原代细胞复苏基本技术：原代细胞复苏基本技术：原代细胞复苏基本技术：原代细胞复苏基本技术原代细胞复苏基本技术原代细胞复苏基本技术原代细胞复苏基本技术原代细胞复苏基本技术原代细胞复苏基本技术原代细胞复苏基本技术：：：：：：：
一、从液氮容器中取出原代细胞冻存管后，立即将细胞冻存管直接浸入37℃水浴中，在1－2分钟内摇动细胞冻存管至冻存的细胞融化。一、从液氮容器中取出原代细胞冻存管后，立即将细胞冻存管直接浸入37℃水浴中，在1－2分钟内摇动细胞冻存管至冻存的细胞融化。一、一、一、一、从液氮容器中取出原代细胞冻存管后，立即将细胞冻存管直接浸入37℃水浴中，在1－2分钟内摇动细胞冻存管至冻存的细胞融化。从液氮容器中取出原代细胞冻存管后，立即将细胞冻存管直接浸入37℃水浴中，在1－2分钟内摇动细胞冻存管至冻存的细胞融化。从液氮容器中取出原代细胞冻存管后，立即将细胞冻存管直接浸入从液氮容器中取出原代细胞冻存管后，立即将细胞冻存管直接浸入3737℃水浴中，在℃水浴中，在11－－22分钟内摇动细胞冻存管至冻存的细胞融化。分钟内摇动细胞冻存管至冻存的细胞融化。
二、用75％酒精消毒细胞冻存管后，小心打开盖子，用吸管吸出细胞悬浮液，接种到细胞培养瓶中，5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养。二、用75％酒精消毒细胞冻存管后，小心打开盖子，用吸管吸出细胞悬浮液，接种到细胞培养瓶中，5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养。二、二、二、二、用75％酒精消毒细胞冻存管后，小心打开盖子，用吸管吸出细胞悬浮液，接种到细胞培养瓶中，5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养。用75％酒精消毒细胞冻存管后，小心打开盖子，用吸管吸出细胞悬浮液，接种到细胞培养瓶中，5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养。用用7575％酒精消毒细胞冻存管后，小心打开盖子，用吸管吸出细胞悬浮液，接种到细胞培养瓶中，％酒精消毒细胞冻存管后，小心打开盖子，用吸管吸出细胞悬浮液，接种到细胞培养瓶中，5%CO25%CO2、、95%95%空气、空气、37oC37oC培养箱静置培养。培养箱静置培养。
三、12小时后，更换一次原代细胞培养液（全部液体），继续在5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养 。三、12小时后，更换一次原代细胞培养液（全部液体），继续在5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养 。三、12三、12三、三、1212小时后，更换一次原代细胞培养液小时后，更换一次原代细胞培养液小时后，更换一次原代细胞培养液小时后，更换一次原代细胞培养液（（（（全部液体全部液体全部液体全部液体）））），继续在5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养 。，继续在5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养 。，继续在，继续在5%CO25%CO2、、95%95%空气、空气、37oC37oC培养箱静置培养 。培养箱静置培养 。
注意事项注意事项注意事项注意事项注意事项注意事项注意事项注意事项
一、将冻存管从液氮容器中取出时，要做好防护工作，以免冻伤。一、将冻存管从液氮容器中取出时，要做好防护工作，以免冻伤。一、一、一、一、将冻存管从液氮容器中取出时，要做好防护工作，以免冻伤。将冻存管从液氮容器中取出时，要做好防护工作，以免冻伤。将冻存管从液氮容器中取出时，要做好防护工作，以免冻伤。将冻存管从液氮容器中取出时，要做好防护工作，以免冻伤。
二、取冻存管后立即放入37oC水浴中，缩短解冻时间。二、取冻存管后立即放入37oC水浴中，缩短解冻时间。二、二、二、二、取冻存管后立即放入37oC水浴中，缩短解冻时间。取冻存管后立即放入37oC水浴中，缩短解冻时间。取冻存管后立即放入取冻存管后立即放入37oC37oC水浴中，缩短解冻时间。水浴中，缩短解冻时间。
