小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC操作详细步骤
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小鼠肾动脉内皮细胞
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1.细胞复苏1.细胞复苏1.1.1.1.1.1.细胞复苏细胞复苏细胞复苏细胞复苏细胞复苏细胞复苏细胞复苏
1.1 离心法1.1 离心法1.1 1.1 1.1 1.1 离心法离心法离心法离心法离心法
1.1.1 准备一个T25 的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支15ml 1.1.1 准备一个T25 的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支15ml 1.1.1 1.1.1 1.1.1 1.1.1 准备一个准备一个准备一个准备一个准备一个 T25 T25 T25 T25 的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支 15ml 15ml 15ml 15ml
离心管，离心管中加入4-5ml 细胞完全培养基。离心管，离心管中加入4-5ml 细胞完全培养基。离心管，离心管中加入离心管，离心管中加入离心管，离心管中加入离心管，离心管中加入离心管，离心管中加入 4-5ml 4-5ml 4-5ml 4-5ml 细胞完全培养基。细胞完全培养基。细胞完全培养基。细胞完全培养基。细胞完全培养基。
1.1.2 取出细胞冻存管，在37 度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安1.1.2 取出细胞冻存管，在37 度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安1.1.2 1.1.2 1.1.2 1.1.2 取出细胞冻存管，在取出细胞冻存管，在取出细胞冻存管，在取出细胞冻存管，在取出细胞冻存管，在 37 37 37 37 度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安
全柜。全柜。全柜。全柜。全柜。全柜。全柜。
1.1.3 将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，1000 转离心5 分钟。1.1.3 将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，1000 转离心5 分钟。1.1.3 1.1.3 1.1.3 1.1.3 将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，1000 1000 1000 1000 转离心转离心转离心转离心转离心 5 5 5 5 分钟。分钟。分钟。分钟。分钟。
1.1.4 倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。1.1.4 倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。1.1.4 1.1.4 1.1.4 1.1.4 倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。
1.1.5 将重悬好的细胞转移到T25 细胞培养瓶，补充培养基到8ml 左右，十字摇晃，将1.1.5 将重悬好的细胞转移到T25 细胞培养瓶，补充培养基到8ml 左右，十字摇晃，将1.1.5 1.1.5 1.1.5 1.1.5 将重悬好的细胞转移到将重悬好的细胞转移到将重悬好的细胞转移到将重悬好的细胞转移到将重悬好的细胞转移到 T25 T25 T25 T25 细胞培养瓶，补充培养基到细胞培养瓶，补充培养基到细胞培养瓶，补充培养基到细胞培养瓶，补充培养基到细胞培养瓶，补充培养基到 8ml 8ml 8ml 8ml 左右，十字摇晃，将左右，十字摇晃，将左右，十字摇晃，将左右，十字摇晃，将左右，十字摇晃，将
细胞铺匀后放入培养箱培养。细胞铺匀后放入培养箱培养。细胞铺匀后放入培养箱培养。细胞铺匀后放入培养箱培养。细胞铺匀后放入培养箱培养。细胞铺匀后放入培养箱培养。细胞铺匀后放入培养箱培养。
1.2 不离心法1.2 不离心法1.2 1.2 1.2 1.2 不离心法不离心法不离心法不离心法不离心法
1.2.1 准备一个T25 的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，培养瓶中加1.2.1 准备一个T25 的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，培养瓶中加1.2.1 1.2.1 1.2.1 1.2.1 准备一个准备一个准备一个准备一个准备一个 T25 T25 T25 T25 的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，培养瓶中加的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，培养瓶中加的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，培养瓶中加的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，培养瓶中加的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，培养瓶中加
入8ml 左右培养基。入8ml 左右培养基。入入入入入 8ml 8ml 8ml 8ml 左右培养基。左右培养基。左右培养基。左右培养基。左右培养基。
