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小鼠睾丸间质细胞TM3

价格：￥1680

品牌：钦胜生物

产地：中国美国

最新更新日期：2022-08-13 05:46

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上海钦胜生物科技有限公司

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公司：上海钦胜生物科技有限公司

联系人：余超

产品属性

产品说明

小鼠睾丸间质细胞TM3操作详细步骤

1.细胞复苏
1.1 离心法
1.1.1 准备一个T25 的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支15ml
离心管，离心管中加入4-5ml 细胞完全培养基。
1.1.2 取出细胞冻存管，在37 度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安
全柜。
1.1.3 将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，1000 转离心5 分钟。
1.1.4 倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。
1.1.5 将重悬好的细胞转移到T25 细胞培养瓶，补充培养基到8ml 左右，十字摇晃，将
细胞铺匀后放入培养箱培养。
1.2 不离心法
1.2.1 准备一个T25 的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，培养瓶中加
入8ml 左右培养基。
1.2.2 取出细胞冻存管，在37 度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安
全柜。
1.2.3 将细胞悬液转移到加有培养基的培养瓶中，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱
培养，接种16 小时后更换培养基。
2.小鼠睾丸间质细胞TM3传代
2.1 准备细胞完全培养基，细胞培养瓶，胰酶（
0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。
2.2 弃上清，并加2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞1-2 次。
2.3 加入1ml 胰酶，室温或者37 度消化，直到细胞成片脱落，加入3-4ml 完全培养基终
止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。（注意：消化时间与
所用胰酶效价，消化时候细胞密度以及温度等因素有关，建议第一次消化时候，多在显微
镜下观察，以找到最佳消化时间）
2.4 收集细胞悬液，1000 转离心5 分钟，弃上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细
胞团弹散后加入培养基混匀。
2.5 将重悬好的细胞按比例分装至T25 细胞培养瓶，补充培养基到8ml 左右，十字摇晃，
将细胞铺匀后放入培养箱培养。
3.小鼠睾丸间质细胞TM3冻存
3.1 准备细胞冻存液，细胞冻存管，胰酶（
0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。
3.2 弃上清，并加2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞1-2 次。
3.3 加入1ml 胰酶，室温或者37 度消化，直到细胞成片脱落，加入完全培养基终止消
化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。
3.4 收集细胞悬液，1000 转离心5 分钟，弃上清。
3.5 加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度0.8-1.5×106细胞/ml。
3.6 将冻存管放入程序降温盒，并放到-80℃冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。
4.小鼠睾丸间质细胞TM3注意事项
4.1 建议收到细胞后先用我们配套的培养基和血清。收到活细胞的客户培养瓶中的培养
基可回收使用，保存在4 度可使用一周。
4.2 不同实验室操作上会有些许差异，为了避免细胞不适应，请先按照说明书推荐的方
法和操作步骤培养，待细胞冻存后可根据自己的习惯操作看细胞是否能够适应。
4.3 建议收到细胞后，前几代及时冻存一些细胞，并最好是可以多冻存几个批次。