小鼠T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1酶联免疫吸附测定试剂盒
Mouse TIM-1(KIM-1) ELISA Kit
本产品冰袋运输；保存于4℃(其中 标准品 需保存于-20℃)，保质期6个月；标准品如存放于4℃，1~2周内有效。

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HJ19496次

产品特点小鼠T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1酶联免疫吸附测定试剂盒小鼠T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白小鼠T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白小鼠T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白小鼠T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白---1酶联免疫吸附测定试剂盒1酶联免疫吸附测定试剂盒1酶联免疫吸附测定试剂盒1酶联免疫吸附测定试剂盒
Mouse TIM-1(KIM-1) ELISA KitMouse TIM-1(KIM-1) ELISA KitMouse TIM-1(KIM-1) ELISA KitMouse TIM-1(KIM-1) ELISA KitMouse TIM-1(KIM-1) ELISA KitMouse TIM-1(KIM-1) ELISA Kit
本产品冰袋运输；保存于4℃(其中 标准品 需保存于-20℃)，保质期6个月；标准品如存放于4℃，1~2周内有效。本产品冰袋本产品冰袋本产品冰袋本产品冰袋运输；保存于运输；保存于运输；保存于运输；保存于4444℃℃℃℃((((其中 其中 其中 其中 标准品标准品标准品标准品标准品标准品 需保存于 需保存于 需保存于 需保存于-----20202020℃℃℃℃))))，保质期，保质期，保质期，保质期6666个月个月个月个月；；；；标准品标准品标准品标准品标准品标准品如存放于4如存放于4如存放于4如存放于4℃℃℃℃，1~2周内有效。，1~2周内有效。，1~2周内有效。，1~2周内有效。

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HJ19496次HJ194HJ194HJ194 9996次6次6次

产品特点产品特点产品特点产品特点产品特点
gdgd高灵敏度——多次重复结果表明，最小检出量为13.6 pg/mL；高灵敏度——多次重复结果表明，最小检出量为13.6 pg/mL；高灵敏度高灵敏度高灵敏度高灵敏度————————多次重复结果表明，最小检出量为13.多次重复结果表明，最小检出量为13.多次重复结果表明，最小检出量为13.6 pg/mL；6 pg/mL；6 pg/mL；
gdgd高特异性——与人TIM-1、TIM-4和小鼠TIM-1、TIM-4等均无交叉反应；高特异性——与人TIM-1、TIM-4和小鼠TIM-1、TIM-4等均无交叉反应；高特异性高特异性高特异性高特异性——与人TIM-1、TIM-4和小鼠TIM-1、TIM-4等均无交叉反应；——————与人TIM-1、TIM-4和小鼠TIM-1、TIM-4等均无交叉反应；与人TIM-1、TIM-4和小鼠TIM-1、TIM-4等均无交叉反应；
gdgd重复性好——板内，板间变异系数均小于10%。

产品简介
good本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中小鼠T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1(TIM-1)的浓度。小鼠TIM-1捕获抗体已经预包被于酶标板上，当加入样品或标准品时，其中的小鼠TIM-1会与捕获抗体结合，而其它游离成分则会通过洗涤被除去。接着，再加入生物素化的抗小鼠TIM-1抗体后，抗小鼠TIM-1抗体与小鼠TIM-1接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离成分则通过洗涤被除去。随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，这样亲合素上标记的HRP就与夹心的免疫复合物连接起来，而其它游离成分则通过洗涤被除去。最后加入显色剂，若样品中存在TIM-1，则会形成免疫复合物，其上连接的HRP会催化无色的显色剂氧化生成蓝色物质，而后加入终止液，最终产物呈黄色。通过酶标仪检测，读其450 nm处的OD值，小鼠TIM-1浓度与OD450值之间呈正比，通过标准品绘制标准曲线，对照未知样品中OD值，即可计算出样品中小鼠TIM-1浓度。

背景简介
goodT细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1(TIM-1)又被 称为肾损伤因子-1(KIM-1)或甲型肝炎病毒细胞受体1(HAVcr1)，其分子量约为70~80kDa，属于TIM分子免疫球蛋白超家族的Ⅰ型跨膜糖蛋白，参与Th1、Th2细胞介导的免疫调节。
goodTIM1能够诱导T细胞增殖，促进淋巴因子的产生。特别是可溶性TIM-1蛋白，在与受体结合后，通过激活磷酸化酪氨酸激酶的途径，诱导IL-4的产生，从而通过IL-4对B细胞、T细胞、肥大细胞、巨噬细胞和造血细胞进行免疫调节。

产品内容重复性好——板内，板间变异系数均小于10%。重复性好重复性好重复性好重复性好——板内，板间变异系数均小于10%。——————板内，板间变异系数均小于10%。板内，板间变异系数均小于10%。