1.2.2 取出细胞冻存管，在37 度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安1.2.2 取出细胞冻存管，在37 度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安1.2.2 1.2.2 1.2.2 1.2.2 取出细胞冻存管，在取出细胞冻存管，在取出细胞冻存管，在取出细胞冻存管，在取出细胞冻存管，在 37 37 37 37 度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安
全柜。全柜。全柜。全柜。全柜。全柜。全柜。
1.2.3 将细胞悬液转移到加有培养基的培养瓶中，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱1.2.3 将细胞悬液转移到加有培养基的培养瓶中，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱1.2.3 1.2.3 1.2.3 1.2.3 将细胞悬液转移到加有培养基的培养瓶中，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱将细胞悬液转移到加有培养基的培养瓶中，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱将细胞悬液转移到加有培养基的培养瓶中，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱将细胞悬液转移到加有培养基的培养瓶中，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱将细胞悬液转移到加有培养基的培养瓶中，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱
培养，接种16 小时后更换培养基。培养，接种16 小时后更换培养基。培养，接种培养，接种培养，接种培养，接种培养，接种 16 16 16 16 小时后更换培养基。小时后更换培养基。小时后更换培养基。小时后更换培养基。小时后更换培养基。
2.小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC传代2.小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC传代2.2.2.2.2.2.小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC小鼠肾动脉内皮细胞小鼠肾动脉内皮细胞MRAECMRAEC传代传代传代传代传代传代传代
2.1 准备细胞完全培养基，细胞培养瓶，胰酶（2.1 准备细胞完全培养基，细胞培养瓶，胰酶（2.1 2.1 2.1 2.1 准备细胞完全培养基，细胞培养瓶，胰酶（准备细胞完全培养基，细胞培养瓶，胰酶（准备细胞完全培养基，细胞培养瓶，胰酶（准备细胞完全培养基，细胞培养瓶，胰酶（准备细胞完全培养基，细胞培养瓶，胰酶（
0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。0.25%Trypsin-0.53mM EDTA0.25%Trypsin-0.53mM EDTA0.25%Trypsin-0.53mM EDTA0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），），），），），DPBSDPBSDPBSDPBS。。。。。
2.2 弃上清，并加2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞1-2 次。2.2 弃上清，并加2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞1-2 次。2.2 2.2 2.2 2.2 弃上清，并加弃上清，并加弃上清，并加弃上清，并加弃上清，并加 2-3mlDPBS 2-3mlDPBS 2-3mlDPBS 2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞轻柔冲洗培养瓶内细胞轻柔冲洗培养瓶内细胞轻柔冲洗培养瓶内细胞轻柔冲洗培养瓶内细胞 1-2 1-2 1-2 1-2 次。次。次。次。次。
2.3 加入1ml 胰酶，室温或者37 度消化，直到细胞成片脱落，加入3-4ml 完全培养基终2.3 加入1ml 胰酶，室温或者37 度消化，直到细胞成片脱落，加入3-4ml 完全培养基终2.3 2.3 2.3 2.3 加入加入加入加入加入 1ml 1ml 1ml 1ml 胰酶，室温或者胰酶，室温或者胰酶，室温或者胰酶，室温或者胰酶，室温或者 37 37 37 37 度消化，直到细胞成片脱落，加入度消化，直到细胞成片脱落，加入度消化，直到细胞成片脱落，加入度消化，直到细胞成片脱落，加入度消化，直到细胞成片脱落，加入 3-4ml 3-4ml 3-4ml 3-4ml 完全培养基终完全培养基终完全培养基终完全培养基终完全培养基终
止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。（注意：消化时间与止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。（注意：消化时间与止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。（注意：消化时间与（注意：消化时间与（注意：消化时间与（注意：消化时间与（注意：消化时间与（注意：消化时间与（注意：消化时间与
