SDS细胞裂解液（带抑制剂）
产品描述
SDS细胞裂解液（带抑制剂）是一种比较强烈的细胞组织裂解液，通过阴离子去垢剂SDS促进细胞膜的崩解，特别适用于膜蛋白或者细胞骨架蛋白等难溶蛋白的溶解，有利于膜蛋白，胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白及细胞核转录因子的提取。本产品具有有强烈的蛋白变性作用，不能用于非变性蛋白方面的研究。本产品裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、染色质免疫共沉淀 (chromatin immunoprecipitation，ChIP)等。
订购信息产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
SDS细胞裂解液(带抑制剂） | AP01L065 | 100 mL | 218 |
产品组分| 产品编号 | 产品组成 | 包装规格 |
| AP01L065 | SDS细胞裂解液 | 100 mL |
| 磷酸酶抑制剂 | 2*1 mL |
| PMSF | 1 mL |
| 产品说明书 | 一份 |
保存方法 裂解液4℃保存，其余-20℃保存，保质期一年。
使用方法1. 对于培养细胞样品(1) 融解SDS细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
(2) 细胞裂解
对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2秒后，细胞就会被裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10min。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150~250μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多，必需分装成50~100万细胞/管，然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。具体SDS细胞裂解液的使用量参照表1.
(3) 充分裂解后，10000~14000rpm离心3~5min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。
2. 对于组织样品：
(1) 把组织剪切成细小的碎片。
(2) 融解SDS细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
(3) 按照每20毫克组织加入150—250μL裂解液的比例加入裂解液，如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。具体SDS细胞裂解液的用量参照表1。
(4) 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。
(5) 充分裂解后，10000~14000rpm离心3~5min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。
注意事项1. 用SDS细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定蛋白浓度。
2. 通常6孔板每孔细胞加入150μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μL或250μL。如果用于ChIP，建议6孔板每孔细胞至少加入200μL裂解液。
3. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
表1:SDS细胞裂解液的使用量| 样品种类 | 样品来源 | 收获细胞数 | RIPA用量 | 可制备样品数 |
| 细胞 | 6孔板 | 2.5*106 | 150-250μL | 400-600 |
| 60mm培养板 | 5.2*106 | 300-500μL | 200-300 |
| 90mm培养板 | 12.2*106 | 500-1000μL | 100-200 |
| 25cm2培养瓶 | 5*106 | 300-500μL | 200-300 |
| 75cm2培养瓶 | 2*107 | 1000-2000μL | 50-100 |
| 组织 | 20mg组织块 | | 150-250μL | 400-600 |
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