产品简介产品简介产品简介产品简介产品简介
goodgoodgood本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中小鼠T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1(TIM-1)的浓度。小鼠TIM-1捕获抗体已经预包被于酶标板上，当加入样品或标准品时，其中的小鼠TIM-1会与捕获抗体结合，而其它游离成分则会通过洗涤被除去。接着，再加入生物素化的抗小鼠TIM-1抗体后，抗小鼠TIM-1抗体与小鼠TIM-1接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离成分则通过洗涤被除去。随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，这样亲合素上标记的HRP就与夹心的免疫复合物连接起来，而其它游离成分则通过洗涤被除去。最后加入显色剂，若样品中存在TIM-1，则会形成免疫复合物，其上连接的HRP会催化无色的显色剂氧化生成蓝色物质，而后加入终止液，最终产物呈黄色。通过酶标仪检测，读其450 nm处的OD值，小鼠TIM-1浓度与OD450值之间呈正比，通过标准品绘制标准曲线，对照未知样品中OD值，即可计算出样品中小鼠TIM-1浓度。本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中小鼠T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1(TIM-1)的浓度。小鼠TIM-1捕获抗体已经预包被于酶标板上，当加入样品或标准品时，其中的小鼠TIM-1会与捕获抗体结合，而其它游离成分则会通过洗涤被除去。接着，再加入生物素化的抗小鼠TIM-1抗体后，抗小鼠TIM-1抗体与小鼠TIM-1接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离成分则通过洗涤被除去。随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，这样亲合素上标记的HRP就与夹心的免疫复合物连接起来，而其它游离成分则通过洗涤被除去。最后加入显色剂，若样品中存在TIM-1，则会形成免疫复合物，其上连接的HRP会催化无色的显色剂氧化生成蓝色物质，而后加入终止液，最终产物呈黄色。通过酶标仪检测，读其450 nm处的OD值，小鼠TIM-1浓度与OD450值之间呈正比，通过标准品绘制标准曲线，对照未知样品中OD值，即可计算出样品中小鼠TIM-1浓度。本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中小鼠本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中小鼠本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中小鼠本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中小鼠T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1((((TIM-1TIM-1TIM-1TIM-1))))的浓度。的浓度。的浓度。的浓度。小鼠TIM-1小鼠TIM-1小鼠TIM-1小鼠TIM-1捕获抗体已经预包被于酶标板上，当加入样品或标准品时，其中的捕获抗体已经预包被于酶标板上，当加入样品或标准品时，其中的捕获抗体已经预包被于酶标板上，当加入样品或标准品时，其中的捕获抗体已经预包被于酶标板上，当加入样品或标准品时，其中的小鼠TIM-1小鼠TIM-1小鼠TIM-1小鼠TIM-1会与捕获抗体结合，而其它游离成分则会通过洗涤被除去。接着，再加入生物素化的抗会与捕获抗体结合，而其它游离成分则会通过洗涤被除去。接着，再加入生物素化的抗会与捕获抗体结合，而其它游离成分则会通过洗涤被除去。接着，再加入生物素化的抗会与捕获抗体结合，而其它游离成分则会通过洗涤被除去。接着，再加入生物素化的抗小鼠TIM-1小鼠TIM-1小鼠TIM-1小鼠TIM-1抗体后，抗抗体后，抗抗体后，抗抗体后，抗小鼠TIM-1小鼠TIM-1小鼠TIM-1小鼠TIM-1抗体与抗体与抗体与抗体与小鼠TIM-1小鼠TIM-1小鼠TIM-1小鼠TIM-1接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离成分则通过洗涤被除去。随后加入辣根过氧化物酶接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离成分则通过洗涤被除去。随后加入辣根过氧化物酶接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离成分则通过洗涤被除去。随后加入辣根过氧化物酶接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离成分则通过洗涤被除去。随后加入辣根过氧化物酶((((HRPHRPHRPHRP))))标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，这样亲合素上标记的HRP就与夹心的免疫复合物连接起来，而其它游离成分则通过洗涤被除去。最后加入显色剂，若样品中存在标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，这样亲合素上标记的HRP就与夹心的免疫复合物连接起来，而其它游离成分则通过洗涤被除去。最后加入显色剂，若样品中存在标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，这样亲合素上标记的HRP就与夹心的免疫复合物连接起来，而其它游离成分则通过洗涤被除去。最后加入显色剂，若样品中存在标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，这样亲合素上标记的HRP就与夹心的免疫复合物连接起来，而其它游离成分则通过洗涤被除去。最后加入显色剂，若样品中存在TIM-1TIM-1TIM-1TIM-1，则会形成免疫复合物，其上连接的HRP会催化无色的显色剂氧化生成蓝色物质，而后加入终止液，最终产物呈黄色。通过酶标仪检测，读其45，则会形成免疫复合物，其上连接的HRP会催化无色的显色剂氧化生成蓝色物质，而后加入终止液，最终产物呈黄色。通过酶标仪检测，读其45，则会形成免疫复合物，其上连接的HRP会催化无色的显色剂氧化生成蓝色物质，而后加入终止液，最终产物呈黄色。通过酶标仪检测，读其45，则会形成免疫复合物，其上连接的HRP会催化无色的显色剂氧化生成蓝色物质，而后加入终止液，最终产物呈黄色。通过酶标仪检测，读其450000 nm处的OD值， nm处的OD值， nm处的OD值， nm处的OD值，小鼠TIM-1小鼠TIM-1小鼠TIM-1小鼠TIM-1浓度与OD450值之间呈正比，通过标准品绘制标准曲线，对照未知样品中OD值，即可计算出样品中浓度与OD450值之间呈正比，通过标准品绘制标准曲线，对照未知样品中OD值，即可计算出样品中浓度与OD450值之间呈正比，通过标准品绘制标准曲线，对照未知样品中OD值，即可计算出样品中浓度与OD450值之间呈正比，通过标准品绘制标准曲线，对照未知样品中OD值，即可计算出样品中小鼠TIM-1小鼠TIM-1小鼠TIM-1小鼠TIM-1浓度。浓度。浓度。浓度。

