人补体成分C5a酶联免疫吸附测定试剂盒
Human C5a ELISA Kit
本产品冰袋运输；保存于4℃(其中 标准品 需保存于-20℃)，保质期6个月；标准品如存放于4℃，1~2周内有效。

货号规格
HJ01396次

产品特点
高灵敏度——多次重复结果表明，最小检出量为17.5 pg/mL；
高特异性——与人C3a无交叉反应，与C3有25%的交叉反应；
重复性好——板内，板间变异系数均小于10%。

产品简介
本试本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中人C5a的浓度。人C5a捕获抗体已经预包被于酶标板上，当加入样品或标准品时，其中的人C5a会与捕获抗体结合，而其它游离成分则会通过洗涤被除去。接着，再加入生物素化的抗人C5a抗体后，抗人C5a抗体与人C5a接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离成分则通过洗涤被除去。随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，这样亲合素上标记的HRP就与夹心的免疫复合物连接起来，而其它游离成分则通过洗涤被除去。最后加入显色剂，若样品中存在人C5a，则会形成免疫复合物，其上连接的HRP会催化无色的显色剂氧化生成蓝色物质，而后加入终止液，最终产物呈黄色。通过酶标仪检测，读其450 nm处的OD值，人C5a浓度与OD450值之间呈正比，通过检测标准品绘制标准曲线，对照未知样品中OD值，即可计算出样品中人C5a的浓度。

背景简介
本试人的C5是一种190kDa的糖蛋白，可被裂解成两个部分：C5a和C5b。C5a是一个由C5蛋白α链裂解成的74个氨基酸的多肽。人的C5a与小鼠和大鼠的C5a分别有60%和54%的同源性。
本试与C3a类似，C5a也是一种过敏毒素，其过敏毒性超过C3a活性100倍。C5a具有趋化活性，其与C5aR(CD88)结合，激活下游G蛋白耦连的通路，引起中性粒细胞趋化性和内皮细胞的活化。此外，C5a也能诱导嗜碱性粒细胞和肥大细胞释放组胺。

产品内容人补体成分C5a酶联免疫吸附测定试剂盒人补体成分C5a酶联免疫吸附测定试剂盒人补体成分C5a酶联免疫吸附测定试剂盒人补体成分C5a酶联免疫吸附测定试剂盒
Human C5a ELISA KitHuman C5a ELISA KitHuman C5a ELISA KitHuman C5a ELISA KitHuman C5a ELISA Kit
本产品冰袋运输；保存于4℃(其中 标准品 需保存于-20℃)，保质期6个月；标准品如存放于4℃，1~2周内有效。本产品冰袋本产品冰袋本产品冰袋运输；保存于运输；保存于运输；保存于444℃℃℃(((其中 其中 其中 标准品标准品标准品标准品标准品 需保存于 需保存于 需保存于-----202020℃℃℃)))，保质期，保质期，保质期666个月个月个月；；；标准品标准品标准品标准品标准品如存放于4如存放于4如存放于4℃℃℃，1~2周内有效。，1~2周内有效。，1~2周内有效。

货号规格货号规格货号规格货号规格
HJ01396次HJ013HJ013 9996次66次次

产品特点产品特点产品特点产品特点
高灵敏度——多次重复结果表明，最小检出量为17.5 pg/mL；高灵敏度高灵敏度高灵敏度——————多次重复结果表明，最小检出量为17.多次重复结果表明，最小检出量为17.5 pg/mL；55 pg/mL；
高特异性——与人C3a无交叉反应，与C3有25%的交叉反应；高特异性高特异性高特异性——与人C3a无交叉反应，与C3有25%的交叉反应；————与人C3a无交叉反应，与C3有25%的交叉反应；
重复性好——板内，板间变异系数均小于10%。重复性好重复性好重复性好——板内，板间变异系数均小于10%。————板内，板间变异系数均小于10%。

