原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的
碱基序列,将有
放射性或非放射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对,结合成专一的
核酸杂交分子,经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件:组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的
核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的
标记物 。
RNA原位核酸杂交又称RNA
原位杂交组织化学或RNA
原位杂交。该技术是指运用
cRNA或
寡核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是:在细胞或组织结构保持不变的条件下,用标记的已知的RNA核苷酸片段,按
核酸杂交中
碱基配对原则,与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交),所形成的
杂交体 (Hybrids)经
显色反应后在
光学显微镜或
电子显微镜下观察其细胞内相应的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位杂交技术 经不断改进,其应用的领域已远超出DNA原位杂交技术。尤其在
基因分析和诊断方面能作定性、定位和
定量分析,已 成为最有效的
分子病理学技术,同时在分析低丰度和罕见的mRNA表达方面已展示了
分子生物学的一重要方向。
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