背景简介背景简介背景简介背景简介背景简介
goodgoodgoodT细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1(TIM-1)又被 称为肾损伤因子-1(KIM-1)或甲型肝炎病毒细胞受体1(HAVcr1)，其分子量约为70~80kDa，属于TIM分子免疫球蛋白超家族的Ⅰ型跨膜糖蛋白，参与Th1、Th2细胞介导的免疫调节。T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1(TIM-1)又被 称为肾损伤因子-1(KIM-1)或甲型肝炎病毒细胞受体1(HAVcr1)，其分子量约为70~80kDa，属于TIM分子免疫球蛋白超家族的Ⅰ型跨膜糖蛋白，参与Th1、Th2细胞介导的免疫调节。T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1(T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1(T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1(T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1(TIM-1TIM-1TIM-1TIM-1))))又被 又被 又被 又被 称为肾损伤因子-1称为肾损伤因子-1称为肾损伤因子-1称为肾损伤因子-1((((KIM-1KIM-1KIM-1KIM-1))))或或或或甲型肝炎病毒细胞受体1甲型肝炎病毒细胞受体1甲型肝炎病毒细胞受体1甲型肝炎病毒细胞受体1((((HAVcr1HAVcr1HAVcr1HAVcr1))))，其分子量约为70，其分子量约为70，其分子量约为70，其分子量约为70~~~~88880000 kDa，属于TIM分子免疫球蛋白超家族的kDa，属于TIM分子免疫球蛋白超家族的kDa，属于TIM分子免疫球蛋白超家族的kDa，属于TIM分子免疫球蛋白超家族的Ⅰ型跨膜糖蛋白，参与Th1、Th2细胞介导的免疫调节。Ⅰ型跨膜糖蛋白，参与Th1、Th2细胞介导的免疫调节。Ⅰ型跨膜糖蛋白，参与Th1、Th2细胞介导的免疫调节。Ⅰ型跨膜糖蛋白，参与Th1、Th2细胞介导的免疫调节。
goodgoodgoodTIM1能够诱导T细胞增殖，促进淋巴因子的产生。特别是可溶性TIM-1蛋白，在与受体结合后，通过激活磷酸化酪氨酸激酶的途径，诱导IL-4的产生，从而通过IL-4对B细胞、T细胞、肥大细胞、巨噬细胞和造血细胞进行免疫调节。TIM1能够诱导T细胞增殖，促进淋巴因子的产生。特别是可溶性TIM-1蛋白，在与受体结合后，通过激活磷酸化酪氨酸激酶的途径，诱导IL-4的产生，从而通过IL-4对B细胞、T细胞、肥大细胞、巨噬细胞和造血细胞进行免疫调节。TIM1能够诱导T细胞增殖，促进淋巴因子的产生。特别是可溶性TIM1能够诱导T细胞增殖，促进淋巴因子的产生。特别是可溶性TIM1能够诱导T细胞增殖，促进淋巴因子的产生。特别是可溶性TIM1能够诱导T细胞增殖，促进淋巴因子的产生。特别是可溶性TIM-1TIM-1TIM-1TIM-1蛋白蛋白蛋白蛋白，，，，在与受体结合后，通过激活磷酸化酪氨酸激酶的途径，诱导IL在与受体结合后，通过激活磷酸化酪氨酸激酶的途径，诱导IL在与受体结合后，通过激活磷酸化酪氨酸激酶的途径，诱导IL在与受体结合后，通过激活磷酸化酪氨酸激酶的途径，诱导IL----4的产生4的产生4的产生4的产生，，，，从而通过IL-4对B细胞、T细胞、肥大细胞、巨噬细胞和造从而通过IL-4对B细胞、T细胞、肥大细胞、巨噬细胞和造从而通过IL-4对B细胞、T细胞、肥大细胞、巨噬细胞和造从而通过IL-4对B细胞、T细胞、肥大细胞、巨噬细胞和造血细胞进行免疫调节。血细胞进行免疫调节。血细胞进行免疫调节。血细胞进行免疫调节。

产品内容产品内容产品内容产品内容产品内容

组分	体积或数量
小鼠TIM-1预包被板	12条
样品分析缓冲液	5mL
标准品稀释液(5×)	10mL
小鼠TIM-1标准品	≥2支(冻干)
小鼠TIM-1生物素化抗体	10mL
HRP标记的亲和素	10mL
浓缩洗涤液(20×)	30mL
显色剂TMB	10mL
终止液	5mL
封板胶纸	3张