产品简介产品简介产品简介产品简介
本试本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中人C5a的浓度。人C5a捕获抗体已经预包被于酶标板上，当加入样品或标准品时，其中的人C5a会与捕获抗体结合，而其它游离成分则会通过洗涤被除去。接着，再加入生物素化的抗人C5a抗体后，抗人C5a抗体与人C5a接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离成分则通过洗涤被除去。随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，这样亲合素上标记的HRP就与夹心的免疫复合物连接起来，而其它游离成分则通过洗涤被除去。最后加入显色剂，若样品中存在人C5a，则会形成免疫复合物，其上连接的HRP会催化无色的显色剂氧化生成蓝色物质，而后加入终止液，最终产物呈黄色。通过酶标仪检测，读其450 nm处的OD值，人C5a浓度与OD450值之间呈正比，通过检测标准品绘制标准曲线，对照未知样品中OD值，即可计算出样品中人C5a的浓度。本试本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中人C5a的浓度。人C5a捕获抗体已经预包被于酶标板上，当加入样品或标准品时，其中的人C5a会与捕获抗体结合，而其它游离成分则会通过洗涤被除去。接着，再加入生物素化的抗人C5a抗体后，抗人C5a抗体与人C5a接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离成分则通过洗涤被除去。随后加入辣根过氧化物酶(HRP本试本试本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中人C5a的浓度。人C5a捕获抗体已经预包被于酶标板上，当加入样品或标准品时，其中的人C5a会与捕获抗体结合，而其它游离成分则会通过洗涤被除去。接着，再加入生物素化的抗人C5a抗体后，抗人C5a抗体与人C5a接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离成分则通过洗涤被除去。随后加入辣根过氧化物酶(HRP))标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，这样亲合素上标记的HRP就与夹心的免疫复合物连接起来，而其它游离成分则通过洗涤被除去。最后加入显色剂，若样品中存在人C5a，则会形成免疫复合物，其上连接的HRP会催化无色的显色剂氧化生成蓝色物质，而后加入终止液，最终产物呈黄色。通过酶标仪检测，读其45标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，这样亲合素上标记的HRP就与夹心的免疫复合物连接起来，而其它游离成分则通过洗涤被除去。最后加入显色剂，若样品中存在人C5a，则会形成免疫复合物，其上连接的HRP会催化无色的显色剂氧化生成蓝色物质，而后加入终止液，最终产物呈黄色。通过酶标仪检测，读其45000 nm处的OD值，人C5a浓度与OD450值之间呈正比，通过检测标准品绘制标准曲线，对照未知样品中OD值，即可计算出样品中人C5a的浓度。 nm处的OD值，人C5a浓度与OD450值之间呈正比，通过检测标准品绘制标准曲线，对照未知样品中OD值，即可计算出样品中人C5a的浓度。

背景简介背景简介背景简介背景简介
本试人的C5是一种190kDa的糖蛋白，可被裂解成两个部分：C5a和C5b。C5a是一个由C5蛋白α链裂解成的74个氨基酸的多肽。人的C5a与小鼠和大鼠的C5a分别有60%和54%的同源性。本试人的C5是一种19本试本试人的C5是一种19000 kDa的糖蛋白，kDa的糖蛋白，可可被裂解成两个部分：C5a和C5b。C5a是一个由C5蛋白α链裂解成的74个氨基酸的多肽。人的C5a与小鼠和大鼠的C5a分别有60%和54%的同源性。被裂解成两个部分：C5a和C5b。C5a是一个由C5蛋白α链裂解成的74个氨基酸的多肽。人的C5a与小鼠和大鼠的C5a分别有60%和54%的同源性。
本试与C3a类似，C5a也是一种过敏毒素，其过敏毒性超过C3a活性100倍。C5a具有趋化活性，其与C5aR(CD88)结合，激活下游G蛋白耦连的通路，引起中性粒细胞趋化性和内皮细胞的活化。此外，C5a也能诱导嗜碱性粒细胞和肥大细胞释放组胺。本试与C3a类似，C5a也是一种过敏毒素，其过敏毒性超过C3a活性100倍。C5a具有趋化活性本试本试与C3a类似，C5a也是一种过敏毒素，其过敏毒性超过C3a活性100倍。C5a具有趋化活性，，其其与C5aR与C5aR((CD88CD88))结合，激活下游G蛋白耦连的通路，引起中性粒细胞趋化性和内皮细胞的活化。结合，激活下游G蛋白耦连的通路，引起中性粒细胞趋化性和内皮细胞的活化。此外此外，C5a，C5a也能诱导嗜碱性粒细胞和肥大细胞释放组胺。也能诱导嗜碱性粒细胞和肥大细胞释放组胺。

