人表皮角质细胞-成人(HEK-a)

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2022-09-05 16:30

上海烜雅生物科技有限公司

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产品说明
人表皮角质细胞-成人(HEK-a)详细信息
传授人表皮角质细胞-成人(HEK-a)细胞培养
细胞培养基本方法
【产品来源】 细胞主要来源ATCC、ScienCell、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学建系

细胞复苏步骤
一、所需仪器:
离心机
生物安全柜
电动移液器
CO2培养箱
倒置显微镜
液氮罐
恒温水浴锅

二、所需试剂:
胎牛血清(FBS
无菌1×PBS pH=7.2
完全培养基

三、所需耗材:
离心管(15ml50ml
T-25细胞培养瓶
一次性无菌移液管(2ml5ml10ml


四、操作步骤:
  1. 将恒温水浴锅中的水预热到37℃
  2. 从液氮罐中取出要复苏的细胞,尽快转入恒温水浴锅中复温,工程中需要不断震荡冻存管以提高复温速率;
  3. 将融化了的冻存管中的用移液管转入一直装有5ml完全培养基的15ml离心管中,充分混匀后,300g离心5min
离心完成后弃去上清,用1ml完全培养基重悬细胞后,转入T-25细胞培养中,再加完全培养基4ml,之后转入CO2培养箱中培养静置。
细胞冻存步骤
一、所需仪器:
-86℃超低温冰箱
离心机
生物安全柜
电动移液器
CO2培养箱
倒置显微镜
液氮罐

二、所需试剂:
胎牛血清(FBS
细胞培养级DMSO
冻存液:80%FBS+20%DMSO
无菌1×PBS pH=7.2
消化液:0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA
isopropanol
三、所需耗材:
离心管(15ml50ml
T-25细胞培养瓶
一次性无菌移液管(2ml5ml10ml
1.8ml冻存管
程序降温盒

四、操作步骤:
  1. 将需要那冻存的细胞从CO2培养箱中取出,在生物安全柜内,打开培养瓶瓶口,吸弃瓶内的培养基;
  2. 向培养内加入无菌1×PBS 3ml,之后水平放置培养瓶,旋转震荡培养瓶,使PBS能够浸润到培养平面上所都的面积,吸弃PBS
  3. 重复步骤2一次,之后向瓶内加入消化液1ml,轻微震荡后放入37℃CO2培养箱中孵育2-4min
  4. 孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起,如还有部分细胞为消化下来,可在生物安全柜内用移液管吸起消化液,吹打培养平面;
  5. 向消化下细胞的培养瓶中加入1ml含血清的完全培养基终止消化,然后将培养瓶中的液体转入15ml离心管中,300g离心5min
  6. 离心完成后,弃上清,用0.5mlFBS重悬细胞,再加入0.5ml冻存液,用移液管充分混匀,之后转入1.8ml冻存管中;
  7. 将冻存管转入填充满isopropanol的程序降温盒中,之后转入-80℃冰箱中过夜降温;
8.第二天,取出降温完成的序降温盒中的冻存管,尽快转入液氮罐中保存。

★★★★★希望这些培养的方法可以帮到您★★★★★

质量可靠,售后有保障
我库细胞近3000种,来源于美国ATCC.细胞都是经过严格质量控制。
冻存细胞时间为5-7个工作日,活细胞为7-15个工作日。

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