特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括北京二代测序DNA快速建库试剂盒(Illumina平台)价格在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括北京二代测序DNA快速建库试剂盒(Illumina平台)价格在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：北京二代测序DNA快速建库试剂盒(Illumina平台)价格
编号：WE0229
规格：24次|96次
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：NGS Fast DNA Library Prep Set for Illumina
本试剂盒提供了DNA文库构建所需要的酶预混体系及反应缓冲液，包含除接头与PCR引物外的所有成分，用于illumina二代测序平台DNA文库构建。和一般建库方法相比，该试剂盒操作简单、方便，极大地缩短了文库构建时间。另外，试剂盒采用高保真DNA聚合酶进行文库富集，无偏好的PCR扩增，扩大了序列的覆盖区域，可高效制备用于illumina二代测序平台的DNA文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性。

试剂盒组成：

名称：北京二代测序DNA快速建库试剂盒(Illumina平台)价格北京二代测序DNA快速建库试剂盒(Illumina平台)价格北京二代测序DNA快速建库试剂盒(Illumina平台)价格
编号：WE0229
规格：24次|96次
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：NGS Fast DNA Library Prep Set for Illumina
本试剂盒提供了DNA文库构建所需要的酶预混体系及反应缓冲液，包含除接头与PCR引物外的所有成分，用于illumina二代测序平台DNA文库构建。和一般建库方法相比，该试剂盒操作简单、方便，极大地缩短了文库构建时间。另外，试剂盒采用高保真DNA聚合酶进行文库富集，无偏好的PCR扩增，扩大了序列的覆盖区域，可高效制备用于illumina二代测序平台的DNA文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性。

试剂盒组成试剂盒组成： 

组份	24次	96次
End Prep Enzyme Mix	48μl	192μl
10x End Repair Reaction Buffer	200μl	800μl
T4 DNA ligase	48μl	192μl
T4 DNA ligase Buffer	400μl	2×800μl
HiFidelity 2×PCRMasterMix	600μl	2×1.2ml

组份24次96次End Prep Enzyme Mix48μl192μl10x End Repair Reaction Buffer200μl800μlT4 DNA ligase48μl192μlT4 DNA ligase Buffer400μl2×800μlHiFidelity 2×PCRMasterMix600μl2×1.2ml组份24次96次组份组份 24次24次 96次96次 End Prep Enzyme Mix48μl192μlEnd Prep Enzyme MixEnd Prep Enzyme Mix 48μl48μl 192μl192μl 10x End Repair Reaction Buffer200μl800μl10x End Repair Reaction Buffer10x End Repair Reaction Buffer 200μl200μl 800μl800μl T4 DNA ligase48μl192μlT4 DNA ligaseT4 DNA ligase 48μl48μl 192μl192μl T4 DNA ligase Buffer400μl2×800μlT4 DNA ligase BufferT4 DNA ligase Buffer 400μl400μl 2×800μl2×800μl HiFidelity 2×PCRMasterMix600μl2×1.2mlHiFidelity 2×PCRMasterMixHiFidelity 2×PCRMasterMix 600μl600μl 2×1.2ml2×1.2ml

试剂盒特点;
1、末端补平，磷酸化，加A一步完成。
2、不需纯化，直接加接头。
3、超保真扩增，最大程度上降低了扩增偏好性。
4、支持多种样本，且所得文库能够用于Illumina GAIIx，HiSacnSQ、HiSeq 2500/2000/1000和MiSeq sequencing等测序平台的测序。

自备仪器、试剂和耗材自备仪器、试剂和耗材：
1、磁力架：建议使用DynaMagTM-2(货号： 12321D)。
2、DNA纯化回收试剂盒：建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(货号： WE0205)。
3、样本接头引物试剂盒：建议使用百奥莱博二代测序多样本接头引物试剂盒 I/II(货号：WE0241/WE0240)。
4、无水乙醇，EB(10 mM Tris-HCl, pH 8.0)，去离子水(pH 在7.0-8.0之间)。
5、反应管：建议使用低吸附的PCR管与1.5ml离心管；枪头：建议使用高质量过滤枪头防止试剂盒、文库样本污染

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、避免试剂的反复冻融，建议您首次使用试剂盒后将剩余试剂分装保存。
2、PCR产物因操作不当极易产生污染，导致实验结果不准确，建议将PCR反应体系配制区与PCR产物纯化区隔离，并使用专门的移液器，定时对各实验区域进行清洁。

DNA建库流程示意图：



操作步骤：

样本要求： 5ng-1μg打断的双链DNA，溶于EB(10 mM Tris-HCl pH 8.0)或去离子水中。DNA纯度要求：OD260/OD280=1.8~2.0。

DNA末端修复反应：
1、向200μl PCR管中加入以下试剂：实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、避免试剂的反复冻融，建议您首次使用试剂盒后将剩余试剂分装保存。
2、PCR产物因操作不当极易产生污染，导致实验结果不准确，建议将PCR反应体系配制区与PCR产物纯化区隔离，并使用专门的移液器，定时对各实验区域进行清洁。

DNA建库流程示意图：DNA建库流程示意图：



操作步骤操作步骤：

样本要求：样本要求： 5ng-1μg打断的双链DNA，溶于EB(10 mM Tris-HCl pH 8.0)或去离子水中。DNA纯度要求：OD260/OD280=1.8~2.0。

DNA末端修复反应：DNA末端修复反应：
1、向200μl PCR管中加入以下试剂：

试剂	体积
10×End Repair Reaction Buffer	6.5μl
End Prep Enzyme Mix	2μl
fragmented DNA	X(5ng-1μg)
RNase-free Water	Up to 65μl