三、复苏最好用新配制的原代细胞培养体系。三、复苏最好用新配制的原代细胞培养体系。三、三、三、三、复苏最好用新配制的原代细胞培养体系。复苏最好用新配制的原代细胞培养体系。复苏最好用新配制的原代细胞培养体系。复苏最好用新配制的原代细胞培养体系。
原代细胞传代基本技术：原代细胞传代基本技术：原代细胞传代基本技术：原代细胞传代基本技术原代细胞传代基本技术原代细胞传代基本技术原代细胞传代基本技术原代细胞传代基本技术原代细胞传代基本技术原代细胞传代基本技术：：：：：：：
一、选用原代细胞生长状态好（90－95％），生长数量大于5×105进行传代。一、选用原代细胞生长状态好（90－95％），生长数量大于5×105进行传代。一、一、一、一、选用原代细胞生长状态好（90－95％），生长数量大于5×105进行传代。选用原代细胞生长状态好（90－95％），生长数量大于5×105进行传代。选用原代细胞生长状态好（选用原代细胞生长状态好（9090－－9595％），生长数量大于％），生长数量大于55××105105进行传代。进行传代。
二、吸除原代细胞培养液。用含双抗的1×PBS（pH7.4）清洗细胞培养瓶2次。二、吸除原代细胞培养液。用含双抗的1×PBS（pH7.4）清洗细胞培养瓶2次。二、二、二、二、吸除原代细胞培养液。用含双抗的1×PBS（pH7.4）清洗细胞培养瓶2次。吸除原代细胞培养液。用含双抗的1×PBS（pH7.4）清洗细胞培养瓶2次。吸除原代细胞培养液。用含双抗的吸除原代细胞培养液。用含双抗的11××PBSPBS（（pH7.4pH7.4）清洗细胞培养瓶）清洗细胞培养瓶22次。次。
三、3ml细胞消化液加入细胞培养瓶，轻轻摇动，使细胞消化液覆细胞培养瓶底。三、3ml细胞消化液加入细胞培养瓶，轻轻摇动，使细胞消化液覆细胞培养瓶底。三、3三、3三、三、33ml细胞消化液加入细胞培养瓶，轻轻摇动，使细胞消化液覆细胞培养瓶底。ml细胞消化液加入细胞培养瓶，轻轻摇动，使细胞消化液覆细胞培养瓶底。mlml细胞消化液加入细胞培养瓶，轻轻摇动，使细胞消化液覆细胞培养瓶底。细胞消化液加入细胞培养瓶，轻轻摇动，使细胞消化液覆细胞培养瓶底。
四、细胞培养瓶置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养2分钟后，在显微镜下观察原代细胞的消化状态。（平滑肌细胞建议只消化30s）四、细胞培养瓶置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养2分钟后，在显微镜下观察原代细胞的消化状态。（平滑肌细胞建议只消化30s）四、四、四、四、细胞培养瓶置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养细胞培养瓶置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养细胞培养瓶置于细胞培养瓶置于5%CO25%CO2、、95%95%空气、空气、37oC37oC培养箱静置培养培养箱静置培养2222分钟后，在显微镜下观察原代细胞的消化状态。分钟后，在显微镜下观察原代细胞的消化状态。分钟后，在显微镜下观察原代细胞的消化状态。分钟后，在显微镜下观察原代细胞的消化状态。（（（（平滑肌细胞建议只消化30s平滑肌细胞建议只消化30s平滑肌细胞建议只消化平滑肌细胞建议只消化30s30s））））
请记住：如贴壁细胞逐渐趋于圆形、部分悬浮后，用手指轻轻拍打细胞培养侧部至大部分贴壁细胞悬浮，加入3ml血清终止液，终止细胞消化。每种原代细胞的消化时间是有差异的。请记住：如贴壁细胞逐渐趋于圆形、部分悬浮后，用手指轻轻拍打细胞培养侧部至大部分贴壁细胞悬浮，加入3ml血清终止液，终止细胞消化。每种原代细胞的消化时间是有差异的。请记住：如贴壁细胞逐渐趋于圆形、部分悬浮后，用手指轻轻拍打细胞培养侧部至大部分贴壁细胞悬浮，加入请记住：如贴壁细胞逐渐趋于圆形、部分悬浮后，用手指轻轻拍打细胞培养侧部至大部分贴壁细胞悬浮，加入请记住：如贴壁细胞逐渐趋于圆形、部分悬浮后，用手指轻轻拍打细胞培养侧部至大部分贴壁细胞悬浮，加入请记住：如贴壁细胞逐渐趋于圆形、部分悬浮后，用手指轻轻拍打细胞培养侧部至大部分贴壁细胞悬浮，加入请记住：如贴壁细胞逐渐趋于圆形、部分悬浮后，用手指轻轻拍打细胞培养侧部至大部分贴壁细胞悬浮，加入请记住：如贴壁细胞逐渐趋于圆形、部分悬浮后，用手指轻轻拍打细胞培养侧部至大部分贴壁细胞悬浮，加入3ml血清3ml血清3ml血清3ml血清3ml3ml血清血清终止液，终止细胞消化。每种原代细胞的消化时间是有差异的。终止液，终止细胞消化。每种原代细胞的消化时间是有差异的。终止液，终止细胞消化。每种原代细胞的消化时间是有差异的。终止液，终止细胞消化。每种原代细胞的消化时间是有差异的。终止液，终止细胞消化。每种原代细胞的消化时间是有差异的。终止液，终止细胞消化。每种原代细胞的消化时间是有差异的。
