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B16细胞培养/B16细胞株复苏/B16细胞系传代/B16细胞冻存/B16小鼠黑色素瘤细胞

价格：￥1

品牌：Bovols

产地：国内

最新更新日期：2022-08-08 17:38

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B16细胞培养/B16细胞株复苏/B16细胞系传代/B16细胞冻存/B16小鼠黑色素瘤细胞
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细胞英文(简称）	B16
细胞名称	B16小鼠黑色素瘤细胞
背景资料	该细胞源于C57BL/6J小鼠黑色素瘤，可以产生黑色素，同基因小鼠体内移植可成瘤
细胞来源	JCRB
代次	P3
规格	T25
细胞数	1x10^6 cells
生物安全级别	2
组织来源	黑素瘤
细胞形态	贴壁；成纤维细胞样
细胞活力	95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测	细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件	DMEM+10% FBS（货号：C2056-1A）+1% P/S；37℃，5% CO2
传代方法	建议1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件	无血清细胞冻存液（货号：S002）

培养操作说明
复苏：
1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速将其置入 37℃水浴中解冻直至冻存管中无结晶，75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3. 弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；

传代：
（1）贴壁细胞：
1. 细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；
3. 弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，按1:2 比例进行分瓶传代，补加培养基后放入 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；
（2）悬浮细胞:
待细胞达到1x10^6/ml左右可按照以下方法换液培养或传代。
方法①：收集细胞，1000rpm 离心 5min，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀，将细胞悬液按 1：2 到 1：3的比例分到含培养基的新瓶中。
方法②：竖立放置培养瓶，细胞沉淀后弃去上半量培养基，将细胞悬液按 1：2 到 1：3 的比例分到含培养基的新瓶中。

冻存：
1. 离心收集细胞并进行计数(参考离心条件：1000rpm，5 min)。彻底移去离心管中的上清液；
3. 加入适量的无血清细胞冻存液（EK-Bioscience 货号：S002）于离心管中，调整细胞浓度至1~5×10⁶cells/mL。轻柔混匀，制成细胞冻存悬液；
4. 将离心管中的细胞冻存悬液分装于已标示完全的冻存管中；
5. 直接将含细胞悬液的冻存管放入-80℃冰箱，长期冷冻保存或转入液氮。

细胞收到处理方法
T25 培养瓶
收到细胞后检查外包装及细胞培养瓶是否完好，如有破损漏液等问题，请即时联系。正常请进行以下操作：
1. 75%酒精棉球擦拭 T25 细胞培养瓶外部。
2. 将细胞放入 37 度培养箱中预温 3-4 小时后再做处理，以稳定细胞状态。
3. 显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40×,100×,200×各一张）前三天照片为重要售后依据，不提供或未拍照默认收到
状态良好。

①贴壁细胞：若细胞密度低于 80%，无菌操作去掉培养基。加入准备的 5-6ml 培养基放 37 度培养箱培养，待细胞密度达到 80%以上进行传代。密度 80%以上，可以将细胞传代处理。

②悬浮细胞：将瓶内所有培养基离心收集，重悬计数根据密度进行分瓶，密度在 3-5x10^5/ml 为宜。

15ml 离心管
75%酒精棉球擦拭 15ml 离心管外部去封口膜，将15ml 细胞悬液均匀接种到 2 个 T25 规格培养瓶，第二天观察细胞状态，根据密度进行换液或分瓶。

2ml 冻存管
收到细胞后，检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等问题，请即时联系。正常请进行以下操作：将细胞取出转移至液氮或-80度冰箱保存，建议尽早复苏。复苏第一管如有活性状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。

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