产品内容产品内容产品内容产品内容

组分	体积或数量
人C5a预包被板	12条
标准品稀释液(5×)	60mL
人C5a标准品	≥2支（冻干）
人C5a生物素化抗体	10mL
HRP标记的亲和素	10mL
浓缩洗涤液(20×)	30mL
显色剂TMB	10mL
终止液	5mL
封板胶纸	3张

组分体积或数量人C5a预包被板12条标准品稀释液(5×)60mL人C5a标准品≥2支（冻干）人C5a生物素化抗体10mLHRP标记的亲和素10mL浓缩洗涤液(20×)30mL显色剂TMB10mL终止液5mL封板胶纸3张组分体积或数量组分组分组分组分组分组分组分体积或数量体积或数量体积或数量体积或数量体积或数量体积或数量体积或数量人C5a预包被板12条人C5a预包被板人C5a预包被板人C5a预包被板人C5a预包被板人C5a预包被板人C5a预包被板12条12条12条12条12条12条标准品稀释液(5×)60mL标准品稀释液(5×)标准品稀释液(5×)标准品稀释液(5×)标准品稀释液(5×)标准品稀释液(标准品稀释液(55×)×)60mL60mL60mL60mL60600 mLmL人C5a标准品≥2支（冻干）人C5a标准品人C5a标准品人C5a标准品人C5a标准品人C5a标准品人C5a标准品≥2支（冻干）≥2支（冻干）≥2支（冻干）≥2支（冻干）≥2支≥2支（（冻干）冻干）人C5a生物素化抗体10mL人C5a生物素化抗体人C5a生物素化抗体人C5a生物素化抗体人C5a生物素化抗体人人C5a生物素化抗体C5a生物素化抗体10mL10mL10mL10mL10100 mLmLHRP标记的亲和素10mLHRP标记的亲和素HRP标记的亲和素HRP标记的亲和素HRP标记的亲和素HRP标记的亲和素HRP标记的亲和素10mL10mL10mL10mL10100 mLmL浓缩洗涤液(20×)30mL浓缩洗涤液(20×)浓缩洗涤液(20×)浓缩洗涤液(20×)浓缩洗涤液(20×)浓缩洗涤液(浓缩洗涤液(2020×)×)30mL30mL30mL30mL30300 mLmL显色剂TMB10mL显色剂TMB显色剂TMB显色剂TMB显色剂TMB显色剂TMB显色剂TMB10mL10mL10mL10mL10100 mLmL终止液5mL终止液终止液终止液终止液终止液终止液5mL5mL5mL5mL555 mLmL封板胶纸3张封板胶纸封板胶纸封板胶纸封板胶纸封板胶纸封板胶纸3张3张3张3张3张3张
操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤
goodgoodgoodgood◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ 样品制备样品制备样品制备样品制备
good◆gggood◆gg1. 根据样品种类选择相应的处理方法：根据样品种类选择相应的处理方法：根据样品种类选择相应的处理方法：根据样品种类选择相应的处理方法：
good◆ 样1. 根good◆ 样1. 根A. 细胞上清：将细胞培养上清液100~500×g离心5min，去除悬浮物后即可；细胞上清：将细胞培养上清液100~500×g离心5min，去除悬浮物后即可；细胞上清：将细胞培养上清液100细胞上清：将细胞培养上清液：将细胞培养上清液100~~500500××gggg离心离心555 minmin，去除悬浮物后即可；，去除悬浮物后即可；
good◆ 样1. 根good◆ 样1. 根B. 血清样品：将全血在室温下静置0.5~2 h，待其自然凝固并析出血清后，离心取黄色上清即可(4℃，1,000~2,000×g，10min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血清需置于冰上待用，请勿在其中添加任何防腐剂或抗凝剂；血清样品：将全血在室温下静置0.5~2 h，待其自然凝固并析出血清后，离心取黄色上清即可(4℃，1,000~2,000×g，10min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血清需置于冰上待用，请勿在其中添加任何防腐剂或抗凝剂；血清样品：将全血在室温下静置0.5~2血清样品：将全血在室温下静置0.5~22 h，待其 h，待其自然凝固自然凝固并析出血清并析出血清并析出血清后，后，离心离心取取黄色黄色上清上清即可即可((44℃℃，1，1,,000000~2,000~2,000××gggg，，11000 minmin)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血清需置于冰上待用，请勿在其中添加任何防腐剂或抗凝剂；)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血清需置于冰上待用，请勿在其中添加任何防腐剂或抗凝剂；
good◆ 样1. 根good◆ 样1. 根C. 血浆样品：使用EDTA对全血进行抗凝处理后，混合均匀置于冰上，离心取黄色上清即可(4℃，1,000~2,000×g，10min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血浆需置于冰上待用；血浆样品：使用EDTA对全血进行抗凝处理后，混合均匀置于冰上，离心取黄色上清即可(4℃，1,000~2,000×g，10min)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血浆需置于冰上待用；血浆样品：使用EDTA对全血进行抗凝处理后，混合均匀置于冰上，离心血浆样品：使用EDTA对全血进行抗凝处理后，混合均匀置于冰上，离心取取黄色黄色上清上清即可即可((44℃℃，1，1,,000000~2,000~2,000××gggg，，11000 minmin)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血浆需置于冰上待用；)，注意请勿吸取沉淀，制备好的血浆需置于冰上待用；注意：① 人血清或血浆样品中因C5a含量较高，需稀释后再进行检测；