所用胰酶效价，消化时候细胞密度以及温度等因素有关，建议第一次消化时候，多在显微所用胰酶效价，消化时候细胞密度以及温度等因素有关，建议第一次消化时候，多在显微所用胰酶效价，消化时候细胞密度以及温度等因素有关，建议第一次消化时候，多在显微所用胰酶效价，消化时候细胞密度以及温度等因素有关，建议第一次消化时候，多在显微所用胰酶效价，消化时候细胞密度以及温度等因素有关，建议第一次消化时候，多在显微所用胰酶效价，消化时候细胞密度以及温度等因素有关，建议第一次消化时候，多在显微所用胰酶效价，消化时候细胞密度以及温度等因素有关，建议第一次消化时候，多在显微所用胰酶效价，消化时候细胞密度以及温度等因素有关，建议第一次消化时候，多在显微所用胰酶效价，消化时候细胞密度以及温度等因素有关，建议第一次消化时候，多在显微
镜下观察，以找到最佳消化时间）镜下观察，以找到最佳消化时间）镜下观察，以找到最佳消化时间）镜下观察，以找到最佳消化时间）镜下观察，以找到最佳消化时间）镜下观察，以找到最佳消化时间）镜下观察，以找到最佳消化时间）镜下观察，以找到最佳消化时间）镜下观察，以找到最佳消化时间）
2.4 收集细胞悬液，1000 转离心5 分钟，弃上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细2.4 收集细胞悬液，1000 转离心5 分钟，弃上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细2.4 2.4 2.4 2.4 收集细胞悬液，收集细胞悬液，收集细胞悬液，收集细胞悬液，收集细胞悬液，1000 1000 1000 1000 转离心转离心转离心转离心转离心 5 5 5 5 分钟，弃上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细分钟，弃上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细分钟，弃上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细分钟，弃上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细分钟，弃上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细
胞团弹散后加入培养基混匀。胞团弹散后加入培养基混匀。胞团弹散后加入培养基混匀。胞团弹散后加入培养基混匀。胞团弹散后加入培养基混匀。胞团弹散后加入培养基混匀。胞团弹散后加入培养基混匀。
2.5 将重悬好的细胞按比例分装至T25 细胞培养瓶，补充培养基到8ml 左右，十字摇晃，2.5 将重悬好的细胞按比例分装至T25 细胞培养瓶，补充培养基到8ml 左右，十字摇晃，2.5 2.5 2.5 2.5 将重悬好的细胞按比例分装至将重悬好的细胞按比例分装至将重悬好的细胞按比例分装至将重悬好的细胞按比例分装至将重悬好的细胞按比例分装至 T25 T25 T25 T25 细胞培养瓶，补充培养基到细胞培养瓶，补充培养基到细胞培养瓶，补充培养基到细胞培养瓶，补充培养基到细胞培养瓶，补充培养基到 8ml 8ml 8ml 8ml 左右，十字摇晃，左右，十字摇晃，左右，十字摇晃，左右，十字摇晃，左右，十字摇晃，
将细胞铺匀后放入培养箱培养。将细胞铺匀后放入培养箱培养。将细胞铺匀后放入培养箱培养。将细胞铺匀后放入培养箱培养。将细胞铺匀后放入培养箱培养。将细胞铺匀后放入培养箱培养。将细胞铺匀后放入培养箱培养。
3.小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC冻存3.小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC冻存3.3.3.3.3.3.小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC小鼠肾动脉内皮细胞小鼠肾动脉内皮细胞MRAECMRAEC冻存冻存冻存冻存冻存冻存冻存
3.1 准备细胞冻存液，细胞冻存管，胰酶（3.1 准备细胞冻存液，细胞冻存管，胰酶（3.1 3.1 3.1 3.1 准备细胞冻存液，细胞冻存管，胰酶（准备细胞冻存液，细胞冻存管，胰酶（准备细胞冻存液，细胞冻存管，胰酶（准备细胞冻存液，细胞冻存管，胰酶（准备细胞冻存液，细胞冻存管，胰酶（
0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。0.25%Trypsin-0.53mM EDTA0.25%Trypsin-0.53mM EDTA0.25%Trypsin-0.53mM EDTA0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），），），），），DPBSDPBSDPBSDPBS。。。。。
3.2 弃上清，并加2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞1-2 次。3.2 弃上清，并加2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞1-2 次。3.2 3.2 3.2 3.2 弃上清，并加弃上清，并加弃上清，并加弃上清，并加弃上清，并加 2-3mlDPBS 2-3mlDPBS 2-3mlDPBS 2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞轻柔冲洗培养瓶内细胞轻柔冲洗培养瓶内细胞轻柔冲洗培养瓶内细胞轻柔冲洗培养瓶内细胞 1-2 1-2 1-2 1-2 次。次。次。次。次。