试剂体积10×End Repair Reaction Buffer6.5μlEnd Prep Enzyme Mix2μlfragmented DNAX(5ng-1μg)RNase-free WaterUp to 65μl试剂体积试剂试剂试剂 体积体积体积 10×End Repair Reaction Buffer6.5μl10×End Repair Reaction Buffer10×End Repair Reaction Buffer10×End Repair Reaction Buffer 6.5μl6.5μl6.5μl End Prep Enzyme Mix2μlEnd Prep Enzyme MixEnd Prep Enzyme MixEnd Prep Enzyme Mix 2μl2μl2μl fragmented DNAX(5ng-1μg)fragmented DNAfragmented DNAfragmented DNA X(5ng-1μg)X(5ng-1μg)X(5ng-1μg) RNase-free WaterUp to 65μlRNase-free WaterRNase-free WaterRNase-free Water Up to 65μlUp to 65μlUp to 65μl

2、用枪头将上述溶液轻轻吹吸混匀，短暂离心,使所有组分收集到管底。
3、将上述PCR管置于PCR仪中，热盖打开， 反应程序如下：
15 min @ 12℃
15 min @ 37℃
20 min @ 72℃

Adaptor 连接：
建议使用百奥莱博adaptor进行连接，也可选择使用NEB、illumina公司的adaptor，具体连接方法可参考各公司的产品使用说明书。以下为使用百奥莱博adaptor进行连接的操作步骤：
1、向上述已完成DNA末端修复的反应液中直接加入以下试剂：2、用枪头将上述溶液轻轻吹吸混匀，短暂离心,使所有组分收集到管底。
3、将上述PCR管置于PCR仪中，热盖打开， 反应程序如下：
15 min @ 12℃
15 min @ 37℃
20 min @ 72℃

Adaptor 连接：Adaptor 连接：
建议使用百奥莱博adaptor进行连接，也可选择使用NEB、illumina公司的adaptor，具体连接方法可参考各公司的产品使用说明书。以下为使用百奥莱博adaptor进行连接的操作步骤操作步骤：
1、向上述已完成DNA末端修复的反应液中直接加入以下试剂：

试剂	体积
T4 DNA ligase buffer for illumina	14μl
T4 DNA ligase	2μl
Adaptor	2.5μl

试剂体积T4 DNA ligase buffer for illumina14μlT4 DNA ligase2μlAdaptor2.5μl试剂体积试剂试剂试剂 体积体积体积 T4 DNA ligase buffer for illumina14μlT4 DNA ligase buffer for illuminaT4 DNA ligase buffer for illuminaT4 DNA ligase buffer for illumina 14μl14μl14μl T4 DNA ligase2μlT4 DNA ligaseT4 DNA ligaseT4 DNA ligase 2μl2μl2μl Adaptor2.5μlAdaptorAdaptorAdaptor 2.5μl2.5μl2.5μl
此时管中溶液总体积为83.5μl。
注意：若起始样本量少于100ng，请将adaptor用去离子水稀释10倍至1.5μM后使用。
2、用枪头将上述试剂吹吸混匀，短暂离心，使溶液收集到管底。
3、20℃温浴15分钟。
注意：若此操作使用pcr仪，请将热盖关闭。

DNA片段的选择性回收：
建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)进行DNA片段选择性回收。
注意：DNA片段选择性回收是可选步骤，若起始样本量低于50ng，不建议进行DNA片段选择性回收，直接进行DNA片段的纯化。另外构建不同大小的DNA文库时，DNA片段选择性回收的磁珠使用量不同，具体磁珠用量可参照附表1(若使用除百奥莱博以外厂家的磁珠，需自行摸索最佳磁珠用量)。
以下操作步骤中，可选择回收DNA片段长度峰值为320bp(插入片段长度200bp)，反应起始体积为100μl。
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液。
2、向连接反应液中加入16.5μl去离子水，使adaptor连接反应缓冲液体积至100μl。
注意：若使用NEB adaptor，只需要加入13.5μl去离子水。
3、将上述adaptor反应缓冲液转移至一新的1.5ml离心管中。
4、加入70μl混合均匀的MCPure，涡旋震荡5秒钟后, 室温静置5分钟。
5、短暂离心，将离心管置于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心地将上清溶液转移至新的1.5ml离心管中,并弃去磁珠。
注意：不要弃除上清。
6、向上清中加入25μl混合均匀的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温放置5分钟。
7、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心吸取上清并弃除，期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
注意：不要弃除磁珠。
8、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
9、重复步骤8。
10、保持离心管固定于磁力架上，室温静置10分钟，使磁珠在空气中干燥。
11、将离心管从磁力架上取下，加入28μl 10 mM Tris-HCl(pH 8.0)或去离子水(自备)，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟。
12、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将23μl洗脱液转移至一个新的PCR管中；
注意：一定不要转移磁珠，微量磁珠污染可影响后续PCR反应的正常进行。

另一种方案： DNA片段的纯化：
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液。
2、将adaptor连接反应液转移至一新的1.5ml离心管中。
3、加入1倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒钟后，室温静置5分钟。
4、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心吸取上清并弃除，期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
注意：不要弃除磁珠。
5、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
6、重复步骤5。
7、保持离心管固定于磁力架上，室温静置10分钟，使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下，加入28μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟。
9、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将23μl洗脱液转移至一个新的PCR管中。