注意：②若待测样品无法及时检测，样品制备完成后，请分装冻存于-20℃，避免反复冻融；
注意：③ 请保证待测样品清澈透明，检测前如发现样品中有悬浮物，需通过离心去除；
注意：④ 为了保证检测结果准确，请勿使用溶血、黄疸、高血脂或污染的样品。注意：① 人血清或血浆样品中因C5a含量较高，需稀释后再进行检测；注意：①注意：①注意：①① 人 人 人血清或血浆样品中因血清或血浆样品中因血清或血浆样品中因C5a含量较高，需稀释后再进行检测；C5a含量较高，需稀释后再进行检测；C5a含量较高，需稀释后再进行检测；
注意：②若待测样品无法及时检测，样品制备完成后，请分装冻存于-20℃，避免反复冻融；注意：②注意：注意：②②② 若待测若待测若待测样品样品样品无法无法无法及时检测，及时检测，及时检测，样品制备完成后，样品制备完成后，样品制备完成后，请分装冻存于请分装冻存于请分装冻存于---202020℃，避免反复冻融；℃，避免反复冻融；℃，避免反复冻融；
注意：③ 请保证待测样品清澈透明，检测前如发现样品中有悬浮物，需通过离心去除；注意：③ 请保证待测样品清澈透明，检测前如发现样品中有悬浮物，需通过离心去除；注意：注意：③ 请保证待测样品清澈透明，检测前如发现样品中有悬浮物，需通过离心去除；③③ 请保证待测样品清澈透明，检测前如发现样品中有悬浮物，需通过离心去除；
注意：④ 为了保证检测结果准确，请勿使用溶血、黄疸、高血脂或污染的样品。注意：④ 为了保证检测结果准确，请勿使用溶血、黄疸、高血脂或污染的样品。注意：注意：④ 为了保证检测结果准确，请勿使用溶血、黄疸、高血脂或污染的样品。④④ 为了保证检测结果准确，请勿使用溶血、黄疸、高血脂或污染的样品。
goodgoodgoodgood◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ 检测准备工作检测准备工作检测准备工作检测准备工作
good◆gggood◆gg2. 试剂盒自冰箱取出后，请置于室温平衡20min；检测完成后，剩余试剂请及时置于4℃保存；试剂盒自冰箱取出后，请置于室温平衡20min；检测完成后，剩余试剂请及时置于4℃保存；试剂盒自冰箱取出后，请置试剂盒自冰箱取出后，请置于于室温平衡2室温平衡2000 minmin；检测；检测完成完成后后，，剩余试剂请及时剩余试剂请及时置置于于44℃保存；℃保存；；
good◆gggood◆gg3. 将浓缩洗涤液(20×)用双蒸水或去离子水稀释为1×洗涤液；将浓缩洗涤液(20×)用双蒸水或去离子水稀释为1×洗涤液；将将 浓缩洗涤液浓缩洗涤液浓缩洗涤液(((202020×××))) 用双蒸水或去离子水稀释用双蒸水或去离子水稀释为为11×洗涤液；×洗涤液；
good◆gggood◆gg4. 将标准品稀释液(5×)用双蒸水或去离子水稀释为1×标准品稀释液；将标准品稀释液(5×)用双蒸水或去离子水稀释为1×标准品稀释液；将将 标准品稀释液标准品稀释液标准品稀释液(((555×)×)×) 用双蒸水或去离子水稀释用双蒸水或去离子水稀释为1为1×标准品稀释液；×标准品稀释液；
good◆gggood◆gg5. 按标准品标签上注明的复溶体积，用1×标准品稀释液复溶使标准品终浓度达到1,000 pg/mL，室温操作，请严格控制在25~28℃，静置15~20min后轻轻混悬，用移液器吹打数次，使其彻底溶解，然后按下表用1×标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。(最高浓度为1,000 pg/mL，将1×标准品稀释液作为浓度0 pg/mL。)按标准品标签上注明的复溶体积，用1×标准品稀释液复溶使标准品终浓度达到1,000 pg/mL，室温操作，请严格控制在25~28℃，静置15~20min后轻轻混悬，用移液器吹打数次，使其彻底溶解，然后按下表用1×标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。(最高浓度为1,000 pg/mL，将1×标准品稀释液作为浓度0 pg/mL。)按标准品标签上注明的复溶体积，用按标准品标签上注明的复溶体积按标准品标签上注明的复溶体积，，用用11××标准品稀释液复溶使标准品终浓度达标准品稀释液复溶使标准品终浓度达到到到1,001,00000 pg pg//mL，室温操作，mL，室温操作，请严格控制在25~28请严格控制在25~28请严格控制在25~28℃℃℃，静置15~2，静置15~2000 minmin后轻轻混悬，用移液器吹打数次，使其彻底溶解，然后按下表用1后轻轻混悬，用移液器吹打数次，使其彻底溶解，然后按下表用1××标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。((最高浓度为1,00最高浓度为1,00000 pg pg//mL，将1mL，将1××标准品稀释液作为浓度标准品稀释液作为浓度000 pg pg/mL。)/mL。)

