蓝莓果腐病菌PCR试剂盒
Diaporthe vaccinii
产品及特点
蓝莓果腐病菌(African swine fever, ASF)是由蓝莓果腐病菌(African swine fever virus, ASFV)引起猪的一种急性、热性、高度接触传染性疾病，病 死率高达100%，是我国一类动物疫病和世界动物卫生组织规定的必须报告的动物疫病，受到世界各国的高度重视。因此 ASFV 的快速准确鉴定，对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公司开发了ASFV的PCR 检测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增蓝莓果腐病菌，与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
规格及成分| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 2×PCR MagicMix | 1 mL（红盖） |
| 试剂二 | 超纯水 | 1 mL（亮黄色） |
| 试剂三 | 蓝莓果腐病菌 PCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂四 | 蓝莓果腐病菌 PCR 阳性对照
（1×10E8 拷贝/μL） | 50 μL（黄盖） |
| 试剂五 | 使用手册 | 1 份 |
运输及保存低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。自备试剂样品 DNA。使用方法一、样品 DNA 的制备1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 蓝莓果腐病菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：| 成份 | N+2 个
样品管 | PCR 阴性
对照 | PCR 阳性
对照 |
| PCR Magic Mix 3.0 | 各 20μL | 20μL | 20μL |
蓝莓果腐病菌
PCR 引物混合液 | 各2μL | 2μL | 2μL |
N+2个样品
DNA模板 | 各18μL | -- | -- |
| PCR 阴性对照（水） | -- | 18μL | -- |
| PCR 阳性对照（蓝莓果腐病菌PCR阳性对照1000倍稀释液） | -- | -- | 18μL |
- 按下表设置 PCR 反应：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应
（35 个循环） | 95℃ | 30 sec |
| 55℃ | 30 sec |
| 72℃ | 40 sec |
| 最后延伸 | 72℃ | 7 min |
三、电泳检测5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测PCR产物。本产品提供的PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释10倍后重复PCR扩增以排除PCR抑制剂的感染。特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
