辛基-琼脂糖凝胶H.P.
辛基-琼脂糖凝胶 HP辛基-琼脂糖凝胶 HP辛基-琼脂糖凝胶 HP辛基-琼脂糖凝胶 HP辛基-琼脂糖凝胶 HP辛基-琼脂糖凝胶 HP辛基-琼脂糖凝胶 HP辛基辛基
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琼脂糖凝胶 琼脂糖凝胶
HPHP
货号:S9290货号:S9290货号:S9290货号:S9290货号货号货号货号货号
:S9290:S9290::
S9290S9290
保存: 4℃~25℃(保存溶液为20% 乙醇),有效期3年。保存: 4℃~25℃(保存溶液为20% 乙醇),有效期3年。保存: 4℃~25℃(保存溶液为20% 乙醇),有效期3年。保存: 4℃~25℃(保存溶液为20% 乙醇),有效期3年。保存:保存:保存:保存:保存:
4℃~25℃(保存溶液为20% 乙醇),有效期3年。 4℃~25℃(保存溶液为20% 乙醇),有效期3年。 4℃~25℃
(保存溶液为(保存溶液为
20% 20%
乙醇),有效期乙醇),有效期
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年。年。
规格:25ml规格:25ml规格:25ml规格:25ml规格规格规格规格规格
:25ml:25ml::
25ml25ml
辛基-琼脂糖凝胶HP是将辛基键合在琼脂糖凝胶上形成的一种可利用疏水相互作用来实现目标产品纯化分离的疏水类介质。用于生物大分子和乙肝疫苗的纯化分离。辛基-琼脂糖凝胶HP是将辛基键合在琼脂糖凝胶上形成的一种可利用疏水相互作用来实现目标产品纯化分离的疏水类介质。用于生物大分子和乙肝疫苗的纯化分离。辛基-琼脂糖凝胶HP是将辛基键合在琼脂糖凝胶上形成的一种可利用疏水相互作用来实现目标产品纯化分离的疏水类介质。用于生物大分子和乙肝疫苗的纯化分离。辛基-琼脂糖凝胶HP是将辛基键合在琼脂糖凝胶上形成的一种可利用疏水相互作用来实现目标产品纯化分离的疏水类介质。用于生物大分子和乙肝疫苗的纯化分离。辛基-琼脂糖凝胶HP是将辛基键合在琼脂糖凝胶上形成的一种可利用疏水相互作用来实现目标产品纯化分离的疏水类介质。用于生物大分子和乙肝疫苗的纯化分离。辛基-琼脂糖凝胶HP是将辛基键合在琼脂糖凝胶上形成的一种可利用疏水相互作用来实现目标产品纯化分离的疏水类介质。用于生物大分子和乙肝疫苗的纯化分离。辛基辛基
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琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶
HPHP
是将辛基键合在琼脂糖凝胶上形成的一种可利用疏水相互作用来实现目标产品纯化分离的疏水类介质。用于是将辛基键合在琼脂糖凝胶上形成的一种可利用疏水相互作用来实现目标产品纯化分离的疏水类介质。用于
生物大分子和乙肝疫苗的纯化分离生物大分子和乙肝疫苗的纯化分离
。。
外观:本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。外观:本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。外观:本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。外观:本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。外观:外观:外观:外观:外观:
本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。本品为白色球状凝胶本品为白色球状凝胶
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无嗅、无味、无肉眼可见杂质。无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
理化指标:理化指标:理化指标:理化指标:理化指标:理化指标:理化指标:理化指标:理化指标:
| 项 目 | 指 标 |
| 配 基 | R-O-CH2-CH(OH)-CH2-O- (CH2)7-CH3 |
| 基 质 | 交联琼脂糖 |
| 形状 | 球形 |
| 粒径 | 10-45 μm |
| 配基密度 | 35 μmol/mL |
| 最高流速(25℃) | 100KPa下150 cm/h* |
| 耐 压 | 0.1 MPa |
| 工作温度 | 4~40℃ |
| pH适用范围 | 2~14(短时间,在位清洗);3~12(长时间) |
| 化学稳定性 | 以下溶液中稳定: 1mol/L NaOH; 6mol/L盐酸胍;8mol/L尿素; |
| 项 目 | 指 标 |
| 配 基 | R-O-CH2-CH(OH)-CH2-O- (CH2)7-CH3 |
| 基 质 | 交联琼脂糖 |
| 形状 | 球形 |
| 粒径 | 10-45 μm |