管号	稀释液用量(μL)	复溶后标准品用量(μL)	标准品的最终浓度(pg/mL)
A	0	250	1,000
B	250	250	500
C	250	250(从B管中取)	250
D	250	250(从C管中取)	125
E	250	250(从D管中取)	62.5
F	250	250(从E管中取)	31.25
G	250	0	0

管号稀释液用量(μL)复溶后标准品用量(μL)标准品的最终浓度(pg/mL)A02501,000B250250500C250250(从B管中取)250D250250(从C管中取)125E250250(从D管中取)62.5F250250(从E管中取)31.25G25000管号稀释液用量(μL)复溶后标准品用量(μL)标准品的最终浓度(pg/mL)管号管号管号管号管号稀释液用量(μL)稀释液用量(μL)稀释液用量(μL)稀释液用量(μL)稀释液用量(μL)复溶后标准品用量(μL)复溶后标准品用量(μL)复溶后标准品用量(μL)复溶后标准品用量(μL)复溶后标准品用量(μL)标准品的最终浓度(pg/mL)标准品的最终浓度(pg/mL)标准品的最终浓度(pg/mL)标准品的最终浓度(p标准品的最终浓度(pgg//mL)mL)A02501,000AAAAA000002502502502502501,0001,0001,0001,0001,000B250250500BBBBB250250250250250250250250250250500500500500500C250250(从B管中取)250CCCCC250250250250250250(从B管中取)250(从B管中取)250(从B管中取)252500((从B管中取)从B管中取)250250250250250D250250(从C管中取)125DDDDD250250250250250250(从C管中取)250(从C管中取)250(从C管中取)252500((从从CC管中取)管中取)125125125125125E250250(从D管中取)62.5EEEEE250250250250250250(从D管中取)250(从D管中取)250(从D管中取)252500((从从DD管中取)管中取)62.562.562.562.562.5F250250(从E管中取)31.25FFFFF250250250250250250(从E管中取)250(从E管中取)250(从E管中取)252500((从从EE管中取)管中取)31.2531.2531.2531.2531.25G25000GGGGG2502502502502500000000000
注意：标准品复溶加样后，剩余部分请丢弃。注意：标准品复溶加样后，剩余部分请丢弃。注意：标准品复溶加样后，剩余部分请丢弃。注意：标准品复溶加样后，剩余部分请丢弃。注意：标准品复溶加样后，剩余部分请丢弃。
goodgoodgoodgood◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ 检测流程检测流程检测流程检测流程
good◆gggood◆gg6. 通过计算确定一次实验所需的板条数，取出所需板条放置于框架内，多余的板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃；通过计算确定一次实验所需的板条数，取出所需板条放置于框架内，多余的板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃；通过计算确定一次实验所需的板条数，取出所需板条放置于框架内，多余的板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃；通过计算确定一次实验所需的板条数，取出所需板条放置于框架内，多余的板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃；注意：①标准品和样品建议做双复孔检测；
注意：② 建议设置本底较正孔，即空白孔，只加入相应体积的 显色剂TMB 和 终止液 即可；
注意：③ 每次实验均需绘制标准曲线。注意：①标准品和样品建议做双复孔检测；注意：①注意：①注意：①① 标准品和标准品和标准品和样品样品样品建议建议建议做双复孔检测；做双复孔检测；做双复孔检测；
注意：② 建议设置本底较正孔，即空白孔，只加入相应体积的 显色剂TMB 和 终止液 即可；注意：②注意：注意：②②② 建议设置本底较正孔，即空白孔，只加入相应体积的  建议设置本底较正孔，即空白孔，只加入相应体积的  建议设置本底较正孔，即空白孔，只加入相应体积的 显色剂显色剂显色剂显色剂TMBTMBTMBTMB 和  和  和 终止液终止液终止液终止液 即可； 即可； 即可；
