原因有：更换了不同的培养液或血清；培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子等耗尽或缺乏或已被破坏；培养物中有少量细菌或真菌污染；试剂保存不当；比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验找出可能的原因。
解决办法：增加起始培养细胞浓度；让细胞逐渐适应新培养液；换入新鲜配制培养液；补加谷氨酰胺或生长因子等；用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物，或用抗生素除菌；血清需保存在解决办法：增加起始培养细胞浓度；让细胞逐渐适应新培养液；换入新鲜配制培养液；补加谷氨酰胺或生长因子等；用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物，或用抗生素除菌；血清需保存在-5-5℃到℃到-20-20℃；培养液需在℃；培养液需在22－－88℃避光保存；含血清完全培养液在℃避光保存；含血清完全培养液在2-82-8℃保存，并在℃保存，并在2 2 周内用完；分离培养物，检测支原体。周内用完；分离培养物，检测支原体。
4.L-4.L-4.L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？
答：答：L-L-谷氨酰胺在细胞培养时非常重要的。脱掉氨基后，谷氨酰胺在细胞培养时非常重要的。脱掉氨基后，L-L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，降解率随保存温度而变。谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，降解率随保存温度而变。L-L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。
5.5.5.细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？
答：不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的答：不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pHpH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , pH 8.0 , 温度温度 37 oC 37 oC 其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要用其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要用D-HanksD-Hanks液或液或PBSPBS液反复冲洗细胞培养瓶，以便于将含血清的培养基冲洗干净，这样就能大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液浓度为：液反复冲洗细胞培养瓶，以便于将含血清的培养基冲洗干净，这样就能大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液浓度为：
 (1)0.05 (1)0.05％胰蛋白酶＋％胰蛋白酶＋0.020.02％％EDTAEDTA；；
(2)0.25% (2)0.25% 胰蛋白酶胰蛋白酶
多数细胞传代消化可使用多数细胞传代消化可使用0.250.25％胰蛋白酶＋％胰蛋白酶＋0.020.02％％EDTAEDTA这种消化液。这种消化液。
6.6.6.二价离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入二价离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入二价离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入EDTAEDTAEDTA的目的是什么？的目的是什么？的目的是什么？
答：二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。答：二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTAEDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用EDTAEDTA清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。
7.GlutaMAX-I7.GlutaMAX-I7.GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用是什么？培养细胞如何利用是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-IGlutaMAX-IGlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？？这个二肽有多稳定？？这个二肽有多稳定？
答：答：GlutaMAX-I GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽，是一个即谷丙氨酸二肽，是一个L-L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-alpha-氨基用氨基用L-L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-L-谷氨酰胺供利用。谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-IGlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在二肽非常稳定，即使在121121磅灭菌磅灭菌2020分钟，分钟，GlutaMAX-I GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L-L-谷氨酰胺几乎完全降解谷氨酰胺几乎完全降解
8.Hank8.Hank8.Hank′′′s s s 平衡盐溶液平衡盐溶液平衡盐溶液(HBSS)(HBSS)(HBSS)和和和EarleEarleEarle′′′sss平衡盐溶液平衡盐溶液平衡盐溶液(EBSS)(EBSS)(EBSS)有什么本质的功能差别？有什么本质的功能差别？有什么本质的功能差别？
答：HBSS和 EBSS的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagle′s (2.2g/L)中比在Hanks′ (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO₂平衡，以维持溶液的PH值。Eagle′s液在空气水平的CO₂ 中，溶液会变碱，Hanks′液在CO₂培养箱中会变酸。如果希望在CO₂培养箱中保存组织，需要用Eagle′s液。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks′液就可以了。答：答：HBSSHBSS和和 EBSS EBSS的主要差别在于碳酸氢钠的水平的主要差别在于碳酸氢钠的水平,,在在EagleEagle′′s (2.2g/L)s (2.2g/L)中比在中比在HanksHanks′′ (0.35g/L) (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的中高。碳酸氢钠需用高水平的CO₂CO₂2平衡，以维持溶液的平衡，以维持溶液的PHPH值。值。EagleEagle′′ss液在空气水平的液在空气水平的CO₂ CO₂ 2 中，溶液会变碱，中，溶液会变碱，HanksHanks′液在′液在CO₂CO₂2培养箱中会变酸。如果希望在培养箱中会变酸。如果希望在CO₂CO₂2培养箱中保存组织，需要用培养箱中保存组织，需要用EagleEagle′′ss液。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用液。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用HanksHanks′液就可以了。′液就可以了。

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