丙-酮酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶微板法)
产品简介：
丙-酮酸(Pyruvicacid，PA)又称2-氧代丙-酸，是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一，可通过乙酰辅酶A和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化，丙-酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用；丙-酮酸和乳酸是糖无氧代谢的产物，科研工作者常将二者一起研究，并用二者的比值推算循环衰竭的程度，丙-酮酸检测可采用乳酸脱氢酶催化法、二硝基-苯-肼法等。二硝-基苯-肼法是比较古老的方法，生成有色物质，易于观察，但易受α-酮酸的干扰，特异性差，操作烦琐，目前首-选方法是乳酸脱氢酶催化法。

丙-酮酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶微板法)其检测原理是在NADH存在条件下，乳酸脱氢酶(LDH)催化丙-酮酸氧化，生成乳酸和NAD+，在弱碱性条件下平衡偏向丙-酮酸氧化为乳酸的方向驱动反应，通过酶标仪测定340nm处NADH吸光度的下降速率，计算出丙-酮酸含量，可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的丙-酮酸含量。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：
1、离心管或小试管
2、蒸馏水
3、水浴锅或恒温箱
4、96孔板
5、酶标仪或自动分析仪

操作步骤(仅供参考)：
1、准备样品：
①血浆、血清、尿液及其他体液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于PA的检测。
③高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的PA，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。

2、配制标准品工作液：取丙-酮酸标准(25mmol/L)0.01ml溶解于0.49ml丙-酮酸标准稀释液，使浓度达到0.5mmol/L，即为标准品工作液-丙-酮酸标准(0.5mmol/L)；4℃避光保存，24h有效。
3、配制PA-LDH显色液(适用于自动分析仪)：取配制好的PA显色液10ml与LDHSolution
0.12ml混匀，即为PA-LDH显色液；4℃避光保存，24h有效。
4、酶标仪测定：按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的PA浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行孔。

室温孵育1min，酶标仪立即测定340nm吸光度，分别为A空白2、A标准2、A测定2，此后每隔1min读1次吸光度，直至读数稳定，分别为A空白x、A标准x、A测定x。

5、自动分析仪测定：样品中的PA浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管，根据实验室的自动分析仪性能，下列参数仅供参考：
分别检测待测样品管吸光度的下降速率(ΔAu/min)和标准管吸光度的下降速率(ΔAs/min)。

注意事项：
1、本法适用于自动分析仪，分别测定管和标准管的吸光度升高速率，计算乳酸的浓度；如
果采用自动分析仪，该120T试剂盒可检测约100次。
2、配制好的PA显色液，4℃保存，36h有效。
3、配制好的PA-LDH显色液，4℃保存，24h有效。
4、如果没有酶标仪也可以使用分光光度计测定，我们推荐采用分光光度计，以使操作系统
误差减小到最少；一次不应检测过多样品，以免因为时间误差而导致结果差异较大。
5、抗凝剂用肝素钠-氟化-钠较好，抗凝血样品置于冰浴中送检，尽快分离出血浆等。
6、草酸抗凝剂对LDH有一定的抑制作用。
7、采用乳酸脱氢酶法检测丙-酮酸时，一般不建议采用微板法，这是由于手工操作差异较大，
尤其是该法对操作时间要求极其严格，操作难以标准化、统一化，检测结果不稳定。