注意：③ 每次实验均需绘制标准曲线。注意：③ 每次实验均需绘制标准曲线。注意：注意：③ 每次实验均需绘制标准曲线。③③ 每次实验均需绘制标准曲线。
good◆gggood◆gg7. 将样品和不同浓度标准品(100将样品和不同浓度标准品(1000μLμL//孔孔))分别分别分别加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育1212000min。细胞上清样品一般可直接进行检测，如超过试剂盒的检测范围，可用1×标准品稀释液进行相应稀释；对于血清样品，需稀释80到1,000倍，如无明确范围，建议用1×标准品稀释液从200倍开始稀释；对于血浆样品，需稀释50到500倍，如无明确范围，建议用1×标准品稀释液从100倍开始稀释；如果样品浓度过高，可进一步加大稀释倍数后再进行检测；min。细胞上清样品一般可直接进行检测，如超过试剂盒的检测范围，可用1×标准品稀释液进行相应稀释；对于血清样品，需稀释80到1,000倍，如无明确范围，建议用1×标准品稀释液从200倍开始稀释；对于血浆样品，需稀释50到500倍，如无明确范围，建议用1×标准品稀释液从100倍开始稀释；如果样品浓度过高，可进一步加大稀释倍数后再进行检测；
注意：① 请查阅相关文献确定样品中待检测蛋白的大致浓度，若其大于或小于本试剂盒的最高或最低标准品浓度，请将样品适当稀释或浓缩后再进行检测；
注意：②整个加样过程不宜超过10 min，否则可能会影响检测结果。注意：① 请查阅相关文献确定样品中待检测蛋白的大致浓度，若其大于或小于本试剂盒的最高或最低标准品浓度，请将样品适当稀释或浓缩后再进行检测；注意：①注意：①注意：①① 请 请 请查阅相关文献确定样品中待检测蛋白的大致浓度查阅相关文献确定样品中待检测蛋白的大致浓度查阅相关文献确定样品中待检测蛋白的大致浓度，，，，若其若其若其大于或小于本试剂盒的最高或最低标准品浓度，请大于或小于本试剂盒的最高或最低标准品浓度，请大于或小于本试剂盒的最高或最低标准品浓度，请将样品适当稀释或浓缩后再进行检测；将样品适当稀释或浓缩后再进行检测；将样品适当稀释或浓缩后再进行检测；
注意：②整个加样过程不宜超过10 min，否则可能会影响检测结果。注意：②注意：注意：②②② 整个加样整个加样整个加样过程过程过程不宜超过1不宜超过1不宜超过10 min，否则可能会影响检测结果。0 min，否则可能会影响检测结果。00 min，否则可能会影响检测结果。
good◆gggood◆gg8. 洗板5次，每孔1×洗涤液洗板5次，每孔1×洗涤液用量用量为30为30000μLμL，注入与吸出间隔15，注入与吸出间隔15~~33000ss，，洗完后将板倒扣在厚吸水纸上拍干；洗完后将板倒扣在厚吸水纸上拍干；
注意：洗涤过程至关重要，洗涤不充分会导致结果产生较大误差。注意：洗涤过程至关重要，洗涤不充分会导致结果产生较大误差。注意：洗涤过程至关重要，洗涤不充分会导致结果产生较大误差。注意：洗涤过程至关重要，洗涤不充分会导致结果产生较大误差。注意：洗涤过程至关重要，洗涤不充分会导致结果产生较大误差。
good◆gggood◆gg9. 加入加入人C5a人C5a人C5a生物素化抗体生物素化抗体生物素化抗体((1010000μLμL//孔孔，，无需稀释无需稀释))。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育6。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育6000min；min；
注意：检测血清和血浆样品时，检测抗体的孵育时间应适当延长。注意：检测血清和血浆样品时，检测抗体的孵育时间应适当延长。注意：检测血清和血浆样品时，检测抗体的孵育时间应适当延长。注意：检测血清和血浆样品时，检测抗体的孵育时间应适当延长。注意：检测血清和血浆样品时，检测抗体的孵育时间应适当延长。
good◆gggood◆gg10. 洗板5次，方法同步骤8；洗板5次，方法同步骤8；
good◆gggood◆gg11. 加入加入HRPHRPHRP标记的标记的标记的亲和素亲和素亲和素((1010000μLμL//孔孔，，无需稀释无需稀释))。用封板胶纸封住反应孔，避光室温孵育2。用封板胶纸封住反应孔，避光室温孵育2000min；min；
