pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE逆转录表达质粒

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钦胜生物
上海
2022-08-01 08:51

上海钦胜生物科技有限公司

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pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE逆转录表达质粒

pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE逆转录表达质粒

基本信息

基本信息

启动子: PGK

启动子: PGK

复制子: pUC ori

复制子: pUC ori

质粒分类: 病毒系列,逆病毒克隆克隆载体

质粒分类: 病毒系列,逆病毒克隆克隆载体

质粒大小: 8500bp

质粒大小: 8500bp

原核抗性: Amp

原核抗性: Amp

筛选标记: Puro

筛选标记: Puro

克隆菌株: Stbl3

克隆菌株: Stbl3

培养条件: 37℃,有氧 LB

培养条件: 37℃,有氧 LB

表达宿主: 哺乳细胞

表达宿主: 哺乳细胞

诱导方式: 无须诱导,瞬时表达

诱导方式: 无须诱导,瞬时表达

5'测序引物: 根据序列设计引物

5'测序引物: 根据序列设计引物

3'测序引物: 根据序列设计引物

3'测序引物: 根据序列设计引物

质粒简介

质粒简介

PMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE is Expression Retroviral, Mammalian, Cre/Lox carrier, its background carrier is MSCV, insert SEQ is inserted. loxp-dsRed-loxp-MCS-eGFP

PMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE is Expression Retroviral, Mammalian, Cre/Lox carrier, its background carrier is MSCV, insert SEQ is inserted. loxp-dsRed-loxp-MCS-eGFP

质粒图谱

质粒图谱

pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE逆转录表达质粒使用说明:

pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE逆转录表达质粒使用说明:

1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;

1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;

2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;

2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;

3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;

3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;

4、42℃热激90s,再冰浴2min;

4、42℃热激90s,再冰浴2min;

5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;

5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;

6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;

6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;

7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;

7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;

8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;

8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;

9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。

9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。

pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE逆转录表达质粒注意事项:

pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE逆转录表达质粒注意事项:

1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。

1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。

2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。

2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。