产品介绍:本产品为阳离子聚合物类型转染试剂,具有安全性高、细胞毒性小、操作简单、转染效率高等特点。产品信息:| 产品名称 | 货号 | 规格 | 储存条件 |
| PEI转染试剂 | GE-20001-1 | 1ml | 4oC |
其他本试剂盒未提供但需用的重要试剂和组分:培养基;胎牛血清;使用说明:请详细阅读使用说明后再开始相关实验。(下述步骤以6孔板为例)1.提前一天进行细胞铺板,使转染时细胞密度达到80%左右;- 转染前1-4小时去除原有培养基,每孔加入2.4ml新鲜完全培养基(37℃预热,抗生素和血清不影响转染效率);
- 根据下表体系,在不含血清和抗生素的培养基中配制A/B液,充分吹打混匀:
| A | B |
| DNA | 3μg | PEI | 3μl |
| 培养基 | 127μl | 培养基 | 127μl |
- 将B液加入A液中,轻轻吹打混匀,室温静置30min;
- 将混合液逐滴加入到细胞中,前后左右轻轻摇晃混匀,放入37℃培养箱培养;
- 转染后16-20h,去除原有培养基,每孔加入2-3ml新鲜完全培养基(37℃预热);
- 若质粒可表达荧光蛋白,转染后24h可观察到荧光信号,大部分细胞在72h表达达到高峰。
常见问题及提示:·细胞传代及换液所用PBS和培养基需恢复常温或37℃预热。
·不同细胞转染时,DNA与PEI比例可在1:1至1:5之间优化,从而提高转染效率。
·转染后可不更换培养基,但若因细胞密度等原因导致转染后细胞状态变差,建议在转染后16h更换新鲜培养基。
·不同培养体积对应转染体系见下表:
| 培养器皿 | 培养液(ml) | DNA(μg) | PEI(μl) | 稀释体积(μl) |
| 96孔板 | 0.1 | 0.2 | 0.6 | 10 x 10 |
| 48孔板 | 0.3 | 0.5 | 1.5 | 40 x 40 |
| 24孔板 | 0.5 | 1 | 3 | 60 x 60 |
| 12孔板 | 1.3 | 1.5 | 4.5 | 100 x 100 |
| 6孔板 | 2.4 | 3 | 9 | 127 x 127 |
| 10cm皿 | 7.25 | 20 | 60 | 726 x 726 |
| 15cm皿 | 20 | 56 | 168 | 2000 x 2000 |
数据展示:
图:所示细胞按照本说明书进行GFP质粒转染,质粒转染16小时后荧光显微镜下拍照记录转染效果。