五、吹打培养瓶中悬浮细胞若干次，再吸出细胞悬浮液，转入15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。五、吹打培养瓶中悬浮细胞若干次，再吸出细胞悬浮液，转入15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。五、五、五、五、吹打培养瓶中悬浮细胞若干次，再吸出细胞悬浮液，转入15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。吹打培养瓶中悬浮细胞若干次，再吸出细胞悬浮液，转入15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。吹打培养瓶中悬浮细胞若干次，再吸出细胞悬浮液，转入吹打培养瓶中悬浮细胞若干次，再吸出细胞悬浮液，转入15ml15ml离心管中，离心管中，1000rpm1000rpm离心离心55分钟。分钟。
六、弃离心管中液体，加入原代细胞培养液重悬细胞。细胞计数，确定细胞数量。六、弃离心管中液体，加入原代细胞培养液重悬细胞。细胞计数，确定细胞数量。六、六、六、六、弃离心管中液体，加入原代细胞培养液重悬细胞。细胞计数，确定细胞数量。弃离心管中液体，加入原代细胞培养液重悬细胞。细胞计数，确定细胞数量。弃离心管中液体，加入原代细胞培养液重悬细胞。细胞计数，确定细胞数量。弃离心管中液体，加入原代细胞培养液重悬细胞。细胞计数，确定细胞数量。
七、细胞分瓶后，加入适量原代细胞培养液至细胞培养瓶中，置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养24小时。七、细胞分瓶后，加入适量原代细胞培养液至细胞培养瓶中，置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养24小时。七、七、七、七、细胞分瓶后，加入适量原代细胞培养液至细胞培养瓶中，置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养24小时。细胞分瓶后，加入适量原代细胞培养液至细胞培养瓶中，置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养24小时。细胞分瓶后，加入适量原代细胞培养液至细胞培养瓶中，置于细胞分瓶后，加入适量原代细胞培养液至细胞培养瓶中，置于5%CO25%CO2、、95%95%空气、空气、37oC37oC培养箱静置培养培养箱静置培养2424小时。小时。

原代细胞冻存基本技术：原代细胞冻存基本技术：原代细胞冻存基本技术：原代细胞冻存基本技术原代细胞冻存基本技术原代细胞冻存基本技术原代细胞冻存基本技术原代细胞冻存基本技术原代细胞冻存基本技术原代细胞冻存基本技术：：：：：：：
一、选用原代细胞生长状态好（90－95％），生长数量大于5×105进行冻存。一、选用原代细胞生长状态好（90－95％），生长数量大于5×105进行冻存。一、一、一、一、选用原代细胞生长状态好（90－95％），生长数量大于5×105进行冻存。选用原代细胞生长状态好（90－95％），生长数量大于5×105进行冻存。选用原代细胞生长状态好（选用原代细胞生长状态好（9090－－9595％），生长数量大于％），生长数量大于55××105105进行冻存。进行冻存。
二、原代细胞冻存24小时，须换液新鲜原代细胞培养液一次。
三、贴壁的原代细胞需常规用0.25％胰酶消化，将消化后的细胞悬液收集至细胞离心管中。
四、细胞离心管在1000rpm下离心5分钟，小心弃清液。
