PCR试剂盒具有下列特点:PCR试剂盒具有下列特点:PCR试剂盒PCR试剂盒PCR试剂盒PCR试剂盒PCR
试剂盒试剂盒
具有下列特点:具有下列特点:具有下列特点:具有下列特点:具有下列特点:具有下列特点:
1. 一管式操作,用户只需要提供样品即可。1. 一管式操作,用户只需要提供样品即可。1. 一管式操作,用户只需要提供样品即可。1. 一管式操作,用户只需要提供样品即可。1.
一管式操作,用户只需要提供样品即可。一管式操作,用户只需要提供样品即可。
2. 根据PCR基因保守区域设计引物,能专一性地检测出猪的成分,但不能检测其他非猪类动物成分(如鸡、牛、羊等)。2. 根据PCR基因保守区域设计引物,能专一性地检测出猪的成分,但不能检测其他非猪类动物成分(如鸡、牛、羊等)。2. 根据2. 根据2.
根据根据
PCRPCRPCR
基因保守区域设计引物,能专一性地检测出猪的成分,但不能检测其他非猪类动物成分(如鸡、牛、羊等)。基因保守区域设计引物,能专一性地检测出猪的成分,但不能检测其他非猪类动物成分(如鸡、牛、羊等)。基因保守区域设计引物,能专一性地检测出猪的成分,但不能检测其他非猪类动物成分(如鸡、牛、羊等)。基因保守区域设计引物,能专一性地检测出猪的成分,但不能检测其他非猪类动物成分(如鸡、牛、羊等)。
3. 快速,整个检测过程(按一个样品计)所需时间仅为 2.0 小时。3. 快速,整个检测过程(按一个样品计)所需时间仅为 2.0 小时。3. 快速,整个检测过程(按一个样品计)所需时间仅为 2.0 小时。3. 快速,整个检测过程(按一个样品计)所需时间仅为 2.0 小时。3.
快速,整个检测过程(按一个样品计)所需时间仅为 快速,整个检测过程(按一个样品计)所需时间仅为
2.0 2.0
小时。小时。
4. 只需要普通 PCR 仪和凝胶电泳仪,无需配置贵重仪器设备。4. 只需要普通 PCR 仪和凝胶电泳仪,无需配置贵重仪器设备。4. 只需要普通 PCR 仪和凝胶电泳仪,无需配置贵重仪器设备。4. 只需要普通 PCR 仪和凝胶电泳仪,无需配置贵重仪器设备。4.
只需要普通 只需要普通
PCR PCR
仪和凝胶电泳仪,无需配置贵重仪器设备。仪和凝胶电泳仪,无需配置贵重仪器设备。
5. 对混合样品中猪成分的检测下限为 0.1%,对样品中猪成分的核酸检测下限为 1.0ng/µL。5. 对混合样品中猪成分的检测下限为 0.1%,对样品中猪成分的核酸检测下限为 1.0ng/µL。5. 对混合样品中猪成分的检测下限为 0.1%,对样品中猪成分的核酸检测下限为 1.0ng/µL。5. 对混合样品中猪成分的检测下限为 0.1%,对样品中猪成分的核酸检测下限为 1.0ng/µL。5.
对混合样品中猪成分的检测下限为 对混合样品中猪成分的检测下限为
0.1%0.1%
,对样品中猪成分的核酸检测下限为 ,对样品中猪成分的核酸检测下限为
1.0ng/µL1.0ng/µL
。。
6. 本只能用于科研,足够 50 次 40uL 体系的常规 PCR。6. 本只能用于科研,足够 50 次 40uL 体系的常规 PCR。6. 本只能用于科研,足够 50 次 40uL 体系的常规 PCR。6. 本只能用于科研,足够 50 次 40uL 体系的常规 PCR。6.
本只能用于科研,足够 本只能用于科研,足够
50 50
次 次
40uL 40uL
体系的常规 体系的常规
PCRPCR
。。
设计PCR用引物时的注意事项?设计PCR用引物时的注意事项?设计PCR用引物时的注意事项?设计PCR用引物时的注意事项?设计PCR用引物时的注意事项?设计PCR用引物时的注意事项?设计设计PCR
用引物时的注意事项用引物时的注意事项
??