| 配基密度 | 35 μmol/mL |
| 最高流速(25℃) | 100KPa下150 cm/h* |
| 耐 压 | 0.1 MPa |
| 工作温度 | 4~40℃ |
| pH适用范围 | 2~14(短时间,在位清洗);3~12(长时间) |
| 化学稳定性 | 以下溶液中稳定: 1mol/L NaOH; 6mol/L盐酸胍;8mol/L尿素; |
| 项 目 | 指 标 |
项 目 | 项 目项 目项 目项 目项 目项 目项项 目
指 标 | 指 标指 标指 标指 标指 标指 标指指 标
| 配 基 | R-O-CH2-CH(OH)-CH2-O- (CH2)7-CH3 |
配 基 | 配 基配 基配 基配 基配 基配 基配配 基
R-O-CH2-CH(OH)-CH2-O- (CH2)7-CH3 | R-O-CH2-CH(OH)-CH2-O- (CH2)7-CH3R-O-CH2-CH(OH)-CH2-O- (CH2)7-CH3R-O-CH2-CH(OH)-CH2-O- (CH2)7-CH3R-O-CH2-CH(OH)-CH2-O- (CH2)7-CH3R-O-CHR-O-CHR-O-CH
22222
-CH(OH)-CH-CH(OH)-CH-CH(OH)-CH
22222
-O- (CH-O- (CH-O- (CH
22222
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77777
-CH-CH-CH
33333
| 基 质 | 交联琼脂糖 |
基 质 | 基 质基 质基 质基 质基 质基 质基基 质
交联琼脂糖 | 交联琼脂糖交联琼脂糖交联琼脂糖交联琼脂糖交联琼脂糖交联琼脂糖交联琼脂糖交联琼脂糖
| 形状 | 球形 |
形状 | 形状形状形状形状形状形状形状形状
球形 | 球形球形球形球形球形球形球形球形
| 粒径 | 10-45 μm |
粒径 | 粒径粒径粒径粒径粒径粒径粒径粒径
10-45 μm | 10-45 μm10-45 μm10-45 μm10-45 μm10-45 μm10-45 μm10-45 μm
| 配基密度 | 35 μmol/mL |
配基密度 | 配基密度配基密度配基密度配基密度配基密度配基密度配基密度配基密度
35 μmol/mL | 35 μmol/mL35 μmol/mL35 μmol/mL35 μmol/mL35 μmol/mL35 μmol/mL35 μmol/mL
| 最高流速(25℃) | 100KPa下150 cm/h* |
最高流速(25℃) | 最高流速(25℃)最高流速(25℃)最高流速(25℃)最高流速(25℃)最高流速(25最高流速(25最高流速最高流速
(25(25
℃℃℃
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100KPa下150 cm/h* | 100KPa下150 cm/h*100KPa下150 cm/h*100KPa下150 cm/h*100KPa下150 cm/h*100KPa下150 cm/h100KPa下150 cm/h100KPa
下下
150 cm/h150 cm/h
*****
| 耐 压 | 0.1 MPa |
耐 压 | 耐 压耐 压耐 压耐 压耐 压耐 压耐耐 压
0.1 MPa | 0.1 MPa0.1 MPa0.1 MPa0.1 MPa0.1 MPa0.1 MPa0.1 MPa
| 工作温度 | 4~40℃ |
工作温度 | 工作温度工作温度工作温度工作温度工作温度工作温度工作温度工作温度
4~40℃ | 4~40℃4~40℃4~40℃4~40℃4~404~404~40
℃℃℃
| pH适用范围 | 2~14(短时间,在位清洗);3~12(长时间) |
pH适用范围 | pH适用范围pH适用范围pH适用范围pH适用范围pH适用范围pH适用范围pH
适用范围适用范围
2~14(短时间,在位清洗);3~12(长时间) | 2~14(短时间,在位清洗);3~12(长时间)2~14(短时间,在位清洗);3~12(长时间)2~14(短时间,在位清洗);3~12(长时间)2~14(短时间,在位清洗);3~12(长时间)2~14(短时间,在位清洗);3~12(长时间)2~14(短时间,在位清洗);3~12(长时间)2~14
(短时间,在位清洗);(短时间,在位清洗);
3~123~12
(长时间)(长时间)
| 化学稳定性 | 以下溶液中稳定: 1mol/L NaOH; 6mol/L盐酸胍;8mol/L尿素; |
化学稳定性 | 化学稳定性化学稳定性化学稳定性化学稳定性化学稳定性化学稳定性化学稳定性化学稳定性
以下溶液中稳定: 1mol/L NaOH; 6mol/L盐酸胍;8mol/L尿素; | 以下溶液中稳定:以下溶液中稳定:以下溶液中稳定:以下溶液中稳定:以下溶液中稳定:以下溶液中稳定:以下溶液中稳定:以下溶液中稳定:
1mol/L NaOH; 6mol/L盐酸胍;8mol/L尿素;1mol/L NaOH; 6mol/L盐酸胍;8mol/L尿素;1mol/L NaOH; 6mol/L盐酸胍;8mol/L尿素;1mol/L NaOH; 6mol/L盐酸胍;8mol/L尿素;1mol/L NaOH; 6mol/L盐酸胍;8mol/L尿素;1mol/L NaOH; 6mol/L盐酸胍;8mol/L尿素;1mol/L NaOH
; ;
6mol/L6mol/L
盐酸胍;盐酸胍;
8mol/L8mol/L
尿素;尿素;
*柱子:内径16mm、柱长10cm,柱床高5cm ,25℃, 流动相为0.1mol/LNaCl。 *柱子:内径16mm、柱长10cm,柱床高5cm ,25℃, 流动相为0.1mol/LNaCl。 *柱子:内径16mm、柱长10cm,柱床高5cm ,25℃, 流动相为0.1mol/LNaCl。 *柱子:内径16mm、柱长10cm,柱床高5cm ,25℃, 流动相为0.1mol/LNaCl。 *柱子:内径16mm、柱长10cm,柱床高5cm ,25 *柱子:内径16mm、柱长10cm,柱床高5cm ,25 *
柱子:内径柱子:内径
16mm16mm
、柱长、柱长
10cm10cm
,柱床高,柱床高
5cm 5cm
,,
2525
℃℃℃
, 流动相为0.1mol/LNaCl。, 流动相为0.1mol/LNaCl。,
流动相为流动相为
0.1mol/LNaCl0.1mol/LNaCl
。。
操作步骤:(仅供参考)操作步骤:(仅供参考)操作步骤:(仅供参考)操作步骤:(仅供参考)操作步骤:(仅供参考)操作步骤:(仅供参考)操作步骤:(仅供参考)操作步骤:(仅供参考)操作步骤:(仅供参考)
1 装柱1 装柱1 装柱1 装柱1 装柱1 装柱1 装柱1
装柱装柱
(1)检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干净和完整。(1)检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干净和完整。(1)检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干净和完整。(1)检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干净和完整。(1)检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干净和完整。(1)检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干净和完整。(1)检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干净和完整。((
11
)检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干净和完整。)检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干净和完整。
(2)让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。(2)让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。(2)让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。(2)让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。(2)让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。(2)让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。((
22
)让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。)让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。
(3)根据柱子大小取所需量的凝胶,用去离子水清洗掉20%乙醇,用初始缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。(3)根据柱子大小取所需量的凝胶,用去离子水清洗掉20%乙醇,用初始缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。(3)根据柱子大小取所需量的凝胶,用去离子水清洗掉20%乙醇,用初始缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。(3)根据柱子大小取所需量的凝胶,用去离子水清洗掉20%乙醇,用初始缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。(3)根据柱子大小取所需量的凝胶,用去离子水清洗掉20%乙醇,用初始缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。(3)根据柱子大小取所需量的凝胶,用去离子水清洗掉20%乙醇,用初始缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。((