五、将细胞冻存液加入细胞离心管中，悬浮细胞。细胞计数调整至5×105/ml。
六、将悬浮细胞放置细胞冻存管中。密封细胞冻存管。标明细胞种类和冻存日期。二、原代细胞冻存24小时，须换液新鲜原代细胞培养液一次。
三、贴壁的原代细胞需常规用0.25％胰酶消化，将消化后的细胞悬液收集至细胞离心管中。
四、细胞离心管在1000rpm下离心5分钟，小心弃清液。
五、将细胞冻存液加入细胞离心管中，悬浮细胞。细胞计数调整至5×105/ml。
六、将悬浮细胞放置细胞冻存管中。密封细胞冻存管。标明细胞种类和冻存日期。二、二、二、二、原代细胞冻存24小时，须换液新鲜原代细胞培养液一次。原代细胞冻存24小时，须换液新鲜原代细胞培养液一次。原代细胞冻存原代细胞冻存2424小时，须换液新鲜原代细胞培养液一次。小时，须换液新鲜原代细胞培养液一次。
三、三、三、三、贴壁的原代细胞需常规用0.25％胰酶消化，将消化后的细胞悬液收集至细胞离心管中。贴壁的原代细胞需常规用0.25％胰酶消化，将消化后的细胞悬液收集至细胞离心管中。贴壁的原代细胞需常规用贴壁的原代细胞需常规用0.250.25％胰酶消化，将消化后的细胞悬液收集至细胞离心管中。％胰酶消化，将消化后的细胞悬液收集至细胞离心管中。
四、四、四、四、细胞离心管在1000rpm下离心5分钟，小心弃清液。细胞离心管在1000rpm下离心5分钟，小心弃清液。细胞离心管在细胞离心管在1000rpm1000rpm下离心下离心55分钟，小心弃清液。分钟，小心弃清液。
五、五、五、五、将细胞冻存液加入细胞离心管中，悬浮细胞。细胞计数调整至5×105/ml。将细胞冻存液加入细胞离心管中，悬浮细胞。细胞计数调整至5×105/ml。将细胞冻存液加入细胞离心管中，悬浮细胞。细胞计数调整至将细胞冻存液加入细胞离心管中，悬浮细胞。细胞计数调整至55××105/ml105/ml。。
六、六、六、六、将悬浮细胞放置细胞冻存管中。密封细胞冻存管。标明细胞种类和冻存日期。将悬浮细胞放置细胞冻存管中。密封细胞冻存管。标明细胞种类和冻存日期。将悬浮细胞放置细胞冻存管中。密封细胞冻存管。将悬浮细胞放置细胞冻存管中。密封细胞冻存管。 标明细胞种类和冻存日期。标明细胞种类和冻存日期。
请记住：封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。
请按下列顺序降温保存原代细胞：室温→4℃（60分钟）→ 冰箱冷冻室（60分钟）→ 超低温冰箱（－80℃过夜）→ 液氮。
原代细胞冻存液常用配方：50%完全原代细胞培养液（不含有血清、添加剂、双抗）+ 40%胎牛血清 + 10%DMSO请记住：封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。
请按下列顺序降温保存原代细胞：室温→4℃（60分钟）→ 冰箱冷冻室（60分钟）→ 超低温冰箱（－80℃过夜）→ 液氮。
原代细胞冻存液常用配方：50%完全原代细胞培养液（不含有血清、添加剂、双抗）+ 40%胎牛血清 + 10%DMSO请记住：请记住：请记住：请记住：请记住：请记住：封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。
请按下列顺序降温保存原代细胞：室温→4℃（请按下列顺序降温保存原代细胞：室温→4℃（请按下列顺序降温保存原代细胞：室温请按下列顺序降温保存原代细胞：室温→→44℃（℃（60606060分钟）→ 冰箱冷冻室（分钟）→ 冰箱冷冻室（分钟）分钟）→ 冰箱冷冻室（→ 冰箱冷冻室（60606060分钟）→ 超低温冰箱（－80℃过夜）→ 液氮。分钟）→ 超低温冰箱（－80℃过夜）→ 液氮。分钟）分钟）→ 超低温冰箱（－→ 超低温冰箱（－8080℃过夜）→ 液氮。℃过夜）→ 液氮。
原代细胞冻存液常用配方原代细胞冻存液常用配方原代细胞冻存液常用配方原代细胞冻存液常用配方原代细胞冻存液常用配方原代细胞冻存液常用配方：：：：50505050%完全原代细胞培养液（不含有血清、添加剂、双抗）+ %完全原代细胞培养液（不含有血清、添加剂、双抗）+ %%完全原代细胞培养液（不含有血清、添加剂、双抗）完全原代细胞培养液（不含有血清、添加剂、双抗）+ + 40404040%胎牛血清 + 10%DMSO%胎牛血清 + 10%DMSO%%胎牛血清 胎牛血清 + 10%DMSO+ 10%DMSO