附表1：不同片段选择回收时磁珠建议用量此时管中溶液总体积为83.5μl。
注意：若起始样本量少于100ng，请将adaptor用去离子水稀释10倍至1.5μM后使用。
2、用枪头将上述试剂吹吸混匀，短暂离心，使溶液收集到管底。
3、20℃温浴15分钟。
注意：若此操作使用pcr仪，请将热盖关闭。

DNA片段的选择性回收：DNA片段的选择性回收：
建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)进行DNA片段选择性回收。
注意：DNA片段选择性回收是可选步骤，若起始样本量低于50ng，不建议进行DNA片段选择性回收，直接进行DNA片段的纯化。另外构建不同大小的DNA文库时，DNA片段选择性回收的磁珠使用量不同，具体磁珠用量可参照附表1(若使用除百奥莱博以外厂家的磁珠，需自行摸索最佳磁珠用量)。
以下操作步骤操作步骤中，可选择回收DNA片段长度峰值为320bp(插入片段长度200bp)，反应起始体积为100μl。
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液。
2、向连接反应液中加入16.5μl去离子水，使adaptor连接反应缓冲液体积至100μl。
注意：若使用NEB adaptor，只需要加入13.5μl去离子水。
3、将上述adaptor反应缓冲液转移至一新的1.5ml离心管中。
4、加入70μl混合均匀的MCPure，涡旋震荡5秒钟后, 室温静置5分钟。
5、短暂离心，将离心管置于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心地将上清溶液转移至新的1.5ml离心管中,并弃去磁珠。
注意：不要弃除上清。
6、向上清中加入25μl混合均匀的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温放置5分钟。
7、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心吸取上清并弃除，期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
注意：不要弃除磁珠。
8、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
9、重复步骤8。
10、保持离心管固定于磁力架上，室温静置10分钟，使磁珠在空气中干燥。
11、将离心管从磁力架上取下，加入28μl 10 mM Tris-HCl(pH 8.0)或去离子水(自备)，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟。
12、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将23μl洗脱液转移至一个新的PCR管中；
注意：一定不要转移磁珠，微量磁珠污染可影响后续PCR反应的正常进行。

另一种方案： DNA片段的纯化：另一种方案： DNA片段的纯化：
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液。
2、将adaptor连接反应液转移至一新的1.5ml离心管中。
3、加入1倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒钟后，室温静置5分钟。
4、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心吸取上清并弃除，期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
注意：不要弃除磁珠。
5、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
6、重复步骤5。
7、保持离心管固定于磁力架上，室温静置10分钟，使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下，加入28μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟。
9、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将23μl洗脱液转移至一个新的PCR管中。

附表1：不同片段选择回收时磁珠建议用量

DNA文库大小	插入片段	150bp	200bp	250bp	300-400bp	400-500bp	500-700bp
	插入片段+adaptor	270bp	320bp	400bp	400-500bp	500-600bp	600-800bp
磁珠用量	第一次选择	85	70	55	50	45	35
	第二次选择	25	25	20	20	20	15

DNA文库大小插入片段150bp200bp250bp300-400bp400-500bp500-700bp插入片段+adaptor270bp320bp400bp400-500bp500-600bp600-800bp磁珠用量第一次选择857055504535第二次选择 252520202015DNA文库大小插入片段150bp200bp250bp300-400bp400-500bp500-700bpDNA文库大小DNA文库大小DNA文库大小 插入片段插入片段插入片段 150bp150bp150bp 200bp200bp200bp 250bp250bp250bp 300-400bp300-400bp300-400bp 400-500bp400-500bp400-500bp 500-700bp500-700bp500-700bp 插入片段+adaptor270bp320bp400bp400-500bp500-600bp600-800bp插入片段+adaptor插入片段+adaptor插入片段+adaptor 270bp270bp270bp 320bp320bp320bp 400bp400bp400bp 400-500bp400-500bp400-500bp 500-600bp500-600bp500-600bp 600-800bp600-800bp600-800bp 磁珠用量第一次选择857055504535磁珠用量磁珠用量磁珠用量 第一次选择第一次选择第一次选择 858585 707070 555555 505050 454545 353535 第二次选择 252520202015第二次选择 第二次选择 第二次选择 252525 252525 202020 202020 202020 151515

PCR扩增：
1．在PCR管中加入以下试剂并混匀。PCR扩增：PCR扩增：
1．在PCR管中加入以下试剂并混匀。

试剂	体积
连接adaptor后的DNA片段	23μl
2×HiFid elity PCR Mix	25μl
Univesial primer	1μl
Index primer	1μl
总体积	50μl

试剂体积连接adaptor后的DNA片段23μl2×HiFid elity PCR Mix25μlUnivesial primer1μlIndex primer1μl总体积50μl试剂体积试剂试剂试剂 体积体积体积 连接adaptor后的DNA片段23μl连接adaptor后的DNA片段连接adaptor后的DNA片段连接adaptor后的DNA片段 23μl23μl23μl 2×HiFid elity PCR Mix25μl2×HiFid elity PCR Mix2×HiFid elity PCR Mix2×HiFid elity PCR Mix 25μl25μl25μl Univesial primer1μlUnivesial primerUnivesial primerUnivesial primer 1μl1μl1μl Index primer1μlIndex primerIndex primerIndex primer 1μl1μl1μl 总体积50μl总体积总体积总体积 50μl50μl50μl

2、PCR反应条件：2、PCR反应条件：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30 s
变性	98℃	10 s	6-16个循环
退火	65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	5 min