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)根据柱子大小取所需量的凝胶,用去离子水清洗掉)根据柱子大小取所需量的凝胶,用去离子水清洗掉
20%20%
乙醇,用初始缓冲液(按凝胶:缓冲液乙醇,用初始缓冲液(按凝胶:缓冲液
=3=3
::
11
的比例)配成匀浆。的比例)配成匀浆。
(4)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。(4)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。(4)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。(4)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。(4)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。(4)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。((
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)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。
(5)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。(5)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。(5)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。(5)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。(5)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。(5)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。((
55
)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
(6)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定(注意压力不要超过填料最大耐压)。(6)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定(注意压力不要超过填料最大耐压)。(6)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定(注意压力不要超过填料最大耐压)。(6)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定(注意压力不要超过填料最大耐压)。(6)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定(注意压力不要超过填料最大耐压)。(6)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定(注意压力不要超过填料最大耐压)。((
66
)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的
1.331.33
倍的流速流过,使柱床稳定(注意压力不要超过填料最大耐压)。倍的流速流过,使柱床稳定(注意压力不要超过填料最大耐压)。
2 平衡2 平衡2 平衡2 平衡2 平衡2 平衡2 平衡2
平衡平衡
让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变,至少平衡5个柱体积。让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变,至少平衡5个柱体积。让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变,至少平衡5个柱体积。让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变,至少平衡5个柱体积。让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变,至少平衡5个柱体积。让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变,至少平衡5个柱体积。让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和