组分体积或数量小鼠TIM-1预包被板12条样品分析缓冲液5mL标准品稀释液(5×)10mL小鼠TIM-1标准品≥2支(冻干)小鼠TIM-1生物素化抗体10mLHRP标记的亲和素10mL浓缩洗涤液(20×)30mL显色剂TMB10mL终止液5mL封板胶纸3张组分体积或数量组分组分组分组分组分组分组分组分体积或数量体积或数量体积或数量体积或数量体积或数量体积或数量体积或数量体积或数量小鼠TIM-1预包被板12条小鼠TIM-1预包被板小鼠TIM-1预包被板小鼠TIM-1预包被板小鼠TIM-1预包被板小鼠TIM-1预包被板小鼠TIM-1预包被板小鼠TIM-1预包被板12条12条12条12条12条12条12条样品分析缓冲液5mL样品分析缓冲液样品分析缓冲液样品分析缓冲液样品分析缓冲液样品分析缓冲液样品分析缓冲液样品分析缓冲液5mL5mL5mL5mL555 mLmLmL标准品稀释液(5×)10mL标准品稀释液(5×)标准品稀释液(5×)标准品稀释液(5×)标准品稀释液(5×)标准品稀释液(标准品稀释液(标准品稀释液(555×)×)×)10mL10mL10mL10mL101010 mLmLmL小鼠TIM-1标准品≥2支(冻干)小鼠TIM-1标准品小鼠TIM-1标准品小鼠TIM-1标准品小鼠TIM-1标准品小鼠TIM-1标准品小鼠TIM-1标准品小鼠TIM-1标准品≥2支(冻干)≥2支(冻干)≥2支(冻干)≥2支(冻干)≥2≥2≥2支支支(((冻干)冻干)冻干)小鼠TIM-1生物素化抗体10mL小鼠TIM-1生物素化抗体小鼠TIM-1生物素化抗体小鼠TIM-1生物素化抗体小鼠TIM-1生物素化抗体小鼠TIM-1生物素化抗体小鼠TIM-1生物素化抗体小鼠TIM-1生物素化抗体10mL10mL10mL10mL101010 mLmLmLHRP标记的亲和素10mLHRP标记的亲和素HRP标记的亲和素HRP标记的亲和素HRP标记的亲和素HRP标记的亲和素HRP标记的亲和素HRP标记的亲和素10mL10mL10mL10mL101010 mLmLmL浓缩洗涤液(20×)30mL浓缩洗涤液(20×)浓缩洗涤液(20×)浓缩洗涤液(20×)浓缩洗涤液(20×)浓缩洗涤液(浓缩洗涤液(浓缩洗涤液(202020×)×)×)30mL30mL30mL30mL303030 mLmLmL显色剂TMB10mL显色剂TMB显色剂TMB显色剂TMB显色剂TMB显色剂TMB显色剂TMB显色剂TMB10mL10mL10mL10mL101010 mLmLmL终止液5mL终止液终止液终止液终止液终止液终止液终止液5mL5mL5mL5mL555 mLmLmL封板胶纸3张封板胶纸封板胶纸封板胶纸封板胶纸封板胶纸封板胶纸封板胶纸3张3张3张3张3张3张3张
操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤
goodgoodgoodgood◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ 样品制备
good◆gg1. 根据样品种类选择相应的处理方法：
good◆ 样1. 根A. 细胞上清：将细胞培养上清液100~500×g离心5min，去除悬浮物后即可；
good◆ 样1. 根B. 血清样品：将全血在室温下静置0.5~2 h，待其自然凝固并析出血清后，离心取黄色上清即可(4℃，1000~2000×g，10min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血清需置于冰上待用，请勿在其中添加任何防腐剂或抗凝剂；
good◆ 样1. 根C. 血浆样品：使用EDTA对全血进行抗凝处理后，混合均匀置于冰上，离心取黄色上清即可(4℃，1000~2000×g，10min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血浆需置于冰上待用；样品制备样品制备样品制备
good◆gggood◆gg1. 根据样品种类选择相应的处理方法：根据样品种类选择相应的处理方法：根据样品种类选择相应的处理方法：
good◆ 样1. 根good◆ 样1. 根A. 细胞上清：将细胞培养上清液100~500×g离心5min，去除悬浮物后即可；细胞上清：将细胞培养上清液100~500×细胞上清：将细胞培养上清液100~500×gggg离心5离心5 min，去除悬浮物后即可；min，去除悬浮物后即可；
good◆ 样1. 根good◆ 样1. 根B. 血清样品：将全血在室温下静置0.5~2 h，待其自然凝固并析出血清后，离心取黄色上清即可(4℃，1000~2000×g，10min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血清需置于冰上待用，请勿在其中添加任何防腐剂或抗凝剂；血清样品：将全血在室温下静置0.5~2 h，待其自然凝固血清样品：将全血在室温下静置0.5~2 h，待其自然凝固并析出血清并析出血清并析出血清后，离心取黄色上清即可(4℃，1000~2000×后，离心取黄色上清即可(4℃，1000~2000×gggg，10，10 min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血清需置于冰上待用，请勿在其中添加任何防腐剂或抗凝剂；min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血清需置于冰上待用，请勿在其中添加任何防腐剂或抗凝剂；
good◆ 样1. 根good◆ 样1. 根C. 血浆样品：使用EDTA对全血进行抗凝处理后，混合均匀置于冰上，离心取黄色上清即可(4℃，1000~2000×g，10min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血浆需置于冰上待用；血浆样品：使用EDTA对全血进行抗凝处理后，混合均匀置于冰上，离心取黄色上清即可(4℃，1000~2000×血浆样品：使用EDTA对全血进行抗凝处理后，混合均匀置于冰上，离心取黄色上清即可(4℃，1000~2000×gggg，10，10 min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血浆需置于冰上待用；min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血浆需置于冰上待用；注意：①小鼠血清或血浆样品请用样品分析缓冲液做倍比稀释后再检测；
