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RNA pull-down/检测RNA与其结合蛋白相互作用

价格：¥7000

最新更新日期：2021-06-04 13:32

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湖南普拉特泽生物科技有限公司

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产品属性

提供商	真实实验商-普拉特泽生物

服务名称	RNA pull-down/检测RNA与其结合蛋白相互作用

产品说明

应用简介
RNA分子能够与其他生物分子，如蛋白质、DNA和RNA，发生广泛的相互作用，从而以大分子复合物的形式存在于细胞及生物体中，其中，RNA-蛋白质复合物是RNA存在以及发挥功能的重要形式之一。RNA pull-down是检测与RNA（如 miRNA、lncRNA）相互作用的未知蛋白的重要技术之一。

RNA pull-down
首先标记 RNA（如生物素探针标记 RNA），将其与细胞裂解液共同孵育，形成 RNA-蛋白
质复合物，分离复合物得到蛋白质，通过蛋白免疫印迹（western blot）或质谱（mass
spectrometry）检测蛋白。

实验方法
Step1：生物素探针标记RNA的制备
Step2：RNA抽提
Step3：细胞裂解
Step4：磁珠预处理
Step5：RNA与磁珠结合
Step6：RNA 与蛋白相互作用
Step7：蛋白的检测

实验流程

案例展示

Samples were normalized by volume. L = lysate load; FT = flow-through, E = eluate.

技术总结
1. RIP反应体系中的试剂和抗体中均需保证无RNase；
2. 磁珠与带标签的RNA要充分混合，可优化孵育的温度、时间以及RNA的含量等。

结果分析
根据Western blotting检测结果可知带标记的AR 3´-UTR RNA可以特异性的结合HuR蛋白。

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