可以从以下几个方面考虑。可以从以下几个方面考虑。可以从以下几个方面考虑。可以从以下几个方面考虑。可以从以下几个方面考虑。可以从以下几个方面考虑。
1. 引物长度通常为20~25 mer。但进行LA PCR时,引物长度应增长为30~35 mer。 1. 引物长度通常为20~25 mer。但进行LA PCR时,引物长度应增长为30~35 mer。 1. 引物长度通常为20~25 mer。但进行LA PCR时,引物长度应增长为30~35 mer。 1. 引物长度通常为20~25 mer。但进行LA PCR时,引物长度应增长为30~35 mer。 1.
引物长度通常为引物长度通常为
2020
~~
25 mer25 mer
。但进行。但进行
LA PCRLA PCR
时,引物长度应增长为时,引物长度应增长为
3030
~~
35 mer35 mer
。 。
2. 二条引物之间不能进行Annealing,对3′端的3个碱基需特别注意。 2. 二条引物之间不能进行Annealing,对3′端的3个碱基需特别注意。 2. 二条引物之间不能进行Annealing,对3′端的3个碱基需特别注意。 2. 二条引物之间不能进行Annealing,对3′端的3个碱基需特别注意。 2.
二条引物之间不能进行二条引物之间不能进行
AnnealingAnnealing
,对,对
33
′端的′端的
33
个碱基需特别注意。 个碱基需特别注意。
3. GC含量在50~60%,避开局部富含GC或AT,为了使引物和模板稳定结合,3′端应避开AT rich结构。 3. GC含量在50~60%,避开局部富含GC或AT,为了使引物和模板稳定结合,3′端应避开AT rich结构。 3. GC含量在50~60%,避开局部富含GC或AT,为了使引物和模板稳定结合,3′端应避开AT rich结构。 3. GC含量在50~60%,避开局部富含GC或AT,为了使引物和模板稳定结合,3′端应避开AT rich结构。 3. GC
含量在含量在
5050
~~
60%60%
,避开局部富含,避开局部富含
GCGC
或或
ATAT
,为了使引物和模板稳定结合,,为了使引物和模板稳定结合,
33
′端应避开′端应避开
AT richAT rich
结构。 结构。
4. 避开引物自身形成二级结构。 4. 避开引物自身形成二级结构。 4. 避开引物自身形成二级结构。 4. 避开引物自身形成二级结构。 4.
避开引物自身形成二级结构。 避开引物自身形成二级结构。
5. 选择Tm温度相互接近的二条引物。5. 选择Tm温度相互接近的二条引物。5. 选择Tm温度相互接近的二条引物。5. 选择Tm温度相互接近的二条引物。5.
选择选择
TmTm
温度相互接近的二条引物。温度相互接近的二条引物。
PCR用引物的Tm值的计算方法?PCR用引物的Tm值的计算方法?PCR用引物的Tm值的计算方法?PCR用引物的Tm值的计算方法?PCR用引物的Tm值的计算方法?PCR用引物的Tm值的计算方法?PCR
用引物的用引物的
TmTm
值的计算方法值的计算方法
??
引物为20 mer以下时: 引物为20 mer以下时: 引物为20 mer以下时: 引物为20 mer以下时: 引物为引物为20 mer
以下时: 以下时:
Tm = 2℃×(A+T) + 4℃×(G+C) Tm = 2℃×(A+T) + 4℃×(G+C) Tm = 2℃×(A+T) + 4℃×(G+C) Tm = 2℃×(A+T) + 4℃×(G+C) Tm = 2
℃×℃×
(A+T) + 4(A+T) + 4
℃×℃×
(G+C) (G+C)
引物为20 mer以上时: 引物为20 mer以上时: 引物为20 mer以上时: 引物为20 mer以上时: 引物为引物为20 mer
以上时: 以上时:
Tm = 81.5 + 0.41×(GC%) - 600/L Tm = 81.5 + 0.41×(GC%) - 600/L Tm = 81.5 + 0.41×(GC%) - 600/L Tm = 81.5 + 0.41×(GC%) - 600/L Tm = 81.5 + 0.41
××
(GC%) - 600/L (GC%) - 600/L
其中L为引物的长度。 其中L为引物的长度。 其中L为引物的长度。 其中L为引物的长度。 其中其中L
为引物的长度。 为引物的长度。
在PCR反应过程中选择Annealing温度时,一般为 (Tm - 5)℃。在PCR反应过程中选择Annealing温度时,一般为 (Tm - 5)℃。在PCR反应过程中选择Annealing温度时,一般为 (Tm - 5)℃。在PCR反应过程中选择Annealing温度时,一般为 (Tm - 5)℃。在在PCR
反应过程中选择反应过程中选择
AnnealingAnnealing
温度时,一般为 温度时,一般为
(Tm - 5)(Tm - 5)
℃。℃。
PCR用引物中含有Inosine (次黄苷) 碱基,其Tm值怎样计算?PCR用引物中含有Inosine (次黄苷) 碱基,其Tm值怎样计算?PCR用引物中含有Inosine (次黄苷) 碱基,其Tm值怎样计算?PCR用引物中含有Inosine (次黄苷) 碱基,其Tm值怎样计算?PCR用引物中含有Inosine (次黄苷) 碱基,其Tm值怎样计算?PCR用引物中含有Inosine (次黄苷) 碱基,其Tm值怎样计算?PCR
用引物中含有用引物中含有
Inosine (Inosine (
次黄苷次黄苷
) )
碱基,其碱基,其
TmTm
值怎样计算值怎样计算
??