注意：②若待测样品无法及时检测，样品制备完成后，请分装冻存于-20℃，避免反复冻融；
注意：③ 请保证待测样品清澈透明，检测前如发现样品中有悬浮物，需通过离心去除；
注意：④ 为了保证检测结果准确，请勿使用溶血、黄疸、高血脂或污染的样品。注意：①小鼠血清或血浆样品请用样品分析缓冲液做倍比稀释后再检测；
注意：②若待测样品无法及时检测，样品制备完成后，请分装冻存于-20℃，避免反复冻融；
注意：③ 请保证待测样品清澈透明，检测前如发现样品中有悬浮物，需通过离心去除；
注意：④ 为了保证检测结果准确，请勿使用溶血、黄疸、高血脂或污染的样品。注意：①注意：①注意：① 小鼠血清或血浆样品请用小鼠血清或血浆样品请用小鼠血清或血浆样品请用 样品分析缓冲液样品分析缓冲液样品分析缓冲液样品分析缓冲液 做倍比稀释后再检测；做倍比稀释后再检测；做倍比稀释后再检测；
注意：注意：注意：②②② 若待测样品无法及时检测，样品制备完成后，请分装冻存于-20℃，避免反复冻融；若待测样品无法及时检测，样品制备完成后，请分装冻存于-20℃，避免反复冻融；若待测样品无法及时检测，样品制备完成后，请分装冻存于-20℃，避免反复冻融；
注意：注意：注意：③ 请保证待测样品清澈透明，检测前如发现样品中有悬浮物，需通过离心去除；③ 请保证待测样品清澈透明，检测前如发现样品中有悬浮物，需通过离心去除；③ 请保证待测样品清澈透明，检测前如发现样品中有悬浮物，需通过离心去除；
注意：注意：注意：④ 为了保证检测结果准确，请勿使用溶血、黄疸、高血脂或污染的样品。④ 为了保证检测结果准确，请勿使用溶血、黄疸、高血脂或污染的样品。④ 为了保证检测结果准确，请勿使用溶血、黄疸、高血脂或污染的样品。
goodgoodgoodgood◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ 检测准备工作检测准备工作检测准备工作检测准备工作检测准备工作
good◆gg2. good◆gggood◆gg2. 试剂盒自冰箱取出后，请置于室温平衡20min；检测完成后，剩余试剂请及时置于4℃保存；试剂盒自冰箱取出后，请置于室温平衡20min；检测完成后，剩余试剂请及时置于4℃保存；试剂盒自冰箱取出后，请试剂盒自冰箱取出后，请试剂盒自冰箱取出后，请置置置于于于室温平衡2室温平衡2室温平衡2000 minminmin；检测；检测；检测完成完成完成后后后，，，剩余试剂请及时剩余试剂请及时剩余试剂请及时置置置于于于444℃保存；℃保存；℃保存；
good◆gg3. good◆gggood◆gg3. 将浓缩洗涤液(20×)用双蒸水或去离子水稀释为1×洗涤液；将浓缩洗涤液(20×)用双蒸水或去离子水稀释为1×洗涤液；将将将 浓缩洗涤液浓缩洗涤液浓缩洗涤液浓缩洗涤液((((20202020××××)))) 用双蒸水或去离子水稀释用双蒸水或去离子水稀释用双蒸水或去离子水稀释为为为111×洗涤液；×洗涤液；×洗涤液；
good◆gg4. good◆gggood◆gg4. 将标准品稀释液(5×)用双蒸水或去离子水稀释为1×标准品稀释液；将标准品稀释液(5×)用双蒸水或去离子水稀释为1×标准品稀释液；将将将 标准品稀释液标准品稀释液标准品稀释液标准品稀释液((((5555×)×)×)×) 用双蒸水或去离子水稀释用双蒸水或去离子水稀释用双蒸水或去离子水稀释为1为1为1×标准品稀释液；×标准品稀释液；×标准品稀释液；
good◆gg5. good◆gggood◆gg5. 按标准品标签上注明的复溶体积，用1×标准品稀释液复溶使标准品终浓度达到2,000 pg/mL，室温操作，请严格控制在25~28℃，静置15~20min后轻轻混悬，用移液器吸打数次，使其彻底溶解，然后按下表用1×标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。(最高浓度为2,000 pg/mL，将1×标准品稀释液作为浓度0 pg/mL。)按标准品标签上注明的复溶体积，用1×标准品稀释液复溶使标准品终浓度达到2,000 pg/mL，室温操作，请严格控制在25~28℃，静置15~20min后轻轻混悬，用移液器吸打数次，使其彻底溶解，然后按下表用1×标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。(最高浓度为2,000 pg/mL，将1×标准品稀释液作为浓度0 pg/mL。)按标准品标签上注明的复溶体积，用1×标准品稀释液复溶使标准品终浓度达到2,00按标准品标签上注明的复溶体积，用1×标准品稀释液复溶使标准品终浓度达到2,00按标准品标签上注明的复溶体积，用1×标准品稀释液复溶使标准品终浓度达到2,00000 pg pg pg///mL，室温操作，mL，室温操作，mL，室温操作，请严格控制在25~28请严格控制在25~28请严格控制在25~28请严格控制在25~28℃℃℃℃，静置15~2，静置15~2，静置15~2000 minminmin后轻轻混悬，用移液器吸打数次，使其彻底溶解，然后按下表用1后轻轻混悬，用移液器吸打数次，使其彻底溶解，然后按下表用1后轻轻混悬，用移液器吸打数次，使其彻底溶解，然后按下表用1×××标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。(((最高浓度为2,00最高浓度为2,00最高浓度为2,00000 pg pg pg///mL，将1mL，将1mL，将1×××标准品稀释液作为浓度标准品稀释液作为浓度标准品稀释液作为浓度000 pg pg pg/mL。)/mL。)/mL。)