原代细胞免疫荧光鉴定：原代细胞免疫荧光鉴定：原代细胞免疫荧光鉴定：原代细胞免疫荧光鉴定：原代细胞免疫荧光鉴定：原代细胞免疫荧光鉴定：原代细胞免疫荧光鉴定：原代细胞免疫荧光鉴定：
一、原代培养的细胞用4%的多巨甲醛一、原代培养的细胞用4%的多巨甲醛一一一一一、原代培养的细胞用4%的多、原代培养的细胞用4%的多、原代培养的细胞用4%的多、原代培养的细胞用、原代培养的细胞用 4%的多4%的多巨甲醛巨甲醛巨甲醛巨甲醛巨甲醛，室温固15 min，0.1% Triton-X-100 透膜 10 min，PBS 清洗 3 遍，每5 min，，室温固15 min，0.1% Triton-X-100 透膜 10 min，PBS 清洗 3 遍，每5 min，，室温固15 min，0.1% Triton-X-100 透膜 10 min，PBS 清洗 3 遍，每5 min，，室温固15 min，0.1% Triton-X-100 透膜 10 min，PBS 清洗 3 遍，每5 min，，室温固15 min，0.1% Triton-X-100 透膜 10 min，PBS 清洗 3 遍，每5 min，，室温固15 min，0.1% Triton-X-100 透膜 10 min，PBS 清洗 3 遍，每5 min，，室温固15 min，0.1% Triton-X-100 透膜 10 min，PBS 清洗 3 遍，每5 min，
二、山羊血清室温封闭45 min，一抗 Insulin，兔多抗，使用浓度 1 ∶ 50；Glucagon 抗体，鼠单抗，使用浓度 1 ∶ 200；二、山羊血清室温封闭45 min，一抗 Insulin，兔多抗，使用浓度 1 ∶ 50；Glucagon 抗体，鼠单抗，使用浓度 1 ∶ 200；二二二二二、、、、、山羊血清室温封闭45 min，一抗 Insulin，兔多抗，使用浓度 1 ∶ 50；Glucagon 抗体，鼠单抗，使用浓度 1 ∶ 200；山羊血清室温封闭45 min，一抗 Insulin，兔多抗，使用浓度 1 ∶ 50；Glucagon 抗体，鼠单抗，使用浓度 1 ∶ 200；山羊血清室温封闭45 min，一抗 Insulin，兔多抗，使用浓度 1 ∶ 50；Glucagon 抗体，鼠单抗，使用浓度 1 ∶ 200；山羊血清室温封闭山羊血清室温封闭45 min，一抗 Insulin，兔多抗，使用浓度 1 ∶ 50；Glucagon 抗体，鼠单抗，使用浓度 1 ∶ 200；45 min，一抗 Insulin，兔多抗，使用浓度 1 ∶ 50；Glucagon 抗体，鼠单抗，使用浓度 1 ∶ 200；
Pancreatic Polypeptide（pp）抗体，兔多抗，使用浓度1∶200，4 ℃孵育过夜，PBS 清洗 3 遍，每次 5 min，Pancreatic Polypeptide（pp）抗体，兔多抗，使用浓度1∶200，4 ℃孵育过夜，PBS 清洗 3 遍，每次 5 min，Pancreatic Polypeptide（pp）抗体，兔多抗，使用浓度1∶200，4 ℃孵育过夜，PBS 清洗 3 遍，每次 5 min，Pancreatic Polypeptide（pp）抗体，兔多抗，使用浓度1∶200，4 ℃孵育过夜，PBS 清洗 3 遍，每次 5 min，Pancreatic Polypeptide（pp）抗体，兔多抗，使用浓度1∶200，4 ℃孵育过夜，PBS 清洗 3 遍，每次 5 min，Pancreatic Polypeptide（pp）抗体，兔多抗，使用浓度1∶200，4 ℃孵育过夜，PBS 清洗 3 遍，每次 5 min，Pancreatic Polypeptide（pp）抗体，兔多抗，使用浓度1∶200，4 ℃孵育过夜，PBS 清洗 3 遍，每次 5 min，
