关于我们: 生化与细胞所基因敲除与转基因小鼠平台 主要提供转基因小鼠、基因敲除小鼠制备、基因及表形分析等相关平台技术支持,并开展相应的科学技术研究。 我们建立的基因敲除小鼠的制备系统,能够从载体构建、ES细胞打靶、克隆筛选、胚胎注射及动物建系各方面提供服务,建立有C57B6及129Sv遗传背景的ES细胞打靶系统。在转基因小鼠的制备上,我们提供C57B6及其它背景的转基因小鼠制备,能够直接提供纯C57B6背景的转基因小鼠。同时我们也提供相关环节的技术服务,包括胚胎操作、细胞培养、载体设计等。我们为全所及外单位服务和技术支持,现任平台负责人为陈蘋博士。 平台提供的服务及相关技术原理: 转基因小鼠模型的建立 利用受精卵原核注射技术,将外源DNA注射到小鼠受精卵细胞核内,外源基因在小鼠基因组中随机插入,建立小鼠基因组中带有外源基因的遗传性小鼠突变模型。 利用这一技术可以研究某些基因的特异性表达(包括表达强度、表达时间、表达部位)对个体的影响,从而研究该基因以及相关基因的功能,常被用于建立人类疾病模型。 常用C57B6,ICR等背景小鼠的受精卵建立转基因小鼠品系,出生的首代转基因阳性的小鼠称为Founder小鼠(F0代),由于Founder小鼠之间在外源基因插入位点和外源基因拷贝数等方面存在不同,因此每个Founder都将被视为一个独立的品系进行繁育,对每个founder品系鉴定之后才能确立并从中建立符合使用目的的品系。 基因剔除小鼠模型的建立 利用DNA同源重组技术和胚胎干细胞(ES细胞)发育全能性的原理,定点改变小鼠基因组的序列和结构,获得特定基因(基因组)被修饰的遗传性小鼠突变模型。利用这一方法可以研究特定基因在小鼠中参与的正常功能,常被用于建立人类疾病模型。 通常以BAC或PCR方法建立打靶载体,在ES细胞培养中进行基因同源重组,经药物感性筛选得到ES单克隆,进行分子筛选得到正确同源重组的克隆。然后将阳性ES克隆显微注射入发育早期的小鼠囊胚腔中,随后移植到假孕小鼠的子宫中,继续发育到个体,即为嵌合体小鼠,嵌合体小鼠和野生型小鼠进行配种,获得由ES细胞来源的带有目的基因修饰的杂合子小鼠,基因敲除不存在多品系的问题,得到的小鼠都源自同一基因修饰。 其它模式生物相关的技术服务
早期囊胚的注射,包括、ES细胞、荧光素等;早期胚胎的体外培养等。 平台服务模式: 转基因小鼠制备 目前我们提供C57B6背景的转基因制备,C57B6是最为普遍使用的标准纯遗传背景之一,直接保证了委托方得到纯净背景的转基因小鼠,免去之后委托方还需进行遗传背景回交纯化(通常一年时间)。同时根据委托方的需求,我们也能提供ICR(远交系)以及其它遗传背景的转基因制备。 1. 欢迎和我们就技术细节和具体需求进行讨论;双方签订技术协作协议(院内)、技术服务合同(院外)。 2. 通常的模式是委托方提供转基因载体,我们进行载体的制备、纯化、及原核注射。 3. 获得F0代小鼠后,我们负责进行基因型鉴定(尾样DNA,PCR鉴定)。 4. 获得F0代阳性转基因小鼠后(PCR鉴定阳性,至少三只),通知委托方领取转基因小鼠。 5. 整个制备周期通常约为3-4月,有时由于在研项目排队、合同签订的延误可能有所延长。 基因敲除小鼠制备 1. 双方就技术细节进行讨论, 并委托方填写委托协议或合同; 2. 平台完成由双方商议确定的技术步骤; 3. 获得阳性基因敲除小鼠后, 通知委托方领取; 4. 制备周期约为12-15个月。 联系我们: 单位:中科院上海生科院生化细胞所基因敲除与转基因小鼠平台 地址:上海市岳阳路320号41号楼527室。邮编:200031 联系人:陈蘋 郭慧 电话:021-54920377,021-54920380 E-mail: Morc@sibs.ac.cn |