步骤温度时间循环数预变性98℃30 s变性98℃10 s6-16个循环退火65℃30 s延伸72℃30 s终延伸72℃5 min步骤温度时间循环数步骤步骤步骤 温度温度温度 时间时间时间 循环数循环数循环数 预变性98℃30 s预变性预变性预变性 98℃98℃98℃ 30 s30 s30 s 变性98℃10 s6-16个循环变性变性变性 98℃98℃98℃ 10 s10 s10 s 6-16个循环6-16个循环6-16个循环 退火65℃30 s退火退火退火 65℃65℃65℃ 30 s30 s30 s 延伸72℃30 s延伸延伸延伸 72℃72℃72℃ 30 s30 s30 s 终延伸72℃5 min终延伸终延伸终延伸 72℃72℃72℃ 5 min5 min5 min
注意：建议1μg样本起始量时PCR循环数为6个循环，50ng时10个循环，5ng时14-15个循环，PCR循环数也可根据实验需要进行优化。

PCR产物的纯化：
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液。
2、将PCR反应液转移至一新的1.5ml离心管中。
3、加入1倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟。
4、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)。小心吸取上清并弃除，期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
注意：不要弃除磁珠。
5、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
6、重复步骤5。
7、保持离心管固定于磁力架上，室温静置10分钟，使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下，加入30μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟。
9、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将洗脱液转移至一个新的PCR管中约25μl，DNA文库在-20℃保存。

文库质量检测

文库浓度：
为了得到高质量的测序结果，需要对DNA文库进行精确定量，首先推荐使用Real-time PCR方法对DNA文库进行绝对定量。此外，还可使用荧光染料法，如Qubit法或荧光染料picogreen法，此处请勿使用基于吸光度测量的定量方法。最终可使用以下近似公式换算DNA文库的摩尔浓度。注意：建议1μg样本起始量时PCR循环数为6个循环，50ng时10个循环，5ng时14-15个循环，PCR循环数也可根据实验需要进行优化。

PCR产物的纯化：PCR产物的纯化：
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液。
2、将PCR反应液转移至一新的1.5ml离心管中。
3、加入1倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟。
4、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)。小心吸取上清并弃除，期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
注意：不要弃除磁珠。
5、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
6、重复步骤5。
7、保持离心管固定于磁力架上，室温静置10分钟，使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下，加入30μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟。
9、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将洗脱液转移至一个新的PCR管中约25μl，DNA文库在-20℃保存。

文库质量检测文库质量检测

文库浓度：文库浓度：
为了得到高质量的测序结果，需要对DNA文库进行精确定量，首先推荐使用Real-time PCR方法对DNA文库进行绝对定量。此外，还可使用荧光染料法，如Qubit法或荧光染料picogreen法，此处请勿使用基于吸光度测量的定量方法。最终可使用以下近似公式换算DNA文库的摩尔浓度。

文库平均总长度	近似转换公式	成簇反应DNA文库浓度
200 bp	1ng/μl=7.5 nM	6-12 pM
300 bp	1ng/μl=5.0 nM	6-12 pM
400 bp	1ng/μl=3.8 nM	6-12 pM
500 bp	1ng/μl=3.0 nM	6-12 pM

文库平均总长度近似转换公式成簇反应DNA文库浓度200 bp1ng/μl=7.5 nM6-12 pM300 bp1ng/μl=5.0 nM6-12 pM400 bp1ng/μl=3.8 nM6-12 pM500 bp1ng/μl=3.0 nM6-12 pM文库平均总长度近似转换公式成簇反应DNA文库浓度文库平均总长度文库平均总长度文库平均总长度 近似转换公式近似转换公式近似转换公式 成簇反应DNA文库浓度成簇反应DNA文库浓度成簇反应DNA文库浓度 200 bp1ng/μl=7.5 nM6-12 pM200 bp200 bp200 bp 1ng/μl=7.5 nM1ng/μl=7.5 nM1ng/μl=7.5 nM 6-12 pM6-12 pM6-12 pM 300 bp1ng/μl=5.0 nM6-12 pM300 bp300 bp300 bp 1ng/μl=5.0 nM1ng/μl=5.0 nM1ng/μl=5.0 nM 6-12 pM6-12 pM6-12 pM 400 bp1ng/μl=3.8 nM6-12 pM400 bp400 bp400 bp 1ng/μl=3.8 nM1ng/μl=3.8 nM1ng/μl=3.8 nM 6-12 pM6-12 pM6-12 pM 500 bp1ng/μl=3.0 nM6-12 pM500 bp500 bp500 bp 1ng/μl=3.0 nM1ng/μl=3.0 nM1ng/μl=3.0 nM 6-12 pM6-12 pM6-12 pM

文库长度分布
制备好的DNA文库可用琼脂糖凝胶电泳或Agilent 2100 Bioanalyzer检测DNA文库中的片段长度分布范围。


图1：Agilent 2100 Bioanalyzer文库分析结果
L：DNA Ladder；
S：使用200ng人基因组DNA构建文库，磁珠进行选择回收后结果。

文库结构
5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT [Target Sequence] TGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACNNNNNNATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’
NNNNNN：index, 6bases