pHpH
不变,至少平衡不变,至少平衡
55
个柱体积。个柱体积。
3 上样3 上样3 上样3 上样3 上样3 上样3 上样3
上样上样
上样量的多少和多种条件相关,样品的性质和缓冲液的不同,上样量也不同。高配基密度不一定对应高吸附蛋白量,但是高配基密度可以促进蛋白质的多点附着,否则蛋白质可能难以吸附,中等的配基密度可以通过调节缓冲液的浓度来选择性结合目标蛋白。上样量的多少和多种条件相关,样品的性质和缓冲液的不同,上样量也不同。高配基密度不一定对应高吸附蛋白量,但是高配基密度可以促进蛋白质的多点附着,否则蛋白质可能难以吸附,中等的配基密度可以通过调节缓冲液的浓度来选择性结合目标蛋白。上样量的多少和多种条件相关,样品的性质和缓冲液的不同,上样量也不同。高配基密度不一定对应高吸附蛋白量,但是高配基密度可以促进蛋白质的多点附着,否则蛋白质可能难以吸附,中等的配基密度可以通过调节缓冲液的浓度来选择性结合目标蛋白。上样量的多少和多种条件相关,样品的性质和缓冲液的不同,上样量也不同。高配基密度不一定对应高吸附蛋白量,但是高配基密度可以促进蛋白质的多点附着,否则蛋白质可能难以吸附,中等的配基密度可以通过调节缓冲液的浓度来选择性结合目标蛋白。上样量的多少和多种条件相关,样品的性质和缓冲液的不同,上样量也不同。高配基密度不一定对应高吸附蛋白量,但是高配基密度可以促进蛋白质的多点附着,否则蛋白质可能难以吸附,中等的配基密度可以通过调节缓冲液的浓度来选择性结合目标蛋白。上样量的多少和多种条件相关,样品的性质和缓冲液的不同,上样量也不同。高配基密度不一定对应高吸附蛋白量,但是高配基密度可以促进蛋白质的多点附着,否则蛋白质可能难以吸附,中等的配基密度可以通过调节缓冲液的浓度来选择性结合目标蛋白。上样量的多少和多种条件相关,样品的性质和缓冲液的不同,上样量也不同。高配基密度不一定对应高吸附蛋白量,但是高配基密度可以促进蛋白质的多点附着,否则蛋白质可能难以吸附,中等的配基密度可以通过调节缓冲液的浓度来选择性结合目标蛋白。上样量的多少和多种条件相关,样品的性质和缓冲液的不同,上样量也不同。高配基密度不一定对应高吸附蛋白量,但是高配基密度可以促进蛋白质的多点附着,否则蛋白质可能难以吸附,中等的配基密度可以通过调节缓冲液的浓度来选择性结合目标蛋白。
(1)样品应溶解在平衡缓冲液中,或者,可以通过透析或通过使用脱盐柱将缓冲液交换至平衡缓冲液。 样品的粘度不应超过缓冲液的粘度。样品一定要离心或过滤后上样;(1)样品应溶解在平衡缓冲液中,或者,可以通过透析或通过使用脱盐柱将缓冲液交换至平衡缓冲液。 样品的粘度不应超过缓冲液的粘度。样品一定要离心或过滤后上样;(1)样品应溶解在平衡缓冲液中,或者,可以通过透析或通过使用脱盐柱将缓冲液交换至平衡缓冲液。 样品的粘度不应超过缓冲液的粘度。样品一定要离心或过滤后上样;(1)样品应溶解在平衡缓冲液中,或者,可以通过透析或通过使用脱盐柱将缓冲液交换至平衡缓冲液。 样品的粘度不应超过缓冲液的粘度。样品一定要离心或过滤后上样;(1)样品应溶解在平衡缓冲液中,或者,可以通过透析或通过使用脱盐柱将缓冲液交换至平衡缓冲液。 样品的粘度不应超过缓冲液的粘度。样品一定要离心或过滤后上样;(1)样品应溶解在平衡缓冲液中,或者,可以通过透析或通过使用脱盐柱将缓冲液交换至平衡缓冲液。 样品的粘度不应超过缓冲液的粘度。样品一定要离心或过滤后上样;((
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)样品应溶解在平衡缓冲液中,或者,可以通过透析或通过使用脱盐柱将缓冲液交换至平衡缓冲液。 样品的粘度不应超过缓冲液的粘度。样品一定要离心或过滤后上样;)样品应溶解在平衡缓冲液中,或者,可以通过透析或通过使用脱盐柱将缓冲液交换至平衡缓冲液。 样品的粘度不应超过缓冲液的粘度。样品一定要离心或过滤后上样;
(2)用于样品结合和随后洗脱的流速取决于所需的分辨率,通常流速越低,分辨率越好。(2)用于样品结合和随后洗脱的流速取决于所需的分辨率,通常流速越低,分辨率越好。(2)用于样品结合和随后洗脱的流速取决于所需的分辨率,通常流速越低,分辨率越好。(2)用于样品结合和随后洗脱的流速取决于所需的分辨率,通常流速越低,分辨率越好。(2)用于样品结合和随后洗脱的流速取决于所需的分辨率,通常流速越低,分辨率越好。(2)用于样品结合和随后洗脱的流速取决于所需的分辨率,通常流速越低,分辨率越好。((
22
)用于样品结合和随后洗脱的流速取决于所需的分辨率,通常流速越低,分辨率越好。)用于样品结合和随后洗脱的流速取决于所需的分辨率,通常流速越低,分辨率越好。
(3)蛋白质与疏水性填料的结合受以下影响:(3)蛋白质与疏水性填料的结合受以下影响:(3)蛋白质与疏水性填料的结合受以下影响:(3)蛋白质与疏水性填料的结合受以下影响:(3)蛋白质与疏水性填料的结合受以下影响:(3)蛋白质与疏水性填料的结合受以下影响:((
33
