谷丙转氨酶/丙氨酸氨基转氨酶(GPT/ALT)测试盒_微量法测定方法:微量法
产品规格:100管/48样
储存条件:低温保存
注 意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
GPT(EC 2.6.1.2)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化氨基酸和酮酸转氨基反应,在氨基酸代谢中具有重要作用。此外,哺乳动物肝细胞GPT活性很高,当肝细胞坏死,GPT释放到血液中,血清GPT活性显著增高。因此,GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。
测定原理
GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应,生成谷氨酸;不仅终止上述反应,苯腙在碱性条件下呈红棕色,可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。
试验中所需的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液:60mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体2.5 mL×1瓶, 4℃保存;
试剂二:液体2.5 mL×1瓶, 4℃保存;
试剂三:液体25 mL×1瓶,4℃保存;
测定步骤- 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至505nm,蒸馏水调零。
- 在EP管或在96孔板中加入下列试剂
| 试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
| 待测样本 | 10 | |
| 煮沸10min的待测样本 | | 10 |
| 试剂一 | 25 | |
| 蒸馏水 | | 25 |
混匀后,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)准确反应20min混匀后,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)准确反应20min混匀,室温(25℃)放置10min,在505nm波长处测各管吸光度A。ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。