储存条件：-20℃

北京二代测序DNA快速建库试剂盒(Illumina平台)价格极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·miRNA提取试剂盒
编号：WE0195
英文名称：miRNA Purification Kit
规格：50次
本试剂盒专用于从各种动物组织、植物组织、细胞、血清、血浆等样本中分离纯化miRNA， 还可以提取siRNA，snRNA等其他小于200nt的小分子RNA，同时也可用于总RNA的提取。本品将酚/胍裂解技术和硅基质膜纯化技术相结合，独特的裂解液在有效抑制RNases的同时，可以通过有机抽提的方法除去细胞或组织样品中的大部分DNA和蛋白。对于一些敏感的下游实验中，如需富集miRNA可适用该试剂盒单独对miRNA进行富集。本品适用样本范围广，制备的RNA纯度高，可直接用于敏感的下游应用，如Northern Blot分析，Real-Time PCR，Microarray Analysis等。

试剂盒组成：文库长度分布文库长度分布
制备好的DNA文库可用琼脂糖凝胶电泳或Agilent 2100 Bioanalyzer检测DNA文库中的片段长度分布范围。


图1：Agilent 2100 Bioanalyzer文库分析结果
L：DNA Ladder；
S：使用200ng人基因组DNA构建文库，磁珠进行选择回收后结果。

文库结构文库结构
5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT [Target Sequence] TGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACNNNNNNATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’
NNNNNN：index, 6bases

储存条件：-20℃

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·miRNA提取试剂盒
编号：WE0195
英文名称：miRNA Purification Kit
规格：50次
本试剂盒专用于从各种动物组织、植物组织、细胞、血清、血浆等样本中分离纯化miRNA， 还可以提取siRNA，snRNA等其他小于200nt的小分子RNA，同时也可用于总RNA的提取。本品将酚/胍裂解技术和硅基质膜纯化技术相结合，独特的裂解液在有效抑制RNases的同时，可以通过有机抽提的方法除去细胞或组织样品中的大部分DNA和蛋白。对于一些敏感的下游实验中，如需富集miRNA可适用该试剂盒单独对miRNA进行富集。本品适用样本范围广，制备的RNA纯度高，可直接用于敏感的下游应用，如Northern Blot分析，Real-Time PCR，Microarray Analysis等。

试剂盒组成试剂盒组成：

组份	50次
TRIzon Reagent	60ml
Buffer RWT(浓缩液)	15ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
吸附柱RM及收集管	50套
吸附柱RS及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	50个

组份50次TRIzon Reagent60mlBuffer RWT(浓缩液)15mlBuffer RW2(浓缩液)11mlRNase-Free Water10ml吸附柱RM及收集管50套吸附柱RS及收集管50套RNase-Free离心管(1.5ml)50个组份50次组份组份组份 50次50次50次 TRIzon Reagent60mlTRIzon ReagentTRIzon ReagentTRIzon Reagent 60ml60ml60ml Buffer RWT(浓缩液)15mlBuffer RWT(浓缩液)Buffer RWT(浓缩液)Buffer RWT(浓缩液) 15ml15ml15ml Buffer RW2(浓缩液)11mlBuffer RW2(浓缩液)Buffer RW2(浓缩液)Buffer RW2(浓缩液) 11ml11ml11ml RNase-Free Water10mlRNase-Free WaterRNase-Free WaterRNase-Free Water 10ml10ml10ml 吸附柱RM及收集管50套吸附柱RM及收集管吸附柱RM及收集管吸附柱RM及收集管 50套50套50套 吸附柱RS及收集管50套吸附柱RS及收集管吸附柱RS及收集管吸附柱RS及收集管 50套50套50套 RNase-Free离心管(1.5ml)50个RNase-Free离心管(1.5ml)RNase-Free离心管(1.5ml)RNase-Free离心管(1.5ml) 50个50个50个
保存条件：TRIzon Reagent 2～8℃避光保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂：*仿、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融，否则影响miRNA提取的量和质量。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RWT和Buffer RW2中加入无水乙醇。
4、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤：

方法一：miRNA富集(可直接用于敏感的下游实验)
1、样品处理
①组织：将组织在液氮中磨碎。每30-50 mg组织加1ml TRIzon Reagent，震荡混匀。样品体积不超过TRIzon Reagent体积的十分之一。
②单层培养细胞：吸去培养液，加入TRIzon Reagent，每10cm2加入1ml TRIzon Reagent(裂解液用量视培养瓶面积而定)。
③细胞悬液：离心得到细胞沉淀，弃上清。每5×106-1×107细胞加入1ml TRIzon Reagent(细胞不需洗涤)。
④血浆或血清：取200μl血浆或血清样本，加入5倍体积TRIzon Reagent，震荡混匀30秒。
2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次，使其充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3、可选步骤：4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心5分钟，取上清，转入一个新的离心管(自备)中(如样品中含较多蛋白、脂肪、多糖等，可选做此步骤)。
4、向上清中加入*仿，每使用1ml TRIzon Reagent加入200μl*仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置5分钟。
5、4℃ 12000rpm离心15分钟，样品分为三层：红色有机相，中间层，无色水相，将上层无色水相移到一个新的离心管(自备)中。
6、向步骤5得到的溶液中加入1/3倍体积的无水乙醇， 混匀，将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RM中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱，请分多次转入。12000rpm离心30秒，离心后弃掉吸附柱RM，保留流出液。
7、向步骤6得到的溶液中加入2/3倍体积的无水乙醇，混匀。
8、将上步所得溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RS。若一次不能将全部溶液加入吸附柱，请分多次转入。12000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
9、向吸附柱RS中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心30秒, 倒掉收集管中的废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
10、向吸附柱RS中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
11、重复步骤10。
12、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RS置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤的目的是将吸附柱RS中残留的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
13、将吸附柱RS置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱中间部位加入30-50μlRNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤13。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱RS中，重复步骤13。