)蛋白质与疏水性填料的结合受以下影响:)蛋白质与疏水性填料的结合受以下影响:
配基的结构(例如,碳链或芳族配体)配基的结构(例如,碳链或芳族配体)配基的结构(例如,碳链或芳族配体)配基的结构(例如,碳链或芳族配体)配基的结构(例如,碳链或芳族配体)配基的结构(例如,碳链或芳族配体)配基的结构(例如,碳链或芳族配体)配基的结构(例如,碳链或芳族配体)
配基密度配基密度配基密度配基密度配基密度配基密度配基密度配基密度
缓冲液的离子强度缓冲液的离子强度缓冲液的离子强度缓冲液的离子强度缓冲液的离子强度缓冲液的离子强度缓冲液的离子强度缓冲液的离子强度
盐析效应:引起盐析的那些盐(例如硫酸铵)也促进与疏水配基的结合。将柱平衡并将样品施加在高离子强度的溶液中,典型的起始缓冲液是1.7M(NH 4)2SO4,刚好低于用于盐析蛋白质的浓度。盐析效应:引起盐析的那些盐(例如硫酸铵)也促进与疏水配基的结合。将柱平衡并将样品施加在高离子强度的溶液中,典型的起始缓冲液是1.7M(NH 4)2SO4,刚好低于用于盐析蛋白质的浓度。盐析效应:引起盐析的那些盐(例如硫酸铵)也促进与疏水配基的结合。将柱平衡并将样品施加在高离子强度的溶液中,典型的起始缓冲液是1.7M(NH 4)2SO4,刚好低于用于盐析蛋白质的浓度。盐析效应:引起盐析的那些盐(例如硫酸铵)也促进与疏水配基的结合。将柱平衡并将样品施加在高离子强度的溶液中,典型的起始缓冲液是1.7M(NH 4)2SO4,刚好低于用于盐析蛋白质的浓度。盐析效应:引起盐析的那些盐(例如硫酸铵)也促进与疏水配基的结合。将柱平衡并将样品施加在高离子强度的溶液中,典型的起始缓冲液是1.7M(NH盐析效应:引起盐析的那些盐(例如硫酸铵)也促进与疏水配基的结合。将柱平衡并将样品施加在高离子强度的溶液中,典型的起始缓冲液是1.7M(NH盐析效应:引起盐析的那些盐(例如硫酸铵)也促进与疏水配基的结合。将柱平衡并将样品施加在高离子强度的溶液中,典型的起始缓冲液是盐析效应:引起盐析的那些盐(例如硫酸铵)也促进与疏水配基的结合。将柱平衡并将样品施加在高离子强度的溶液中,典型的起始缓冲液是
1.7M1.7M
((
NHNH
4 4 4 4 4
))))
22222
SOSOSO
44444
,刚好低于用于盐析蛋白质的浓度。,刚好低于用于盐析蛋白质的浓度。,刚好低于用于盐析蛋白质的浓度。,刚好低于用于盐析蛋白质的浓度。
气温:疏水相互作用在较低温度下较弱。如果色谱在冷室中进行,则必须考虑这一点。气温:疏水相互作用在较低温度下较弱。如果色谱在冷室中进行,则必须考虑这一点。气温:疏水相互作用在较低温度下较弱。如果色谱在冷室中进行,则必须考虑这一点。气温:疏水相互作用在较低温度下较弱。如果色谱在冷室中进行,则必须考虑这一点。气温:疏水相互作用在较低温度下较弱。如果色谱在冷室中进行,则必须考虑这一点。气温:疏水相互作用在较低温度下较弱。如果色谱在冷室中进行,则必须考虑这一点。气温:疏水相互作用在较低温度下较弱。如果色谱在冷室中进行,则必须考虑这一点。气温:疏水相互作用在较低温度下较弱。如果色谱在冷室中进行,则必须考虑这一点。
4 洗脱4 洗脱4 洗脱4 洗脱4 洗脱4 洗脱4 洗脱4
洗脱洗脱
结合的蛋白可以通过降低疏水相互作用的强度而被洗脱,这可以通过以下方式完成:结合的蛋白可以通过降低疏水相互作用的强度而被洗脱,这可以通过以下方式完成:结合的蛋白可以通过降低疏水相互作用的强度而被洗脱,这可以通过以下方式完成:结合的蛋白可以通过降低疏水相互作用的强度而被洗脱,这可以通过以下方式完成:结合的蛋白可以通过降低疏水相互作用的强度而被洗脱,这可以通过以下方式完成:结合的蛋白可以通过降低疏水相互作用的强度而被洗脱,这可以通过以下方式完成:结合的蛋白可以通过降低疏水相互作用的强度而被洗脱,这可以通过以下方式完成:结合的蛋白可以通过降低疏水相互作用的强度而被洗脱,这可以通过以下方式完成:
(1)用盐梯度递减(线性或阶梯)来进行洗脱;(1)用盐梯度递减(线性或阶梯)来进行洗脱;(1)用盐梯度递减(线性或阶梯)来进行洗脱;(1)用盐梯度递减(线性或阶梯)来进行洗脱;(1)用盐梯度递减(线性或阶梯)来进行洗脱;(1)用盐梯度递减(线性或阶梯)来进行洗脱;((
11
)用盐梯度递减(线性或阶梯)来进行洗脱;)用盐梯度递减(线性或阶梯)来进行洗脱;
(2)用添加到缓冲液中的极性降低的有机溶剂(例如乙二醇)洗脱;(2)用添加到缓冲液中的极性降低的有机溶剂(例如乙二醇)洗脱;(2)用添加到缓冲液中的极性降低的有机溶剂(例如乙二醇)洗脱;(2)用添加到缓冲液中的极性降低的有机溶剂(例如乙二醇)洗脱;(2)用添加到缓冲液中的极性降低的有机溶剂(例如乙二醇)洗脱;(2)用添加到缓冲液中的极性降低的有机溶剂(例如乙二醇)洗脱;((
22
)用添加到缓冲液中的极性降低的有机溶剂(例如乙二醇)洗脱;)用添加到缓冲液中的极性降低的有机溶剂(例如乙二醇)洗脱;
(3)用加入到缓冲液中的去污剂洗脱。(3)用加入到缓冲液中的去污剂洗脱。(3)用加入到缓冲液中的去污剂洗脱。(3)用加入到缓冲液中的去污剂洗脱。(3)用加入到缓冲液中的去污剂洗脱。(3)用加入到缓冲液中的去污剂洗脱。((