good◆gggood◆gg12. 洗板5次，方法同步骤8；洗板5次，方法同步骤8；
good◆gggood◆gg13. 加入加入显色剂TMB显色剂TMB显色剂TMB((1010000μLμL//孔孔))，避光室温孵育，避光室温孵育10~10~22000min；min；
注意：在保存和使用时，请勿将TMB接触氧化剂和金属。注意：在保存和使用时，请勿将TMB接触氧化剂和金属。注意：在保存和使用时，注意：在保存和使用时，注意：在保存和使用时，请勿请勿请勿将TMB接触氧化剂和金属。将TMB接触氧化剂和金属。将TMB接触氧化剂和金属。
good◆gggood◆gg14. 加入加入终止液终止液终止液((55000μLμL//孔孔))，，混匀后即刻混匀后即刻使用酶标仪使用酶标仪测量OD450测量OD450，，同时同时设定54设定54000nm或57nm或57000nm作为校正波长，nm作为校正波长，即可计算得到校正吸光度值即可计算得到校正吸光度值((ODOD450450－－OD540OD540或或ODOD450450－－OD570)；OD570)；
注意：读取OD值建议在10 min内完成。注意：读取OD值建议在10 min内完成。注意：读取OD值建议在注意：读取OD值建议在注意：读取OD值建议在1110 min内完成。0 min内完成。00 min内完成。
goodgoodgoodgood◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ 数据分析数据分析数据分析数据分析
good◆gggood◆gg15. 绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，利用计算机软件作四参数逻辑(4-PL)曲线拟合创建标准曲线，通过样品的OD值即可在标准曲线上计算出其相应浓度。绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，利用计算机软件作四参数逻辑(4-PL)曲线拟合创建标准曲线，通过样品的OD值即可在标准曲线上计算出其相应浓度。绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，利用计算机软件作四参数逻辑(4-PL绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，利用计算机软件作四参数逻辑(4-PL))曲线拟合创建标准曲线，曲线拟合创建标准曲线，通过通过样品样品的OD值的OD值即即可在标准曲线上可在标准曲线上计算计算出其相应浓度。出其相应浓度。注意：①复孔OD值在20%的差异范围内结果才有效，复孔OD值取平均后可作为测量值；
注意：② 每个标准品或样品的OD值应减去本底校正孔的OD值；
注意：③ 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。注意：①复孔OD值在20%的差异范围内结果才有效，复孔OD值取平均后可作为测量值；注意：①注意：①注意：①① 复孔OD值在20%的差异范围内结果才有效，复孔OD值复孔OD值在20%的差异范围内结果才有效，复孔OD值复孔OD值在20%的差异范围内结果才有效，复孔OD值取平均后可作为测量值；取平均后可作为测量值；取平均后可作为测量值；
注意：② 每个标准品或样品的OD值应减去本底校正孔的OD值；注意：② 每个标准品或样品的OD值应减去本底校正孔的OD值；注意：注意：② 每个标准品或样品的OD值应减去本底校正孔的OD值；②② 每个标准品或样品的OD值应减去本底校正孔的OD值；
注意：③ 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。注意：③ 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。注意：注意：③ 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。③③ 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
goodgoodgoodgood◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ 标准曲线范例标准曲线范例标准曲线范例标准曲线范例人C5a参考标准曲线人C5a参考标准曲线人C5a参考标准曲线人C5a参考标准曲线