方法二：总RNA的提取(提取的总RNA包括miRNA等其他<200 nt的小分子RNA)
1~5步骤同方法一。
6、向步骤5得到的溶液中加入1.25倍体积的无水乙醇，混匀。
7、将上步所得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱RM中，请分多次转入。12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
8、向吸附柱RM中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
9、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
10、重复步骤9。
11、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RM置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤的目的是将吸附柱RM中残留的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱RM转入新的无RNase离心管中，向吸附柱中间部位加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，室温 12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱RM中，重复步骤12。

储存条件：室温(15～30℃)。


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·50×TAE
编号：WE0216
规格：500ml
本品为50×Tris-乙酸缓冲液，是常用的核酸电泳缓冲液。

·IHC复染试剂(改良型苏木素)
编号：WE0322
英文名称：Improved-Hematoxylin
规格：10ml
苏木精是一种碱性染料，它被氧化后生成氧化苏木精即苏木素后，可将细胞核和细胞内核糖体等嗜碱性结构染成蓝紫色，是常用的细胞核复染试剂。本产品是经改良的Mayer’s苏木素，不含酒精，可用于免疫组化DAB或AEC显色后的细胞核复染。其染色强度适中，一般不需要进行分化处理。复染后核着色鲜亮，背景清晰。

注意事项：
1、操作时应佩戴手套。
2、如核染色过深，可用1%盐*(代"酸")酒精分化适当液分化后，再用PBS或去离子水浸泡切 片3-5分钟，使胞核返蓝。
3、为得到最佳实验结果，请根据实验具体需求，调整试剂用量。

操作步骤：
1、免疫组化常规操作完成后，DAB或AEC显色(HRP系统)。
2、显色强度合适时，用自来水冲洗终止显色。
3、甩去样品上的自来水，滴加适量改良型苏木素以覆盖整个组织，复染30秒至3分钟。
4、用自来水完全冲洗掉复染液，PBS或去离子水浸泡切片3-5分钟，使胞核返蓝。
5、脱水、透明、封片。

实验图例：

乳腺癌 CK19 胞浆阳性使用DAB显示试剂盒(WE0323)显色，改良型苏木素(WE0322)复染，结果图

储存条件：室温


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BTN51207 Pfu DNA聚合酶 Pfu DNA Polymerase
ARB11690 人葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)酶免分析 Human glucokinase regulatory protein,gkrp ELISA KIT
ARB13562 兔子可溶性P选择素(sP-Selectin)免费代测 Rabbit soluble P-Selectin,sP-Selectin ELISA KIT
PY01-001-1 蛋白胨(发酵级) 1公斤
ARB13672 兔半胱*酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)酶免分析 Rabbit cystatin c,cys-c ELISA KIT
ARB13323 山羊雌二醇(E2)elisa检测 
PY02-145 改良Skirrow氏琼脂基础 250克
37224-29-6 Sephadex G-75 medium(葡聚糖凝胶G-75)
ARB12301 大鼠抗单核细胞抗体(AMA)含量测试 Rat anti-monocyte antibody,ama ELISA KIT
ARB12729 小鼠5羟色胺(5-HT)酶标法分析 Mouse 5-hydroxytryptamine,5ht ELISA KIT
过氧化*酶(牛肝) Sephacryl S-100 HR 9001-05-2
BTNpyj19 细胞培养基 Cell Culture Medium
PY01-088 聚蛋白胨 250克
ARB11002 人补体1抑制物抗体(C1INH)酶免分析 Human complement 1 inhibitor autoantibody,c1inh ELISA KIT
乙二醇双(2-*基乙基)四乙酸四* Ammonium ferric sulfate dodecahydrate 13368-13-3
ARB10811 人抗百日咳病毒(PT-Ab)ELISA代测服务 Human anti-pertussiu toxin,pt-ab ELISA KIT
N6-异戊烯基腺嘌呤 Creatine phosphokinase(rabbit muscle) 2365-40-4
L-肌肽 DL-2-Aminobutyric acid 305-84-0
F030404 胶体金标记小鼠抗猴IgG抗体 Monoclonal Mouse Anti-Monkey IgG*GOLD
BL1238 SOC液体培养基(干粉)

保存条件：TRIzon Reagent 2～8℃避光保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂自备试剂：*仿、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融，否则影响miRNA提取的量和质量。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RWT和Buffer RW2中加入无水乙醇。
4、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤：

方法一：miRNA富集(可直接用于敏感的下游实验)
1、样品处理
①组织：将组织在液氮中磨碎。每30-50 mg组织加1ml TRIzon Reagent，震荡混匀。样品体积不超过TRIzon Reagent体积的十分之一。
②单层培养细胞：吸去培养液，加入TRIzon Reagent，每10cm2加入1ml TRIzon Reagent(裂解液用量视培养瓶面积而定)。
③细胞悬液：离心得到细胞沉淀，弃上清。每5×106-1×107细胞加入1ml TRIzon Reagent(细胞不需洗涤)。
④血浆或血清：取200μl血浆或血清样本，加入5倍体积TRIzon Reagent，震荡混匀30秒。
2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次，使其充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3、可选步骤：4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心5分钟，取上清，转入一个新的离心管(自备)中(如样品中含较多蛋白、脂肪、多糖等，可选做此步骤)。
4、向上清中加入*仿，每使用1ml TRIzon Reagent加入200μl*仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置5分钟。
5、4℃ 12000rpm离心15分钟，样品分为三层：红色有机相，中间层，无色水相，将上层无色水相移到一个新的离心管(自备)中。
6、向步骤5得到的溶液中加入1/3倍体积的无水乙醇， 混匀，将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RM中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱，请分多次转入。12000rpm离心30秒，离心后弃掉吸附柱RM，保留流出液。
7、向步骤6得到的溶液中加入2/3倍体积的无水乙醇，混匀。
8、将上步所得溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RS。若一次不能将全部溶液加入吸附柱，请分多次转入。12000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
9、向吸附柱RS中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心30秒, 倒掉收集管中的废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
10、向吸附柱RS中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
11、重复步骤10。
12、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RS置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤的目的是将吸附柱RS中残留的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
13、将吸附柱RS置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱中间部位加入30-50μlRNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤13。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱RS中，重复步骤13。

