酵母双杂交文库

自1989年Field等人建立了第一个基于酵母的细胞内检测蛋白相互作用的系统以来，酵母双杂交系统已经越来越多的应用于鉴定新的蛋白与蛋白相互作用、鉴定蛋白级联底物以及鉴定突变对蛋白与蛋白结合的影响等。有文献统计，目前已知的蛋白质相互作用至少有一半是通过酵母双杂交实验发现的！

但是很多科研工作者都为酵母双杂文库中假阳性比较高的问题而烦恼着。赛拓生物结合多年构建文库的经验，在现有酵母双杂交文库构建流程（CLONTECH专利的BD Matchmaker^TM library）基础上加入独特步骤，使文库中高丰度表达基因明显降低，从而使筛选时假阳性率明显降低，为您的科研提供更多的便利！

酵母双杂交文库技术指标：

1、库容量≥10⁶；

2、文库滴度≥10⁷cfu/ml；

3、插入片段平均大于1kb（该数据以人类样本构建酵母双杂文库的结果为参照，如样品

物种不同，且无参考数据，则我们不作出承诺）；

4、减低高丰度表达基因10-100倍。

技术服务内容：

A、均一化酵母双杂cDNA文库

总RNA提取、纯化→LD PCR 合成cDNA→cDNA均一化→均一化cDNA产物与线性化的AD质粒共转化于酵母感受态（真核生物同源重组修复）→所有转化液涂于40-100块15cm平板→计数文库→效价→集合所有克隆得到最终文库。

B、普通酵母双杂cDNA文库

总RNA提取、纯化→LD PCR 合成cDNA→cDNA产物与线性化的AD质粒共转化于酵母感受态（真核生物同源重组修复）→所有转化液涂于40-100块15cm平板→计数文库效价→集合所有克隆得到最终文库。

材料要求：

为客户构建指定的酵母双杂交cDNA文库，由客户提供组织、细胞或总RNA。

服务完成时提供：

A、详细实验报告

B、该酵母文库甘油冻存管

服务周期：获得合格的总RNA后，45个工作日

均一化cDNA文库

均一化cDNA文库是克服基因转录水平上巨大差异给文库筛选和分析带来障碍的有效措施，有利于研究基因的表达和序列分析。我们基于双链特异性核酸酶(Duplex-Specific Nuclease, DSN)的先进cDNA文库均一化技术，能减低高丰度表达基因100倍以上，有效富集低丰度表达基因，从而降低冗余率。

文库特点：

1、材料用量少，只需1ug总RNA；

2、无需反复杂交过程，均一化程度高；

3、均一化后平均插入片断大小无明显变化；

4、均一化后，减低高丰度表达基因10-100倍。

材料要求：组织（100～200mg）、细胞（>10⁶）或总RNA (>1ug )，请务必保持样品新鲜，RNA 无任何降解，植物材料应避免过老的组织，尽量用柔嫩部位，以确保文库质量。同时请尽量提供物种基因组背景资料信息，如：基因组大小，基因平均长度，预计表达的基因数量等等。

提供结果：

1、产物电泳图谱及均一化前后管家基因对比图；

2、文库连接液，保存在-20℃；

3、文库评价数据，包括库容量，插入片段平均长度，重组效率， cDNA完整性评价等；

4、包含实验流程、材料、方法等在内的完整的实验报告。

服务周期：得到合格的总RNA后25个工作日

作为国内cDNA文库构建的主流服务供应商，在长期稳定的实验服务过程中积累了丰富的经验，我们已经成功构建的cDNA文库涉及如下材料：

动物：

人、大鼠、小鼠、猪、牛、蟹、鲫鱼、多宝鱼、壁虎、昆虫、线虫、原生动物等。涉及组织部位包括肾脏、脑、腮、脾、肠、心脏、肝脏等以及各种培养的细胞。

植物：

拟南芥、水稻、棉花、小麦、黄瓜、短柄草、油菜、地瓜、银杏、茶、槟榔、椰子、木薯、百合、土豆、紫菜等。涉及组织部位包括整株小苗，不同发育时期的种子、胚、胚乳，不同发育时期的花、雄蕊、雌蕊，不同发育时期的顶端分生组织，叶、根尖、穗等。

多种细菌、动物病毒等。

SMART cDNA文库

以总RNA为模板，用SMART方法在体外反转录成cDNA，与适当质粒载体连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织或细胞的cDNA文库。cDNA文库中获得的是已经经过剪接、去除了内含子的cDNA。

文库特点：

1、材料用量少，只需1ug总RNA；

2、采用Clonetech SMART专利技术，技术成熟，全长比例高。

材料要求：组织（100～200mg）、细胞（>106）或总RNA (>1ug )，请务必保持样品新鲜，RNA 无任何降解，植物材料应避免过老的组织，尽量用柔嫩部位，以确保文库质量。同时请尽量提供物种基因组背景资料信息，如：基因组大小，基因平均长度，预计表达的基因数量等等。

提供结果：

1、产物电泳图谱；

2、文库连接液，保存在-20℃；

3、文库评价数据，包括库容量，插入片段平均长度，重组效率， cDNA完整性评价等；

4、包含实验流程，材料，方法等在内的完整的实验报告。

服务周期：得到合格的总RNA后25个工作日内。

作为国内cDNA文库构建的主流服务供应商，在长期稳定的实验服务过程中积累了丰富的经验，我们已经成功构建的cDNA文库涉及如下材料：

动物：

人、大鼠、小鼠、猪、牛、兔子、鹅、鸡、斑马鱼、鲫鱼、鲤鱼、中华绒螯蟹、多宝鱼、海鞘、对虾、蟹、壁虎、天牛、昆虫、线虫、原生动物等。涉及组织部位包括肾脏、脑、腮、脾、肠、心脏、肝脏等以及各种培养的细胞。

植物：

拟南芥、水稻、棉花、小麦、油菜、盐藻、地瓜、黄瓜、短柄草、银杏、菊花、荔枝、茶、槟榔、椰子、木薯、百合、土豆、紫菜。涉及组织部位包括整株小苗，不同发育时期的种子、胚、胚乳，不同发育时期的花、雄蕊、雌蕊，不同发育时期的顶端分生组织，叶、根尖、穗等。

多种细菌、动物病毒等。