可以不考虑Inosine碱基,使用A、G、C、T计算Tm值就可以。可以不考虑Inosine碱基,使用A、G、C、T计算Tm值就可以。可以不考虑Inosine碱基,使用A、G、C、T计算Tm值就可以。可以不考虑Inosine碱基,使用A、G、C、T计算Tm值就可以。可以不考虑可以不考虑Inosine
碱基,使用碱基,使用
AA
、、
GG
、、
CC
、、
TT
计算计算
TmTm
值就可以。值就可以。
PCR用引物的使用量?PCR用引物的使用量?PCR用引物的使用量?PCR用引物的使用量?PCR用引物的使用量?PCR用引物的使用量?PCR
用引物的使用量用引物的使用量
??
合适的终浓度可在0.1 μM~1.0 μM之间选择。引物的浓度太低时,有时扩增产物太少;引物浓度太高时,比较容易出现非特异性扩增反应。通常模板DNA的量较多或High complexity DNA (例如Human genome DNA) 作模板时,引物浓度应低一些;当模板DNA的量较少或Low complexity DNA (例如Plasmid等) 作模板时,引物浓度应高一些。合适的终浓度可在0.1 μM~1.0 μM之间选择。引物的浓度太低时,有时扩增产物太少;引物浓度太高时,比较容易出现非特异性扩增反应。通常模板DNA的量较多或High complexity DNA (例如Human genome DNA) 作模板时,引物浓度应低一些;当模板DNA的量较少或Low complexity DNA (例如Plasmid等) 作模板时,引物浓度应高一些。合适的终浓度可在0.1 μM~1.0 μM之间选择。引物的浓度太低时,有时扩增产物太少;引物浓度太高时,比较容易出现非特异性扩增反应。通常模板DNA的量较多或High complexity DNA (例如Human genome DNA) 作模板时,引物浓度应低一些;当模板DNA的量较少或Low complexity DNA (例如Plasmid等) 作模板时,引物浓度应高一些。合适的终浓度可在0.1 μM~1.0 μM之间选择。引物的浓度太低时,有时扩增产物太少;引物浓度太高时,比较容易出现非特异性扩增反应。通常模板DNA的量较多或High complexity DNA (例如Human genome DNA) 作模板时,引物浓度应低一些;当模板DNA的量较少或Low complexity DNA (例如Plasmid等) 作模板时,引物浓度应高一些。合适的终浓度可在合适的终浓度可在0.1
μμ
MM
~~
1.0 1.0
μμ
MM
之间选择。引物的浓度太低时,有时扩增产物太少;引物浓度太高时,比较容易出现非特异性扩增反应。通常模板之间选择。引物的浓度太低时,有时扩增产物太少;引物浓度太高时,比较容易出现非特异性扩增反应。通常模板
DNADNA
的量较多或的量较多或
High complexity DNA (High complexity DNA (
例如例如
Human genome DNA) Human genome DNA)
作模板时,引物浓度应低一些;当模板作模板时,引物浓度应低一些;当模板
DNADNA
的量较少或的量较少或
Low complexity DNA (Low complexity DNA (
例如例如
PlasmidPlasmid
等等
) )
作模板时,引物浓度应高一些。作模板时,引物浓度应高一些。