3.3 加入1ml 胰酶，室温或者37 度消化，直到细胞成片脱落，加入完全培养基终止消3.3 加入1ml 胰酶，室温或者37 度消化，直到细胞成片脱落，加入完全培养基终止消3.3 3.3 3.3 3.3 加入加入加入加入加入 1ml 1ml 1ml 1ml 胰酶，室温或者胰酶，室温或者胰酶，室温或者胰酶，室温或者胰酶，室温或者 37 37 37 37 度消化，直到细胞成片脱落，加入完全培养基终止消度消化，直到细胞成片脱落，加入完全培养基终止消度消化，直到细胞成片脱落，加入完全培养基终止消度消化，直到细胞成片脱落，加入完全培养基终止消度消化，直到细胞成片脱落，加入完全培养基终止消
化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。
3.4 收集细胞悬液，1000 转离心5 分钟，弃上清。3.4 收集细胞悬液，1000 转离心5 分钟，弃上清。3.4 3.4 3.4 3.4 收集细胞悬液，收集细胞悬液，收集细胞悬液，收集细胞悬液，收集细胞悬液，1000 1000 1000 1000 转离心转离心转离心转离心转离心 5 5 5 5 分钟，弃上清。分钟，弃上清。分钟，弃上清。分钟，弃上清。分钟，弃上清。
3.5 加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度0.8-1.5×106细胞/ml。3.5 加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度0.8-1.5×106细胞/ml。3.5 3.5 3.5 3.5 加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度 0.8-1.50.8-1.50.8-1.50.8-1.5××××101010106666细胞细胞细胞细胞细胞/ml/ml/ml/ml。。。。。
3.6 将冻存管放入程序降温盒，并放到-80℃冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。3.6 将冻存管放入程序降温盒，并放到-80℃冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。3.6 3.6 3.6 3.6 将冻存管放入程序降温盒，并放到将冻存管放入程序降温盒，并放到将冻存管放入程序降温盒，并放到将冻存管放入程序降温盒，并放到将冻存管放入程序降温盒，并放到-80℃-80℃-80℃-80℃冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。
4.小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC注意事项4.小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC注意事项4.4.4.4.4.4.小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC小鼠肾动脉内皮细胞MRAEC小鼠肾动脉内皮细胞小鼠肾动脉内皮细胞MRAECMRAEC注意事项注意事项注意事项注意事项注意事项注意事项注意事项
4.1 建议收到细胞后先用我们配套的培养基和血清。收到活细胞的客户培养瓶中的培养4.1 建议收到细胞后先用我们配套的培养基和血清。收到活细胞的客户培养瓶中的培养4.1 4.1 4.1 4.1 建议收到细胞后先用我们配套的培养基和血清。收到活细胞的客户培养瓶中的培养建议收到细胞后先用我们配套的培养基和血清。收到活细胞的客户培养瓶中的培养建议收到细胞后先用我们配套的培养基和血清。收到活细胞的客户培养瓶中的培养建议收到细胞后先用我们配套的培养基和血清。收到活细胞的客户培养瓶中的培养建议收到细胞后先用我们配套的培养基和血清。收到活细胞的客户培养瓶中的培养
基可回收使用，保存在4 度可使用一周。基可回收使用，保存在4 度可使用一周。基可回收使用，保存在基可回收使用，保存在基可回收使用，保存在基可回收使用，保存在基可回收使用，保存在 4 4 4 4 度可使用一周。度可使用一周。度可使用一周。度可使用一周。度可使用一周。
4.2 不同实验室操作上会有些许差异，为了避免细胞不适应，请先按照说明书推荐的方4.2 不同实验室操作上会有些许差异，为了避免细胞不适应，请先按照说明书推荐的方4.2 4.2 4.2 4.2 不同实验室操作上会有些许差异，为了避免细胞不适应，请先按照说明书推荐的方不同实验室操作上会有些许差异，为了避免细胞不适应，请先按照说明书推荐的方不同实验室操作上会有些许差异，为了避免细胞不适应，请先按照说明书推荐的方不同实验室操作上会有些许差异，为了避免细胞不适应，请先按照说明书推荐的方不同实验室操作上会有些许差异，为了避免细胞不适应，请先按照说明书推荐的方
法和操作步骤培养，待细胞冻存后可根据自己的习惯操作看细胞是否能够适应。法和操作步骤培养，待细胞冻存后可根据自己的习惯操作看细胞是否能够适应。法和操作步骤培养，待细胞冻存后可根据自己的习惯操作看细胞是否能够适应。法和操作步骤培养，待细胞冻存后可根据自己的习惯操作看细胞是否能够适应。法和操作步骤培养，待细胞冻存后可根据自己的习惯操作看细胞是否能够适应。法和操作步骤培养，待细胞冻存后可根据自己的习惯操作看细胞是否能够适应。法和操作步骤培养，待细胞冻存后可根据自己的习惯操作看细胞是否能够适应。
4.3 建议收到细胞后，前几代及时冻存一些细胞，并最好是可以多冻存几个批次。4.3 建议收到细胞后，前几代及时冻存一些细胞，并最好是可以多冻存几个批次。4.3 4.3 4.3 4.3 建议收到细胞后，前几代及时冻存一些细胞，并最好是可以多冻存几个批次。建议收到细胞后，前几代及时冻存一些细胞，并最好是可以多冻存几个批次。建议收到细胞后，前几代及时冻存一些细胞，并最好是可以多冻存几个批次。建议收到细胞后，前几代及时冻存一些细胞，并最好是可以多冻存几个批次。建议收到细胞后，前几代及时冻存一些细胞，并最好是可以多冻存几个批次。