一.细胞描述
一.细胞描述一.细胞描述甲状旁腺是和甲状腺毗邻的一个重要的内分泌器官，正常人一般是4个，但是每个人由于个体差异不同，具体的数目可能有变异。甲状旁腺主要是分泌甲状旁腺激素。(该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。)
甲状旁腺是和甲状腺毗邻的一个重要的内分泌器官，正常人一般是4个，但是每个人由于个体差异不同，具体的数目可能有变异。甲状旁腺主要是分泌甲状旁腺激素。(该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。)二.细胞特性
二.细胞特性二.细胞特性（1）来源：细胞来源于人正常甲状腺旁腺组织。
（1）来源：细胞来源于人正常甲状腺旁腺组织。（2）细胞鉴定：PTH免疫荧光染色为阳性。
（2）细胞鉴定：PTH免疫荧光染色为阳性。（3）经鉴定细胞纯度高于90%。
（3）经鉴定细胞纯度高于90%。（4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
（4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。（5）细胞生长方式：梭形，多角形细胞，贴壁培养。
（5）细胞生长方式：梭形，多角形细胞，贴壁培养。三.推荐培养基
三.推荐培养基三.推荐培养基推荐使用SAIOS原代上皮细胞培养体系（货号：PM-001）作为体外培养原代甲状腺旁腺细胞的培养基。
推荐使用SAIOS原代上皮细胞培养体系（货号：PM-001）作为体外培养原代甲状腺旁腺细胞的培养基。推荐使用SAIOS原代上皮细胞培养体系（货号：PM-001）作为体外培养原代甲状腺旁腺细胞的培养基。名称 | 体积 | 浓度 | 保存条件 |
原代上皮细胞基础培养基 | 500ml | 1× | 4℃、避光 |
原代上皮细胞培养添加剂 | 5ml | 100× | -20℃、避光 |
胎牛血清（FBS） | 10ml | 终浓度2% | -20℃、避光 |
双抗（青霉素/链霉素，P/S） | 5ml | 100× | -20℃、避光 |
名称
体积
浓度
保存条件
原代上皮细胞基础培养基
500ml
1×
4℃、避光
原代上皮细胞培养添加剂
5ml
100×
-20℃、避光
胎牛血清（FBS）
10ml
终浓度2%
-20℃、避光
双抗（青霉素/链霉素，P/S）
5ml
100×
-20℃、避光
名称
体积
浓度
保存条件
名称
名称
名称体积
体积
体积浓度
浓度
浓度保存条件
保存条件
保存条件原代上皮细胞基础培养基
500ml
1×
4℃、避光
原代上皮细胞基础培养基
原代上皮细胞基础培养基
原代上皮细胞基础培养基500ml
500ml
500ml1×
1×
1×4℃、避光
4℃、避光
4℃、避光原代上皮细胞培养添加剂
5ml
100×
-20℃、避光
原代上皮细胞培养添加剂
原代上皮细胞培养添加剂
原代上皮细胞培养添加剂5ml
5ml
5ml100×
100×
100×-20℃、避光
-20℃、避光
-20℃、避光胎牛血清（FBS）
10ml
终浓度2%
-20℃、避光
胎牛血清（FBS）
胎牛血清（FBS）
胎牛血清（FBS）10ml
10ml
10ml终浓度2%
终浓度2%
终浓度2%-20℃、避光
-20℃、避光
-20℃、避光双抗（青霉素/链霉素，P/S）
5ml
100×
-20℃、避光
双抗（青霉素/链霉素，P/S）
双抗（青霉素/链霉素，P/S）
双抗（青霉素/链霉素，P/S）5ml
5ml
5ml100×
100×
100×-20℃、避光
-20℃、避光
-20℃、避光四.运输和保存
四.运输和保存四.运输和保存（1）冻存细胞：1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
（1）冻存细胞：1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）复苏好的活细胞：T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
（2）复苏好的活细胞：T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。细胞接收后的处理：
细胞接收后的处理：细胞接收后的处理：（1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
（1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。（2）请在4或5x显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
（2）请在4或5x显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。（3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
（3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。（4）注意：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。
（4）注意：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。细胞处理：
细胞处理：细胞处理：（1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8mL完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
（1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8mL完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。（2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
（2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4mL含10%FBS的培养基来终止消化。
2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4mL含10%FBS的培养基来终止消化。3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。（3）细胞冻存：收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
（3）细胞冻存：收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面以T25瓶为例：
下面以T25瓶为例：下面以T25瓶为例：（1）细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL。
（1）细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL。（2）1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1mL冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
（2）1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1mL冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。（3）将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存，同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
（3）将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存，同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
