淀粉磷酸化酶(SP)测试盒_可见分光光度法测定方法:可见分光光度法
产品规格:50管/48样
储存条件:低温保存
注 意:正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:淀粉磷酸化酶(Starch Phosphorylase,SP)是淀粉代谢过程唯一的可逆反应酶,既可催化淀粉的合成,也可催化淀粉的分解。在高等植物中,淀粉磷酸化酶(合成方向)主要存在于质体中,负责延长淀粉的α-1,4-葡萄糖链的非还原末端;淀粉磷酸化酶(分解方向)主要存在于细胞质基质中,催化淀粉中的 α-1,4-糖苷键磷酸解产生葡萄糖-1-磷酸,负责葡萄糖链的磷酸解,是淀粉代谢过程中的关键酶。在植物体中,淀粉磷酸化酶分解方向的底物无机磷浓度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸浓度几乎高了两个数量级,一般认为淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解,因此,分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要测定意义。测定原理:淀粉磷酸化酶催化淀粉中的α-1,4-糖苷键与无机磷反应产生葡萄糖-1-磷酸,葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖变位酶的作用下产生葡萄糖-6-磷酸,并在 6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化下还原NADP+产生 NADPH,使 340nm 下吸光值增加。需自备的仪器和用品:紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制:提取液:液体100mL×1 瓶,4℃保存;试剂一:液体50mL×1 瓶,4℃保存;试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 3mL 水溶解,用不完的试剂分装后-20℃保存;试剂三:粉剂×1 支,-20℃保存;临用前加入 3mL 水溶解,用不完的试剂分装后-20℃保存。
测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零;
2、 工作液的配制:临用前将试剂一、试剂二、试剂三按照每个样本 850μL:50μL:50μL 的比
例混合,临用前配制,半小时内使用。
3、 在 1mL 石英比色皿中加入 50μL 样本和 950μL 工作液,立即混匀,记录 340nm 处 1min 时的吸光值 A1 和 6min 时的吸光值 A2,计算 ΔA=A2-A1。