三、加入相应的二抗Alexa Flour 594 （山羊抗兔）或FITC（山羊抗小鼠），室温避光孵育 45 min，PBS三、加入相应的二抗Alexa Flour 594 （山羊抗兔）或FITC（山羊抗小鼠），室温避光孵育 45 min，PBS三三三三三、、、、、加入相应的二抗Alexa Flour 594 （山羊抗兔）或FITC（山羊抗小鼠），室温避光孵育 45 min，PBS加入相应的二抗Alexa Flour 594 （山羊抗兔）或FITC（山羊抗小鼠），室温避光孵育 45 min，PBS加入相应的二抗Alexa Flour 594 （山羊抗兔）或FITC（山羊抗小鼠），室温避光孵育 45 min，PBS加入相应的二抗加入相应的二抗 Alexa Flour 594 （山羊抗兔）或FITC（山羊抗小鼠），室温避光孵育 45 min，PBSAlexa Flour 594 （山羊抗兔）或FITC（山羊抗小鼠），室温避光孵育 45 min，PBS
清洗3 遍，每次 5 min，清洗3 遍，每次 5 min，清洗3 遍，每次 5 min，清洗3 遍，每次 5 min，清洗3 遍，每次 5 min，清洗清洗 3 遍，每次 5 min，3 遍，每次 5 min，
四、DAPI 复染核，PBS 清洗 3遍，每次 5 min，普通荧光显微镜下观察并照相.四、DAPI 复染核，PBS 清洗 3遍，每次 5 min，普通荧光显微镜下观察并照相.四、四、四、四、四、DAPI 复染核，PBS 清洗 3遍，每次 5 min，普通荧光显微镜下观察并照相.DAPI 复染核，PBS 清洗 3遍，每次 5 min，普通荧光显微镜下观察并照相.DAPI 复染核，PBS 清洗 3遍，每次 5 min，普通荧光显微镜下观察并照相.DAPI 复染核，PBS 清洗 3遍，每次 5 min，普通荧光显微镜下观察并照相.DAPI 复染核，PBS 清洗 3遍，每次 5 min，普通荧光显微镜下观察并照相.
五、实验结果：五、实验结果：五、五、五、五、五、实验结果：实验结果：实验结果：实验结果：实验结果：
Insulin（200X）：图中红色荧光为Insulin阳性，阳性率＞90%，即：细胞纯度＞90%


Insulin（200X）：图中红色荧光为Insulin阳性，阳性率＞90%，即：细胞纯度＞90%


Insulin（200X）：图中红色荧光为Insulin阳性，阳性率＞90%，即：细胞纯度＞90%


Insulin（200X）：图中红色荧光为Insulin阳性，阳性率＞90%，即：细胞纯度＞90%


Insulin（200X）：图中红色荧光为Insulin阳性，阳性率＞90%，即：细胞纯度＞90%


Insulin（200X）：图中红色荧光为Insulin阳性，阳性率＞90%，即：细胞纯度＞90%


Insulin（200X）：图中红色荧光为Insulin阳性，阳性率＞90%，即：细胞纯度＞90%




原代细胞培养客户须知：原代细胞培养客户须知：原代细胞培养客户须知：原代细胞培养客户须知原代细胞培养客户须知原代细胞培养客户须知原代细胞培养客户须知原代细胞培养客户须知原代细胞培养客户须知：：：：：：
一、请客户收到本公司原代细胞产品后，立即对物品包装、细胞培养瓶等拍照，如有疑问或问题，须在24小时内通知本公司，提供照片和书面说明。一、请客户收到本公司原代细胞产品后，立即对物品包装、细胞培养瓶等拍照，如有疑问或问题，须在24小时内通知本公司，提供照片和书面说明。一、一、一、一、请客户收到请客户收到请客户收到请客户收到本公司本公司本公司本公司原代细胞产品后，立即对原代细胞产品后，立即对原代细胞产品后，立即对原代细胞产品后，立即对物品物品物品物品包装、细胞培养瓶等拍照，如有疑问或问题，须在24小时内通知包装、细胞培养瓶等拍照，如有疑问或问题，须在24小时内通知包装、细胞培养瓶等拍照，如有疑问或问题，须在包装、细胞培养瓶等拍照，如有疑问或问题，须在2424小时内通知小时内通知本本本本公司，提供照片和书面说明。公司，提供照片和书面说明。公司，提供照片和书面说明。公司，提供照片和书面说明。
客户收到非冻存原代细胞后，请将原装的原代细胞瓶放入细胞培养箱内培养，4-12小时后再使用。75ml培养液含添加剂，血清及双抗，可吸出70ml左右直接使用，无需过滤。注意观察细胞情况，待贴壁率达到90%以上再按传代说明操作。客户收到非冻存原代细胞后，请将原装的原代细胞瓶放入细胞培养箱内培养，4-12小时后再使用。75ml培养液含添加剂，血清及双抗，可吸出70ml左右直接使用，无需过滤。注意观察细胞情况，待贴壁率达到90%以上再按传代说明操作。