注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算样品含量。

注意事项









注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算样品含量。注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算样品含量。样品含量。样品含量。

注意事项注意事项注意事项注意事项goodgood1. 浓缩洗涤液低温情况下可能会出现结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液；浓缩洗涤液低温情况下可能会出现结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液；浓缩洗涤液浓缩洗涤液浓缩洗涤液浓缩洗涤液 低温低温低温情况情况情况下可能下可能下可能会出现会出现会出现结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液；结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液；结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液；goodgood2. 严禁混用不同批号试剂盒的组分；严禁混用不同批号试剂盒的组分；严禁混用不同批号试剂盒的组分；严禁混用不同批号试剂盒的组分；严禁混用不同批号试剂盒的组分；goodgood3. 加样过程请避免产生气泡，实验操作过程中一定要保证试剂充分混匀，否则会使结果产生较大误差；加样过程请避免产生气泡，实验操作过程中一定要保证试剂充分混匀，否则会使结果产生较大误差；加样过程请加样过程请加样过程请避免避免避免产生气泡，实验操作过程中一定要保证试剂充分混匀产生气泡，实验操作过程中一定要保证试剂充分混匀产生气泡，实验操作过程中一定要保证试剂充分混匀，否则会使结果产生较大误差；，否则会使结果产生较大误差；，否则会使结果产生较大误差；goodgood4. 说明书中提到的室温条件，请严格控制在25~28℃；说明书中提到的室温条件，请严格控制在25~28℃；说明书中提到的室温条件，请说明书中提到的说明书中提到的室温条件，请严格控制在25~28严格控制在25~28℃；℃；；goodgood5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；goodgood6. 本产品仅限科研使用。本产品仅限科研使用。本产品仅限科研使用。本产品仅限科研使用。本产品仅限科研使用。