管号	稀释液用量(μL)	复溶后标准品用量(μL)	标准品的最终浓度(pg/mL)
A	0	250	2,000
B	250	250	1,000
C	250	250(从B管中取)	500
D	250	250(从C管中取)	250
E	250	250(从D管中取)	125
F	250	250(从E管中取)	62.5
G	250	0	0

管号稀释液用量(μL)复溶后标准品用量(μL)标准品的最终浓度(pg/mL)A02502,000B2502501,000C250250(从B管中取)500D250250(从C管中取)250E250250(从D管中取)125F250250(从E管中取)62.5G25000管号稀释液用量(μL)复溶后标准品用量(μL)标准品的最终浓度(pg/mL)管号管号管号管号管号管号稀释液用量(μL)稀释液用量(μL)稀释液用量(μL)稀释液用量(μL)稀释液用量(μL)稀释液用量(μL)复溶后标准品用量(μL)复溶后标准品用量(μL)复溶后标准品用量(μL)复溶后标准品用量(μL)复溶后标准品用量(μL)复溶后标准品用量(μL)标准品的最终浓度(pg/mL)标准品的最终浓度(pg/mL)标准品的最终浓度(pg/mL)标准品的最终浓度(p标准品的最终浓度(p标准品的最终浓度(pggg///mL)mL)mL)A02502,000AAAAAA0000002502502502502502502,0002,0002,0002,0002,0002,000B2502501,000BBBBBB2502502502502502502502502502502502501,0001,0001,0001,0001,0001,000C250250(从B管中取)500CCCCCC250250250250250250250(从B管中取)250(从B管中取)250(从B管中取)252525000(((从B管中取)从B管中取)从B管中取)500500500500500500D250250(从C管中取)250DDDDDD250250250250250250250(从C管中取)250(从C管中取)250(从C管中取)252525000(((从从从CCC管中取)管中取)管中取)250250250250250250E250250(从D管中取)125EEEEEE250250250250250250250(从D管中取)250(从D管中取)250(从D管中取)252525000(((从从从DDD管中取)管中取)管中取)125125125125125125F250250(从E管中取)62.5FFFFFF250250250250250250250(从E管中取)250(从E管中取)250(从E管中取)252525000(((从从从EEE管中取)管中取)管中取)62.562.562.562.562.562.5G25000GGGGGG250250250250250250000000000000
注意：标准品复溶加样后，剩余部份请丢弃。注意：标准品复溶加样后，剩余部份请丢弃。注意：标准品复溶加样后，剩余部份请丢弃。注意：标准品复溶加样后，剩余部份请丢弃。注意：标准品复溶加样后，剩余部份请丢弃。
good◆ 检测流程
good◆gg6. 通过计算确定一次实验所需的板条数，取出所需板条放置于框架内，多余的板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃；goodgoodgood◆ ◆ ◆ ◆ ◆ 检测流程检测流程检测流程
good◆gggood◆gg6. 通过计算确定一次实验所需的板条数，取出所需板条放置于框架内，多余的板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃；通过计算确定一次实验所需的板条数，取出所需板条放置于框架内，多余的板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃；通过计算确定一次实验所需的板条数，取出所需板条放置于框架内，多余的板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃；注意：①标准品和样品建议做双复孔检测；
注意：② 建议设置本底较正孔，即空白孔，只加入相应体积的 显色剂TMB 和 终止液 即可；
注意：③ 每次实验均需绘制标准曲线。
good◆gg7. 将样品和不同浓度标准品(100μL/孔)分别加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育120min。细胞上清样品一般可直接进行检测，如超过试剂盒的检测范围，可用1×标准品稀释液进行相应稀释；对于血清或血浆样品，目标蛋白可能含量过低而检测不到，检测时请先在孔中加入50μL样品分析缓冲液，接着加入50μL样品，如超出检测范围，可先加入50μL样品分析缓冲液，接着加入50μL用1×标准品稀释液稀释后的样品，再进行检测；对于尿液样品，一般需要稀释1~10倍再进行检测，如无明确范围，建议从4倍开始稀释，请注意记录好样品的稀释倍数；
注意：① 请查阅相关文献确定样品中待检测蛋白的大致浓度，若其大于或小于本试剂盒的最高或最低标准品浓度，请将样品适当稀释或浓缩后再进行检测；
注意：②整个加样过程不宜超过10 min，否则可能会影响检测结果。
good◆gg8. 洗板5次，每孔1×洗涤液用量为300μL，注入与吸出间隔15~30s，洗完后将板倒扣在厚吸水纸上拍干；
注意：洗涤过程至关重要，洗涤不充分会导致结果产生较大误差。
good◆gg9. 加入小鼠TIM-1生物素化抗体(100μL/孔，无需稀释)。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育60min；
注意：检测血清和血浆样品时，检测抗体的孵育时间应适当延长。
good◆gg10. 洗板5次，方法同步骤8；
good◆gg11. 加入HRP标记的亲和素(100μL/孔，无需稀释)。用封板胶纸封住反应孔，避光室温孵育20min；
good◆gg12. 洗板5次，方法同步骤8；
good◆gg13. 加入显色剂TMB(100μL/孔)，避光室温孵育10~20min；
注意：在保存和使用时，请勿将TMB接触氧化剂和金属。
good◆gg14. 加入终止液(50μL/孔)，混匀后即刻使用酶标仪测量OD450，同时设定540nm或570nm作为校正波长，即可计算得到校正吸光度值(OD450－OD540或OD450－OD570)；
注意：读取OD值建议在10 min内完成。注意：①标准品和样品建议做双复孔检测；
注意：② 建议设置本底较正孔，即空白孔，只加入相应体积的 显色剂TMB 和 终止液 即可；
注意：③ 每次实验均需绘制标准曲线。注意：①注意：①注意：① 标准品和样品建议做双复孔检测；标准品和样品建议做双复孔检测；标准品和样品建议做双复孔检测；
注意：注意：注意：② 建议设置本底较正孔，即空白孔，只加入相应体积的 ② 建议设置本底较正孔，即空白孔，只加入相应体积的 ② 建议设置本底较正孔，即空白孔，只加入相应体积的 显色剂显色剂显色剂显色剂TMBTMBTMBTMB 和  和  和 终止液终止液终止液终止液 即可； 即可； 即可；
注意：注意：注意：③ 每次实验均需绘制标准曲线。③ 每次实验均需绘制标准曲线。③ 每次实验均需绘制标准曲线。
good◆gggood◆gg7. 将样品和不同浓度标准品(100将样品和不同浓度标准品(100将样品和不同浓度标准品(100μLμLμL///孔孔孔)))分别分别分别加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育121212000min。细胞上清样品一般可直接进行检测，如超过试剂盒的检测范围，可用1×标准品稀释液进行相应稀释；对于血清或血浆样品，目标蛋白可能含量过低而检测不到，检测时请先在孔中加入5min。细胞上清样品一般可直接进行检测，如超过试剂盒的检测范围，可用1×标准品稀释液进行相应稀释；对于血清或血浆样品，目标蛋白可能含量过低而检测不到，检测时请先在孔中加入5min。细胞上清样品一般可直接进行检测，如超过试剂盒的检测范围，可用1×标准品稀释液进行相应稀释；对于血清或血浆样品，目标蛋白可能含量过低而检测不到，检测时请先在孔中加入5000μLμLμL样品分析缓冲液样品分析缓冲液样品分析缓冲液，接着加入5，接着加入5，接着加入5000μLμLμL样品，如超出检测范围，可先加入5样品，如超出检测范围，可先加入5样品，如超出检测范围，可先加入5000μLμLμL样品分析缓冲液样品分析缓冲液样品分析缓冲液，接着加入5，接着加入5，接着加入5000μLμLμL用1用1用1×标准品稀释液稀释后的样品，再进行检测；对于尿液样品，一般需要稀释1~10倍再进行检测，如无明确范围，建议从4倍开始稀释，请注意记录好样品的稀释倍数；×标准品稀释液稀释后的样品，再进行检测；对于尿液样品，一般需要稀释1~10倍再进行检测，如无明确范围，建议从4倍开始稀释，请注意记录好样品的稀释倍数；×标准品稀释液稀释后的样品，再进行检测；对于尿液样品，一般需要稀释1~10倍再进行检测，如无明确范围，建议从4倍开始稀释，请注意记录好样品的稀释倍数；