客户收到非冻存原代细胞后，请将原装的原代细胞瓶放入细胞培养箱内培养，4客户收到非冻存原代细胞后，请将原装的原代细胞瓶放入细胞培养箱内培养，4客户收到非冻存原代细胞后，请将原装的原代细胞瓶放入细胞培养箱内培养，客户收到非冻存原代细胞后，请将原装的原代细胞瓶放入细胞培养箱内培养，44-12-12-12-12小时后再使用。75ml培养液含添加剂，血清及双抗，可吸出70ml左右直接使用，无需过滤小时后再使用。75ml培养液含添加剂，血清及双抗，可吸出70ml左右直接使用，无需过滤小时后再使用。小时后再使用。75ml75ml培养液含添加剂，血清及双抗，可吸出培养液含添加剂，血清及双抗，可吸出70ml70ml左右直接使用，无需过滤左右直接使用，无需过滤。。。。注意观察细胞情况，待贴壁率达到90%以上再按注意观察细胞情况，待贴壁率达到90%以上再按注意观察细胞情况，待贴壁率达到注意观察细胞情况，待贴壁率达到90%90%以上再按以上再按传代传代传代传代说明操作说明操作说明操作说明操作。。。。
二、请客户使用T25细胞瓶传代，一瓶传二瓶。二、请客户使用T25细胞瓶传代，一瓶传二瓶。二、二、二、二、请客户请客户请客户请客户使用使用使用使用T25细胞瓶传代，一瓶传二瓶T25细胞瓶传代，一瓶传二瓶T25T25细胞瓶传代，一瓶传二瓶细胞瓶传代，一瓶传二瓶。。。。
三、谨记：培养原代细胞前三天，需对原代细胞生长状态进行拍照并注明和标记时间。若原代细胞培养生长存在质量问题，需向本公司提供原代细胞培养生长的照片和书面说明。三、谨记：培养原代细胞前三天，需对原代细胞生长状态进行拍照并注明和标记时间。若原代细胞培养生长存在质量问题，需向本公司提供原代细胞培养生长的照片和书面说明。三、三、三、三、谨记谨记谨记谨记谨记谨记：培养原代细胞前三天，：培养原代细胞前三天，：培养原代细胞前三天，：培养原代细胞前三天，需需需需对原代细胞生长状态进行拍照并注明和标记时间。若原代细胞培养生长存在质量问题，对原代细胞生长状态进行拍照并注明和标记时间。若原代细胞培养生长存在质量问题，对原代细胞生长状态进行拍照并注明和标记时间。若原代细胞培养生长存在质量问题，对原代细胞生长状态进行拍照并注明和标记时间。若原代细胞培养生长存在质量问题，需需需需向向向向本本本本公司提供原代细胞培养生长的照片和书面说明。公司提供原代细胞培养生长的照片和书面说明。公司提供原代细胞培养生长的照片和书面说明。公司提供原代细胞培养生长的照片和书面说明。
四、请客户使用原代细胞第3代以内。原代细胞培养传代过多，可能造成原代细胞的质量问题。四、请客户使用原代细胞第3代以内。原代细胞培养传代过多，可能造成原代细胞的质量问题。四、四、四、四、请客户使用原代细胞第请客户使用原代细胞第请客户使用原代细胞第请客户使用原代细胞第3333代以内。原代细胞培养传代过多，可能造成原代细胞的质量问题。代以内。原代细胞培养传代过多，可能造成原代细胞的质量问题。代以内。原代细胞培养传代过多，可能造成原代细胞的质量问题。代以内。原代细胞培养传代过多，可能造成原代细胞的质量问题。

本产品仅用于科学研究使用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用本产品仅用于科学研究使用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用本产品仅用于科学研究使用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用本产品仅用于科学研究使用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用本产品仅用于科学研究使用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用本产品仅用于科学研究使用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用本产品仅用于科学研究使用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用本产品仅用于科学研究使用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用本产品仅用于科学研究使用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用