方法二：总RNA的提取(提取的总RNA包括miRNA等其他<200 nt的小分子RNA)
1~5步骤同方法一。
6、向步骤5得到的溶液中加入1.25倍体积的无水乙醇，混匀。
7、将上步所得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱RM中，请分多次转入。12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
8、向吸附柱RM中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
9、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
10、重复步骤9。
11、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RM置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤的目的是将吸附柱RM中残留的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱RM转入新的无RNase离心管中，向吸附柱中间部位加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，室温 12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱RM中，重复步骤12。

储存条件：室温(15～30℃)。


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·50×TAE
编号：WE0216
规格：500ml
本品为50×Tris-乙酸缓冲液，是常用的核酸电泳缓冲液。

·IHC复染试剂(改良型苏木素)
编号：WE0322
英文名称：Improved-Hematoxylin
规格：10ml
苏木精是一种碱性染料，它被氧化后生成氧化苏木精即苏木素后，可将细胞核和细胞内核糖体等嗜碱性结构染成蓝紫色，是常用的细胞核复染试剂。本产品是经改良的Mayer’s苏木素，不含酒精，可用于免疫组化DAB或AEC显色后的细胞核复染。其染色强度适中，一般不需要进行分化处理。复染后核着色鲜亮，背景清晰。

注意事项：
1、操作时应佩戴手套。
2、如核染色过深，可用1%盐*(代"酸")酒精分化适当液分化后，再用PBS或去离子水浸泡切 片3-5分钟，使胞核返蓝。
3、为得到最佳实验结果，请根据实验具体需求，调整试剂用量。

操作步骤：
1、免疫组化常规操作完成后，DAB或AEC显色(HRP系统)。
2、显色强度合适时，用自来水冲洗终止显色。
3、甩去样品上的自来水，滴加适量改良型苏木素以覆盖整个组织，复染30秒至3分钟。
4、用自来水完全冲洗掉复染液，PBS或去离子水浸泡切片3-5分钟，使胞核返蓝。
5、脱水、透明、封片。

实验图例：

乳腺癌 CK19 胞浆阳性使用DAB显示试剂盒(WE0323)显色，改良型苏木素(WE0322)复染，结果图

储存条件：室温


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BTN51207 Pfu DNA聚合酶 Pfu DNA Polymerase
ARB11690 人葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)酶免分析 Human glucokinase regulatory protein,gkrp ELISA KIT
ARB13562 兔子可溶性P选择素(sP-Selectin)免费代测 Rabbit soluble P-Selectin,sP-Selectin ELISA KIT
PY01-001-1 蛋白胨(发酵级) 1公斤
ARB13672 兔半胱*酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)酶免分析 Rabbit cystatin c,cys-c ELISA KIT
ARB13323 山羊雌二醇(E2)elisa检测 
PY02-145 改良Skirrow氏琼脂基础 250克
37224-29-6 Sephadex G-75 medium(葡聚糖凝胶G-75)
ARB12301 大鼠抗单核细胞抗体(AMA)含量测试 Rat anti-monocyte antibody,ama ELISA KIT
ARB12729 小鼠5羟色胺(5-HT)酶标法分析 Mouse 5-hydroxytryptamine,5ht ELISA KIT
过氧化*酶(牛肝) Sephacryl S-100 HR 9001-05-2
BTNpyj19 细胞培养基 Cell Culture Medium
PY01-088 聚蛋白胨 250克
ARB11002 人补体1抑制物抗体(C1INH)酶免分析 Human complement 1 inhibitor autoantibody,c1inh ELISA KIT
乙二醇双(2-*基乙基)四乙酸四* Ammonium ferric sulfate dodecahydrate 13368-13-3
ARB10811 人抗百日咳病毒(PT-Ab)ELISA代测服务 Human anti-pertussiu toxin,pt-ab ELISA KIT
N6-异戊烯基腺嘌呤 Creatine phosphokinase(rabbit muscle) 2365-40-4
L-肌肽 DL-2-Aminobutyric acid 305-84-0
F030404 胶体金标记小鼠抗猴IgG抗体 Monoclonal Mouse Anti-Monkey IgG*GOLD
BL1238 SOC液体培养基(干粉)

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融，否则影响miRNA提取的量和质量。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RWT和Buffer RW2中加入无水乙醇。
4、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤操作步骤动作要迅速。