33
)用加入到缓冲液中的去污剂洗脱。)用加入到缓冲液中的去污剂洗脱。
洗脱液起始梯度是0-100%缓冲液B的线性梯度,例如:洗脱液起始梯度是0-100%缓冲液B的线性梯度,例如:洗脱液起始梯度是0-100%缓冲液B的线性梯度,例如:洗脱液起始梯度是0-100%缓冲液B的线性梯度,例如:洗脱液起始梯度是0-100%洗脱液起始梯度是0-100%洗脱液起始梯度是洗脱液起始梯度是
0-1000-100
%%
缓冲液B缓冲液B缓冲液缓冲液
BB
的线性梯度,例如:的线性梯度,例如:的线性梯度,例如:的线性梯度,例如:
缓冲液A(平衡缓冲液):50mM磷酸盐缓冲液,pH 7.0 + 1.7M(NH4)2SO4缓冲液A(平衡缓冲液):50mM磷酸盐缓冲液,pH 7.0 + 1.7M(NH4)2SO4缓冲液A(平衡缓冲液):50mM磷酸盐缓冲液,pH 7.0 + 1.7M(NH4)2SO4缓冲液A(平衡缓冲液):50mM磷酸盐缓冲液,pH 7.0 + 1.7M(NH4)2SO4缓冲液A缓冲液A缓冲液缓冲液
AA
(平衡缓冲液)(平衡缓冲液)(平衡缓冲液)(平衡缓冲液)
:50mM磷酸盐缓冲液,pH 7.0 + 1.7M(NH:50mM磷酸盐缓冲液,pH 7.0 + 1.7M(NH::
50mM50mM
磷酸盐缓冲液,磷酸盐缓冲液,
pH 7.0 + 1.7MpH 7.0 + 1.7M
((
NHNH
44444
))))
22222
SOSOSO
44444
缓冲液B(洗脱液):50mM磷酸盐缓冲液,pH 7.0缓冲液B(洗脱液):50mM磷酸盐缓冲液,pH 7.0缓冲液B(洗脱液):50mM磷酸盐缓冲液,pH 7.0缓冲液B(洗脱液):50mM磷酸盐缓冲液,pH 7.0缓冲液B缓冲液B缓冲液缓冲液
BB
(洗脱液)(洗脱液)(洗脱液)(洗脱液)
:50mM磷酸盐缓冲液,pH 7.0:50mM磷酸盐缓冲液,pH 7.0::
50mM50mM
磷酸盐缓冲液,磷酸盐缓冲液,
pH 7.0pH 7.0
5再生5再生5再生5再生5再生5再生5再生5
再生再生
用低离子强度缓冲液洗脱,监测再生期间的紫外吸光度,以确定结合物质何时完全从柱中洗出。用大量蒸馏水洗柱,用至少5倍柱体积的起始缓冲液重新平衡。用低离子强度缓冲液洗脱,监测再生期间的紫外吸光度,以确定结合物质何时完全从柱中洗出。用大量蒸馏水洗柱,用至少5倍柱体积的起始缓冲液重新平衡。用低离子强度缓冲液洗脱,监测再生期间的紫外吸光度,以确定结合物质何时完全从柱中洗出。用大量蒸馏水洗柱,用至少5倍柱体积的起始缓冲液重新平衡。用低离子强度缓冲液洗脱,监测再生期间的紫外吸光度,以确定结合物质何时完全从柱中洗出。用大量蒸馏水洗柱,用至少5倍柱体积的起始缓冲液重新平衡。用低离子强度缓冲液洗脱,监测再生期间的紫外吸光度,以确定结合物质何时完全从柱中洗出。用大量蒸馏水洗柱,用至少5倍柱体积的起始缓冲液重新平衡。用低离子强度缓冲液洗脱,监测再生期间的紫外吸光度,以确定结合物质何时完全从柱中洗出。用大量蒸馏水洗柱,用至少5倍柱体积的起始缓冲液重新平衡。用低离子强度缓冲液洗脱,监测再生期间的紫外吸光度,以确定结合物质何时完全从柱中洗出。用大量蒸馏水洗柱,用至少用低离子强度缓冲液洗脱,监测再生期间的紫外吸光度,以确定结合物质何时完全从柱中洗出。用大量蒸馏水洗柱,用至少
55
倍柱体积的起始缓冲液重新平衡。倍柱体积的起始缓冲液重新平衡。
在一些应用中,诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不掉。这些可以通过在位清洗程序除去。在一些应用中,诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不掉。这些可以通过在位清洗程序除去。在一些应用中,诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不掉。这些可以通过在位清洗程序除去。在一些应用中,诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不掉。这些可以通过在位清洗程序除去。在一些应用中,诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不掉。这些可以通过在位清洗程序除去。在一些应用中,诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不掉。这些可以通过在位清洗程序除去。在一些应用中,诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不掉。这些可以通过在位清洗程序除去。在一些应用中,诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不掉。这些可以通过在位清洗程序除去。
6 在位清洗6 在位清洗6 在位清洗6 在位清洗6 在位清洗6 在位清洗6 在位清洗6 在位清洗6
