PCR使用方法：PCR使用方法：PCRPCRPCRPCRPCR使用方法使用方法使用方法使用方法使用方法使用方法：：：：：：一、样品 DNA 的制备 一、样品 DNA 的制备 一、样品 DNA 的制备 一、样品 DNA 的制备 一、样品 DNA 的制备 一、样品 DNA 的制备 一、样品 DNA 的制备 一、样品 DNA 的制备 一、样品 DNA 的制备 一、样品一、样品 DNA 的制备 1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作： 2. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作： 2. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作： 2. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作： 2. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作： 2. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作： 2. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作： 2. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作：
3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料
管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。管中加入管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小，如奶酪）或5uL 液体样品（如牛奶）待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小，如奶酪）或5uL 液体样品（如牛奶）待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小，如奶酪）或5uL 液体样品（如牛奶）待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小，如奶酪）或5uL 液体样品（如牛奶）待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小，如奶酪）或5uL 液体样品（如牛奶）待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小，如奶酪）或5uL 液体样品（如牛奶）待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小，如奶酪）或5uL 液体样品（如牛奶）待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小，如奶酪）或5uL 液体样品（如牛奶）待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。
5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。
6. 95℃保温 10 分钟。6. 95℃保温 10 分钟。6. 95℃保温 10 分钟。6. 95℃保温 10 分钟。6. 95℃保温 10 分钟。6. 95℃保温 10 分钟。6. 95℃保温 10 分钟。6. 95℃保温 10 分钟。
7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。

二、设置 PCR 反应（40 uL 体系） 二、设置 PCR 反应（40 uL 体系） 二、设置 PCR 反应（40 uL 体系） 二、设置 PCR 反应（40 uL 体系） 二、设置 PCR 反应（40 uL 体系） 二、设置 PCR 反应（40 uL 体系） 二、设置 PCR 反应（40 uL 体系） 二、设置 PCR 反应（40 uL 体系） 二、设置 PCR 反应（40 uL 体系） 二、设置二、设置 PCR 反应（40 uL 体系）
8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例（注意：如果第一次使用DNA 释放剂，最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定最佳用量，以后就用效果好的那个模板用量）：8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例（注意：如果第一次使用DNA 释放剂，最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定最佳用量，以后就用效果好的那个模板用量）：8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例（注意：如果第一次使用DNA 释放剂，最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定最佳用量，以后就用效果好的那个模板用量）：8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例（注意：如果第一次使用DNA 释放剂，最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定最佳用量，以后就用效果好的那个模板用量）：8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例（注意：如果第一次使用DNA 释放剂，最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定最佳用量，以后就用效果好的那个模板用量）：8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例（注意：如果第一次使用DNA 释放剂，最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定最佳用量，以后就用效果好的那个模板用量）：8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例（注意：如果第一次使用DNA 释放剂，最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定最佳用量，以后就用效果好的那个模板用量）：8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例（注意：如果第一次使用DNA 释放剂，最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定最佳用量，以后就用效果好的那个模板用量）：

成份	样品（用量1）	样品（用量2）	阳性对照	阴性对照
即用型 PCR Mix 3.0	20 uL	20 uL	20 uL	20 uL
PCR 引物混合液	2 uL	2 uL	2 uL	2 uL
制备的样品	18 uL	2 uL	无	无
样品制备阳性对照	不加	不加	2 uL	不加
样品制备阴性对照	不加	不加	不加	2 uL
超纯水	不加	16 uL	16 uL	16 uL

成份样品（用量1）样品（用量2）阳性对照阴性对照即用型 PCR Mix 3.020 uL20 uL20 uL20 uL PCR 引物混合液2 uL2 uL2 uL2 uL制备的样品18 uL2 uL无无样品制备阳性对照不加不加2 uL不加样品制备阴性对照不加不加不加2 uL超纯水不加16 uL16 uL16 uL成份样品（用量1）样品（用量2）阳性对照阴性对照成份成份成份成份成份成份成份成份成份样品（用量1）样品（用量1）样品（用量1）样品（用量1）样品（用量1）样品（用量样品（用量样品（用量样品（用量1111））））样品（用量2）样品（用量2）样品（用量2）样品（用量2）样品（用量2）样品（用量样品（用量样品（用量样品（用量2222））））阳性对照阳性对照阳性对照阳性对照阳性对照阳性对照阳性对照阳性对照阳性对照阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照即用型 PCR Mix 3.020 uL20 uL20 uL20 uL即用型 PCR Mix 3.0即用型 PCR Mix 3.0即用型 PCR Mix 3.0即用型 PCR Mix 3.0即用型 PCR Mix 3.0即用型 PCR Mix 3.0即用型 PCR Mix 3.0即用型 PCR Mix 3.0即用型 PCR Mix 3.020 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL PCR 引物混合液2 uL2 uL2 uL2 uL PCR 引物混合液 PCR 引物混合液 PCR 引物混合液 PCR 引物混合液 PCR 引物混合液 PCR 引物混合液 PCR 引物混合液 PCR 引物混合液 PCR 引物混合液2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL制备的样品18 uL2 uL无无制备的样品制备的样品制备的样品制备的样品制备的样品制备的样品制备的样品制备的样品制备的样品18 uL18 uL18 uL18 uL18 uL18 uL18 uL18 uL18 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL无无无无无无无无无无无无无无无无无无样品制备阳性对照不加不加2 uL不加样品制备阳性对照样品制备阳性对照样品制备阳性对照样品制备阳性对照样品制备阳性对照样品制备阳性对照样品制备阳性对照样品制备阳性对照样品制备阳性对照不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL不加不加不加不加不加不加不加不加不加样品制备阴性对照不加不加不加2 uL样品制备阴性对照样品制备阴性对照样品制备阴性对照样品制备阴性对照样品制备阴性对照样品制备阴性对照样品制备阴性对照样品制备阴性对照样品制备阴性对照不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加不加2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL2 uL超纯水不加16 uL16 uL16 uL超纯水超纯水超纯水超纯水超纯水超纯水超纯水超纯水超纯水不加不加不加不加不加不加不加不加不加16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL16 uL
9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。

过程	温度	时间
预变性	94℃	10分钟
PCR 反应 （35个循环）	94℃	45s
	56℃	45s
	72℃	45s
延伸	72℃	5分

过程温度时间预变性94℃10分钟PCR 反应
（35个循环）94℃ 45s56℃45s72℃45s延伸72℃5分过程温度时间过程过程过程过程过程过程过程过程温度温度温度温度温度温度温度温度时间时间时间时间时间时间时间时间预变性94℃10分钟预变性预变性预变性预变性预变性预变性94℃94℃94℃999444℃℃℃10分钟10分钟10分钟101010分钟分钟分钟PCR 反应
（35个循环）94℃ 45sPCR 反应
（35个循环）PCR 反应PCR 反应PCR 反应PCR 反应PCR 反应PCR 反应
（35个循环）（35个循环）（35个循环）（（（353535 个个个循环）循环）循环）94℃ 94℃ 94℃ 999444℃ ℃ ℃45s45s45s45s45s45s56℃45s56℃56℃56℃56℃565656℃℃℃45s45s45s45s45s45s72℃45s72℃72℃72℃72℃727272℃℃℃45s45s45s45s45s45s延伸72℃5分延伸延伸延伸延伸延伸延伸72℃72℃72℃72℃727272℃℃℃5分5分5分555分分分
10. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 121bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增10. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 121bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增10. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 121bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增10. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 121bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增10. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 121bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增