注意：① 请查阅相关文献确定样品中待检测蛋白的大致浓度，若其大于或小于本试剂盒的最高或最低标准品浓度，请将样品适当稀释或浓缩后再进行检测；
注意：②整个加样过程不宜超过10 min，否则可能会影响检测结果。注意：① 请查阅相关文献确定样品中待检测蛋白的大致浓度，若其大于或小于本试剂盒的最高或最低标准品浓度，请将样品适当稀释或浓缩后再进行检测；注意：① 请查阅相关文献确定样品中待检测蛋白的大致浓度，若其大于或小于本试剂盒的最高或最低标准品浓度，请将样品适当稀释或浓缩后再进行检测；注意：① 请查阅相关文献确定样品中待检测蛋白的大致浓度，若其大于或小于本试剂盒的最高或最低标准品浓度，请将样品适当稀释或浓缩后再进行检测；
注意：注意：注意：②②② 整个加样过程不宜超过10 min，否则可能会影响检测结果。整个加样过程不宜超过10 min，否则可能会影响检测结果。整个加样过程不宜超过10 min，否则可能会影响检测结果。
good◆gggood◆gg8. 洗板5次，每孔1×洗涤液洗板5次，每孔1×洗涤液洗板5次，每孔1×洗涤液用量用量用量为30为30为30000μLμLμL，注入与吸出间隔15，注入与吸出间隔15，注入与吸出间隔15~~~333000sss，，，洗完后将板倒扣在厚吸水纸上拍干；洗完后将板倒扣在厚吸水纸上拍干；洗完后将板倒扣在厚吸水纸上拍干；
注意：洗涤过程至关重要，洗涤不充分会导致结果产生较大误差。注意：洗涤过程至关重要，洗涤不充分会导致结果产生较大误差。注意：洗涤过程至关重要，洗涤不充分会导致结果产生较大误差。注意：洗涤过程至关重要，洗涤不充分会导致结果产生较大误差。
good◆gggood◆gg9. 加入加入加入小鼠TIM-1小鼠TIM-1小鼠TIM-1生物素化抗体生物素化抗体生物素化抗体(((101010000μLμLμL///孔孔孔，，，无需稀释无需稀释无需稀释)))。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育6。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育6。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育6000min；min；min；
注意：检测血清和血浆样品时，检测抗体的孵育时间应适当延长。注意：检测血清和血浆样品时，检测抗体的孵育时间应适当延长。注意：检测血清和血浆样品时，检测抗体的孵育时间应适当延长。注意：检测血清和血浆样品时，检测抗体的孵育时间应适当延长。
good◆gggood◆gg10. 洗板5次，方法同步骤8；洗板5次，方法同步骤8；
good◆gggood◆gg11. 加入加入加入HRPHRPHRP标记的标记的标记的亲和素亲和素亲和素(((101010000μLμLμL///孔孔孔，，，无需稀释无需稀释无需稀释)))。用封板胶纸封住反应孔，避光室温孵育2。用封板胶纸封住反应孔，避光室温孵育2。用封板胶纸封住反应孔，避光室温孵育2000min；min；min；
good◆gggood◆gg12. 洗板5次，方法同步骤8；洗板5次，方法同步骤8；
good◆gggood◆gg13. 加入加入加入显色剂TMB显色剂TMB显色剂TMB(((101010000μLμLμL///孔孔孔)))，避光室温孵育，避光室温孵育，避光室温孵育10~10~10~222000min；min；min；
注意：在保存和使用时，请勿将TMB接触氧化剂和金属。注意：在保存和使用时，请勿将TMB接触氧化剂和金属。注意：在保存和使用时，请勿将TMB接触氧化剂和金属。注意：在保存和使用时，请勿将TMB接触氧化剂和金属。
good◆gggood◆gg14. 加入加入加入终止液终止液终止液(((555000μLμLμL///孔孔孔)))，，，混匀后即刻混匀后即刻混匀后即刻使用酶标仪使用酶标仪使用酶标仪测量OD450测量OD450测量OD450，，，同时同时同时设定54设定54设定54000nm或57nm或57nm或57000nm作为校正波长，nm作为校正波长，nm作为校正波长，即可计算得到校正吸光度值即可计算得到校正吸光度值即可计算得到校正吸光度值(((ODODOD450450450－－－OD540OD540OD540或或或ODODOD450450450－OD570)；－OD570)；－OD570)；
注意：读取OD值建议在10 min内完成。注意：读取OD值建议在10 min内完成。注意：读取OD值建议在10 min内完成。注意：读取OD值建议在10 min内完成。
good◆ 数据分析
good◆gg15. 绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，利用计算机软件作四参数逻辑(4-PL)曲线拟合创建标准曲线，通过样品的OD值即可在标准曲线上计算出其相应浓度。goodgoodgood◆ ◆ ◆ ◆ ◆ 数据分析数据分析数据分析
good◆gggood◆gg15. 绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，利用计算机软件作四参数逻辑(4-PL)曲线拟合创建标准曲线，通过样品的OD值即可在标准曲线上计算出其相应浓度。绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，利用计算机软件作四参数逻辑(4-PL)曲线拟合创建标准曲线，通过样品的OD值即可在标准曲线上计算出其相应浓度。绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，利用计算机软件作四参数逻辑(4-PL)曲线拟合创建标准曲线，通过样品的OD值即可在标准曲线上计算出其相应浓度。注意：①复孔OD值在20%的差异范围内结果才有效，复孔OD值取平均后可作为测量值；
注意：② 每个标准品或样品的OD值应减去本底校正孔的OD值；
注意：③ 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。注意：①复孔OD值在20%的差异范围内结果才有效，复孔OD值取平均后可作为测量值；
注意：② 每个标准品或样品的OD值应减去本底校正孔的OD值；
注意：③ 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。注意：①注意：①注意：① 复孔OD值在20%的差异范围内结果才有效，复孔OD值取平均后可作为测量值；复孔OD值在20%的差异范围内结果才有效，复孔OD值取平均后可作为测量值；复孔OD值在20%的差异范围内结果才有效，复孔OD值取平均后可作为测量值；
注意：注意：注意：② 每个标准品或样品的OD值应减去本底校正孔的OD值；② 每个标准品或样品的OD值应减去本底校正孔的OD值；② 每个标准品或样品的OD值应减去本底校正孔的OD值；
注意：注意：注意：③ 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。③ 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。③ 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
good◆ 标准曲线范例goodgoodgood◆ ◆ ◆ ◆ ◆ 标准曲线范例标准曲线范例标准曲线范例小鼠TIM-1(KIM-1)参考标准曲线小鼠TIM-1(KIM-1)参考标准曲线小鼠TIM-1(KIM-1)参考标准曲线小鼠小鼠小鼠TIM-1TIM-1TIM-1(((KIM-1KIM-1KIM-1)参考标准曲线)参考标准曲线)参考标准曲线


