研究基因的功能，科研工作者通常从两方面着手：功能获得性和功能丧失性。而RNAi技术就是功能丧失性研究的一种。它是正常生物体内抑制特定基因表达的一种现象，当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA（dsRNA）时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默。它是研究转录后调控的有效工具，可用于功能基因组研究以及基因治疗等临床应用。
近年来，RNAi已成为研究基因功能不可或缺的工具。其应用领域已经从基因组学研究逐步扩展到医学领域并作为基因治疗手段。RNAi作为这么重要的分子生物学技术，其原理如何？如下图所示：外源dsRNA进入细胞后在Dicer酶的作用下产生双链siRNA，双链siRNA解旋后，其反义链和多种核酸酶形成了沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)，RISC具有结合和切割mRNA的作用，从而介导RNA干扰的过程。


根据RNAi的作用机制，RNAi实验的研究步骤大体分为4步，详见下图：



除了化学合成siRNAs外，博恩生物可以提供Vector-based shRNAs构建、导入细胞和抑制效果验证服务，功能验证服务需要根据客户的实验需求进行现场评估。RNAi的效应分子是siRNA。不管您选择什么干扰方式，最终均会形成siRNA，然后与RISC多蛋白复合物组装成有活性的RISC，发挥基因沉默功能。*shRNA(short hairpin RNA)，即短发卡RNA，是可以clone至表达载体并表达siRNA双链的RNA分子；siRNA(small interfering RNA)，即小干扰RNA，是21-23nt的双链RNA复合物，每条链的3’端有2-3个突出的非配对碱基且3’端为羟基，5’端为磷酸，这个结构具有能被Rnase Ⅲ样活性的核酸酶识别切割的特征，从而引发高度保守的Dicer 家族的RNaseⅢ的识别作用进而特异切割dsRNA产生基因沉默作用。下面是siRNA(上图)和shRNA(下图)的结构示意图：




siRNA与shRNA都可以有效沉默或抑制目标基因的表达，但是作用机制还是有一些区别的，具体内容详见下图：


siRNA和shRNA的区别：



6. 通过合适的阳性对照优化转染和检测条件
对大多数细胞，看家基因是较好的阳性对照。将不同浓度的阳性对照的siRNA转入靶细胞（同样适合实验靶siRNA），转染48小时后统计对照蛋白或mRNA相对于未转染细胞的降低水平。过多的siRNA将导致细胞毒性以至死亡。
7. 通过标记siRNA来优化实验
荧光标记的siRNA能用来分析siRNA稳定性和转染效率。标记的siRNA还可用作siRNA胞内定位及双标记实验（配合标记抗体）来追踪转染过程中导入了siRNA的细胞，将转染与靶蛋白表达的下调结合起来

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