在位清洗在位清洗
(1) 用0.1M NaOH溶液洗涤柱子,然后立即用大量蒸馏水清洗柱子,来除去沉淀的蛋白质。并用起始缓冲液重新平衡。(1) 用0.1M NaOH溶液洗涤柱子,然后立即用大量蒸馏水清洗柱子,来除去沉淀的蛋白质。并用起始缓冲液重新平衡。(1) 用0.1M NaOH溶液洗涤柱子,然后立即用大量蒸馏水清洗柱子,来除去沉淀的蛋白质。并用起始缓冲液重新平衡。(1) 用0.1M NaOH溶液洗涤柱子,然后立即用大量蒸馏水清洗柱子,来除去沉淀的蛋白质。并用起始缓冲液重新平衡。(1) 用0.1M NaOH溶液洗涤柱子,然后立即用大量蒸馏水清洗柱子,来除去沉淀的蛋白质。并用起始缓冲液重新平衡。(1) 用0.1M NaOH溶液洗涤柱子,然后立即用大量蒸馏水清洗柱子,来除去沉淀的蛋白质。并用起始缓冲液重新平衡。(1) 用0.1M NaOH溶液洗涤柱子,然后立即用大量蒸馏水清洗柱子,来除去沉淀的蛋白质。并用起始缓冲液重新平衡。((
11
) 用) 用
0.1M NaOH0.1M NaOH
溶液洗涤柱子,然后立即用大量蒸馏水清洗柱子,来除去沉淀的蛋白质。并用起始缓冲液重新平衡。溶液洗涤柱子,然后立即用大量蒸馏水清洗柱子,来除去沉淀的蛋白质。并用起始缓冲液重新平衡。
(2)通过用70%乙醇或30%异丙醇来除去强的疏水性结合的蛋白质、脂蛋白和脂质。当使用高浓度有机溶剂时,需要注意避免气泡形成,最后用蒸馏水洗涤柱子并重新平衡。(2)通过用70%乙醇或30%异丙醇来除去强的疏水性结合的蛋白质、脂蛋白和脂质。当使用高浓度有机溶剂时,需要注意避免气泡形成,最后用蒸馏水洗涤柱子并重新平衡。(2)通过用70%乙醇或30%异丙醇来除去强的疏水性结合的蛋白质、脂蛋白和脂质。当使用高浓度有机溶剂时,需要注意避免气泡形成,最后用蒸馏水洗涤柱子并重新平衡。(2)通过用70%乙醇或30%异丙醇来除去强的疏水性结合的蛋白质、脂蛋白和脂质。当使用高浓度有机溶剂时,需要注意避免气泡形成,最后用蒸馏水洗涤柱子并重新平衡。(2)通过用70%乙醇或30%异丙醇来除去强的疏水性结合的蛋白质、脂蛋白和脂质。当使用高浓度有机溶剂时,需要注意避免气泡形成,最后用蒸馏水洗涤柱子并重新平衡。(2)通过用70%乙醇或30%异丙醇来除去强的疏水性结合的蛋白质、脂蛋白和脂质。当使用高浓度有机溶剂时,需要注意避免气泡形成,最后用蒸馏水洗涤柱子并重新平衡。((
22
)通过用)通过用
7070
%乙醇或%乙醇或
3030
%异丙醇来除去强的疏水性结合的蛋白质、脂蛋白和脂质。当使用高浓度有机溶剂时,需要注意避免气泡形成,最后用蒸馏水洗涤柱子并重新平衡。%异丙醇来除去强的疏水性结合的蛋白质、脂蛋白和脂质。当使用高浓度有机溶剂时,需要注意避免气泡形成,最后用蒸馏水洗涤柱子并重新平衡。
注意事项:注意事项:注意事项:注意事项:注意事项:注意事项:注意事项:注意事项:注意事项:
- 上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。
- 在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。碱会使流速变慢。
- 不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。
- 在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。
上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。
在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。碱会使流速变慢。在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。碱会使流速变慢。在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。碱会使流速变慢。在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。碱会使流速变慢。在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。碱会使流速变慢。在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。碱会使流速变慢。在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。碱会使流速变慢。在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于
0.150.15
摩尔。碱会使流速变慢。摩尔。碱会使流速变慢。
不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。
在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。