基本信息基本信息基本信息基本信息基本信息
名称：名称：名称：名称：pCMV-SPORT6-KRAS（1点突变）人源基因质粒
别称: 别称: 别称别称: : : NM_004985.4;C-K-RAS;c-Ki-ras2;CFC2;K
复制子:复制子:复制子复制子::: pUC
原核抗性:原核抗性:原核抗性原核抗性::: Amp
克隆菌株:克隆菌株:克隆菌株克隆菌株::: DH5a
培养条件:培养条件:培养条件培养条件::: 37度

质粒属性质粒属性质粒属性质粒属性质粒属性
载体宿主：载体宿主：载体宿主：载体宿主：大肠杆菌
载体用途：载体用途：载体用途：载体用途：PCR模板
基因种属：基因种属：基因种属：基因种属：人
基因类型：基因类型：基因类型：基因类型：cDNA
原核抗性：原核抗性：原核抗性：原核抗性：Amp
真核抗性：真核抗性：真核抗性：真核抗性：
荧光蛋白：荧光蛋白：荧光蛋白：荧光蛋白：

质粒简介质粒简介质粒简介质粒简介质粒简介
pCMV-SPORT6-KRAS（1点突变）人源基因质粒。

质粒图谱：祥询质粒图谱：祥询质粒图谱：祥询质粒图谱：祥询质粒图谱：祥询


质粒序列：祥询质粒序列：祥询质粒序列：祥询质粒序列：祥询质粒序列：祥询

质粒菌株产品操作说明书质粒菌株产品操作说明书质粒菌株产品操作说明书质粒菌株产品操作说明书质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程一、扩增流程一、扩增流程一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序） 1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序） 1 1 1、质粒干粉（常温运输，存于、质粒干粉（常温运输，存于-20-20-20度，度，909090天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；①①①收到质粒干粉后请先收到质粒干粉后请先5000rpm5000rpm5000rpm离心离心1min1min1min，再加入，再加入20μl ddH2O20μl ddH2O20μl ddH2O去离子水溶解质粒；去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）②②②取取111支支100μl 100μl 100μl 感受态于冰上解冻感受态于冰上解冻10min10min10min，加入，加入2μl2μl2μl质粒，再冰浴质粒，再冰浴30min30min30min后，后，424242℃℃℃热激热激60s60s60s，不要搅动，再冰浴，不要搅动，再冰浴2min2min2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；③③③加入加入900μl900μl900μl无抗的无抗的LBLBLB液体培养基，液体培养基，180rpm180rpm180rpm震荡震荡373737℃℃℃培养培养45min45min45min；；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）④④④6000rpm6000rpm6000rpm离心离心5min5min5min，仅留，仅留100μl100μl100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LBLBLB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；⑤⑤⑤将平板正向培养将平板正向培养1h1h1h，再倒置，再倒置373737℃℃℃培养培养14h14h14h。如果要求是。如果要求是303030度则培养度则培养20h20h20h；；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl10μl10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。⑥⑥⑥挑取单菌落至挑取单菌落至LBLBLB液体培养基中，加入对应抗生素，液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm220rpm220rpm震荡培养震荡培养14h14h14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养） 2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养） 2 2 2、甘油菌种（冰袋运输，存于、甘油菌种（冰袋运输，存于-80-80-80℃℃℃，保质期，保质期909090天，请务必划线挑单克隆培养）天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天） 3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天） 3 3 3、穿刺菌种（冰袋运输，存于、穿刺菌种（冰袋运输，存于444℃℃℃，保质期，保质期777天）天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天） 4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天） 4 4 4、菌落平板（冰袋运输，存于、菌落平板（冰袋运输，存于444℃℃℃，保质期，保质期777天）天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。直接挑取单菌落至液体培养基中。直接挑取单菌落至液体培养基中。直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天） 5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天） 5 5 5、液体质粒（冰袋运输，存于、液体质粒（冰袋运输，存于-20-20-20℃℃℃，保质期，保质期909090天）天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。单独提取的液体质粒收到后可直接使用。单独提取的液体质粒收到后可直接使用。单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序） 6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序） 6 6 6、滤纸质粒（常温运输，存于、滤纸质粒（常温运输，存于-20-20-20度，度，909090天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。收到货后将滤纸画圈部分剪下放入收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EPEPEP管中，加管中，加100ul100ul100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min5min5min，吸取，吸取5ul5ul5ul质粒转化，离心全涂。质粒转化，离心全涂。

二、转化图片二、转化图片二、转化图片二、转化图片

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