操作步骤操作步骤：

方法一：miRNA富集(可直接用于敏感的下游实验)方法一：miRNA富集(可直接用于敏感的下游实验)
1、样品处理
①组织：将组织在液氮中磨碎。每30-50 mg组织加1ml TRIzon Reagent，震荡混匀。样品体积不超过TRIzon Reagent体积的十分之一。
②单层培养细胞：吸去培养液，加入TRIzon Reagent，每10cm2加入1ml TRIzon Reagent(裂解液用量视培养瓶面积而定)。
③细胞悬液：离心得到细胞沉淀，弃上清。每5×106-1×107细胞加入1ml TRIzon Reagent(细胞不需洗涤)。
④血浆或血清：取200μl血浆或血清样本，加入5倍体积TRIzon Reagent，震荡混匀30秒。
2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次，使其充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3、可选步骤：4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心5分钟，取上清，转入一个新的离心管(自备)中(如样品中含较多蛋白、脂肪、多糖等，可选做此步骤)。
4、向上清中加入*仿，每使用1ml TRIzon Reagent加入200μl*仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置5分钟。
5、4℃ 12000rpm离心15分钟，样品分为三层：红色有机相，中间层，无色水相，将上层无色水相移到一个新的离心管(自备)中。
6、向步骤5得到的溶液中加入1/3倍体积的无水乙醇， 混匀，将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RM中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱，请分多次转入。12000rpm离心30秒，离心后弃掉吸附柱RM，保留流出液。
7、向步骤6得到的溶液中加入2/3倍体积的无水乙醇，混匀。
8、将上步所得溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RS。若一次不能将全部溶液加入吸附柱，请分多次转入。12000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
9、向吸附柱RS中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心30秒, 倒掉收集管中的废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
10、向吸附柱RS中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
11、重复步骤10。
12、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RS置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤的目的是将吸附柱RS中残留的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
13、将吸附柱RS置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱中间部位加入30-50μlRNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤13。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱RS中，重复步骤13。

方法二：总RNA的提取(提取的总RNA包括miRNA等其他<200 nt的小分子RNA)方法二：总RNA的提取(提取的总RNA包括miRNA等其他<200 nt的小分子RNA)
1~5步骤同方法一。
6、向步骤5得到的溶液中加入1.25倍体积的无水乙醇，混匀。
7、将上步所得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱RM中，请分多次转入。12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
8、向吸附柱RM中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
9、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
10、重复步骤9。
11、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RM置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤的目的是将吸附柱RM中残留的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱RM转入新的无RNase离心管中，向吸附柱中间部位加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，室温 12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱RM中，重复步骤12。

储存条件：室温(15～30℃)。


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·50×TAE
编号：WE0216
规格：500ml
本品为50×Tris-乙酸缓冲液，是常用的核酸电泳缓冲液。

·IHC复染试剂(改良型苏木素)
编号：WE0322
英文名称：Improved-Hematoxylin
规格：10ml
苏木精是一种碱性染料，它被氧化后生成氧化苏木精即苏木素后，可将细胞核和细胞内核糖体等嗜碱性结构染成蓝紫色，是常用的细胞核复染试剂。本产品是经改良的Mayer’s苏木素，不含酒精，可用于免疫组化DAB或AEC显色后的细胞核复染。其染色强度适中，一般不需要进行分化处理。复染后核着色鲜亮，背景清晰。

注意事项注意事项：
1、操作时应佩戴手套。
2、如核染色过深，可用1%盐*(代"酸")酒精分化适当液分化后，再用PBS或去离子水浸泡切 片3-5分钟，使胞核返蓝。
3、为得到最佳实验结果，请根据实验具体需求，调整试剂用量。

操作步骤操作步骤：
1、免疫组化常规操作完成后，DAB或AEC显色(HRP系统)。
2、显色强度合适时，用自来水冲洗终止显色。
3、甩去样品上的自来水，滴加适量改良型苏木素以覆盖整个组织，复染30秒至3分钟。
4、用自来水完全冲洗掉复染液，PBS或去离子水浸泡切片3-5分钟，使胞核返蓝。
5、脱水、透明、封片。

实验图例：实验图例：

乳腺癌 CK19 胞浆阳性使用DAB显示试剂盒(WE0323)显色，改良型苏木素(WE0322)复染，结果图

储存条件：室温


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BTN51207 Pfu DNA聚合酶 Pfu DNA Polymerase
ARB11690 人葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)酶免分析 Human glucokinase regulatory protein,gkrp ELISA KIT
ARB13562 兔子可溶性P选择素(sP-Selectin)免费代测 Rabbit soluble P-Selectin,sP-Selectin ELISA KIT
PY01-001-1 蛋白胨(发酵级) 1公斤
ARB13672 兔半胱*酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)酶免分析 Rabbit cystatin c,cys-c ELISA KIT
ARB13323 山羊雌二醇(E2)elisa检测 
PY02-145 改良Skirrow氏琼脂基础 250克
37224-29-6 Sephadex G-75 medium(葡聚糖凝胶G-75)
ARB12301 大鼠抗单核细胞抗体(AMA)含量测试 Rat anti-monocyte antibody,ama ELISA KIT
ARB12729 小鼠5羟色胺(5-HT)酶标法分析 Mouse 5-hydroxytryptamine,5ht ELISA KIT
过氧化*酶(牛肝) Sephacryl S-100 HR 9001-05-2
BTNpyj19 细胞培养基 Cell Culture Medium
PY01-088 聚蛋白胨 250克
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乙二醇双(2-*基乙基)四乙酸四* Ammonium ferric sulfate dodecahydrate 13368-13-3
ARB10811 人抗百日咳病毒(PT-Ab)ELISA代测服务 Human anti-pertussiu toxin,pt-ab ELISA KIT
N6-异戊烯基腺嘌呤 Creatine phosphokinase(rabbit muscle) 2365-40-4
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