荧光素酶报告基因技术简介:
Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence),并可通过荧光测定仪设备对luciferin氧化过程中释放的生物荧光进行检测,常应用于启动子转录活性调控及miRNA靶基因验证等方向研究。荧光酶报告基因检测实验流程图:
技术服务流程:①合成或扩增目的片段并亚克隆至目标荧光素酶报告基因载体;
②构建转录因子表达载体或合成相应mimicsl,均设置相应对照;
③培养目的细胞并接种于孔板中,将报告基因质粒与转录因子表达质粒或相应mimics共转染细胞。
④荧光素酶检测荧光强度,并与空载对照比较;
⑤分析数据并整理完整实验报告客户提供:①启动子转录活性调控:提供转录因子名称及ID、靶基因名称及ID;
②miRNA靶基因验证:提供miRNA名称、物种信息、靶基因名称及ID;
③待测目的细胞,如无特殊要求默认使用293T细胞;
④如有基因模板或构建好的转录因子表达载体,可以提供
实验结果交付:①原始实验结果数据及荧光值分析;
②可按客户要求提供构建好的载体;
③详细实验报告,含所需试剂耗材、仪器设备、操作过程