脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)测试盒_微量法测定方法:微量法
产品规格:100管/96样
储存条件:低温保存
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义:DHAR存在于细胞质、线粒体和叶绿体中。DHAR催化GSH还原DHA生成AsA和GSSG,调控细胞AsA/DHA比值,是抗坏血酸-谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶。提高植物体内的 DHAR 活性,可提高植物食品中AsA含量,进而提高植物食品的营养品质。测定原理:DHAR催化GSH还原DHA生成AsA,通过测定DHA减少速率,计算DHAR活性。实验中所需仪器及设备:研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、可调式移液器和蒸馏水。试剂组成和配制:试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。试剂二:液体17.5mL×1瓶,4℃保存。试剂三:粉剂×1瓶(棕色),4℃保存。临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解。试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入2.5 mL蒸馏水充分溶解。
DHAR测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到265nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min。
3. 在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL试剂三、20μL试剂四和140μL 试剂二,最后加20μL上清液迅速混匀后于265nm比色,记录30s和150s的吸光值A1和A2,△A=A2-A1。