注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算样品含量。注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算样品含量。注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算样品含量。样品含量。样品含量。样品含量。
注意事项注意事项注意事项注意事项注意事项注意事项goodgood1. 浓缩洗涤液低温情况下可能会出现结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液；浓缩洗涤液低温情况下可能会出现结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液；浓缩洗涤液浓缩洗涤液浓缩洗涤液浓缩洗涤液浓缩洗涤液 低温低温低温低温情况情况情况情况下可能会出现结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液；下可能会出现结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液；下可能会出现结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液；下可能会出现结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液；goodgood2. 严禁混用不同批号试剂盒的组分；严禁混用不同批号试剂盒的组分；严禁混用不同批号试剂盒的组分；严禁混用不同批号试剂盒的组分；严禁混用不同批号试剂盒的组分；严禁混用不同批号试剂盒的组分；goodgood3. 加样过程请避免产生气泡，实验操作过程中一定要保证试剂充分混匀，否则会使结果产生较大误差；加样过程请避免产生气泡，实验操作过程中一定要保证试剂充分混匀，否则会使结果产生较大误差；加样过程请避免产生气泡，实验操作过程中一定要保证试剂充分混匀，否则会使结果产生较大误差；加样过程请避免产生气泡，实验操作过程中一定要保证试剂充分混匀，否则会使结果产生较大误差；加样过程请避免产生气泡，实验操作过程中一定要保证试剂充分混匀，否则会使结果产生较大误差；加样过程请避免产生气泡，实验操作过程中一定要保证试剂充分混匀，否则会使结果产生较大误差；goodgood4. 说明书中提到的室温条件，请严格控制在25~28℃；说明书中提到的室温条件，请严格控制在25~28℃；说明书中提到的室温条件，请严格控制在25~28℃；说明书中提到的室温条件，请严格控制在25~28℃；说明书中提到的室温条件说明书中提到的室温条件，请严格控制在25~28℃；；goodgood5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；goodgood6. 本产品仅限科研使用。本产品仅限科研使用。本产品仅限科研使用。本产品仅限科研使用。本产品仅限科研使用。本产品仅限科研使用。